20xx年醫(yī)學(xué)專題—雙波長法快速測定蛋白質(zhì)含量-文庫吧
2025-11-05 04:51 本頁面
【正文】 tities.Key words Protein quantit y 。 two colorimet ric 。 Coomassie brilliant blue 考馬斯亮蘭蛋白質(zhì)定量法 ,也被稱為 Bradford本 ,能減少系統(tǒng)誤差。本實(shí)驗(yàn)擬用雙波長代替單波測定法[ 1 ]。該方法具有易開展 ,快速和對蛋白質(zhì)特長 ,并用酶標(biāo)儀代替紫外 可見分光光度計(jì)提高檢異性好 ,所以被廣泛用于蛋白質(zhì)的測定[ 2 ]。但該方測靈敏度。法也有其局限性 ,首先其檢測靈敏度較低 ,只能檢測mg級水平的蛋白質(zhì) 。其次 ,考馬斯亮蘭檢測的線性 1 材料和方法范圍窄 ,在 2～ 10μg/ ml之間 [ 3 ]。鑒于其有上述缺 1. 1 試劑 :考馬斯亮蘭 G 250和結(jié)晶牛血清白蛋點(diǎn) ,是否能通過方法上的改進(jìn) ,拓展考馬斯亮蘭法的白 (購自 Sigma)。其它所用試劑為分析純 ,去離子應(yīng)用范圍。在酸性條件下 ,考馬斯亮蘭染料呈紅色 ,雙蒸水作為溶劑。[2 ]亮蘭染料和考馬斯亮蘭 蛋白質(zhì)結(jié)合物有不同的吸 50ml 95 %乙醇中 ,再加入 100ml的濃磷酸 ( 85 %光系數(shù)。傳統(tǒng)考馬斯亮蘭法利用考馬斯亮蘭 蛋白 W/ V) ,最后加蒸餾水至 200ml ,此染料于 4℃避光結(jié)合物最大吸收波長 595nm時(shí)的吸收度 A來反映可存放 6個(gè)月。臨用前 1∶稀釋。蛋白質(zhì)的濃度 ,而忽略了游離考馬斯亮蘭染料在此 1. 3 吸收光譜測定 :將染料 1∶稀釋并過濾 ,在干波長下也有一定的吸收度。在 EL ISA檢測和 M T T凈試管內(nèi)加入 0. 8ml稀釋好的染料 ,再加入 0. 2ml測定中 ,常利用雙波長法來消除雜吸收的影響從而的待測樣本 ,對照品為蒸餾水 ,反應(yīng)時(shí)間至少 5min ,提高檢測的靈敏度[ 4 ]。酶標(biāo)儀可一次檢測大量標(biāo)但不超過 30min。用紫外 可見分光光度計(jì) (上海3國防科技預(yù)研項(xiàng)目 ( Y5573162)雙波長法快速測定蛋白質(zhì)含量 3but not t he absorbance of 590nm ,and replace t he UV/ V IS spect rophotometer wit h t he microplate au2t he sen
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