【正文】 意外事故(y236。,TUNEL染色：細(xì)胞核固縮有的呈碎片狀，不規(guī)則，大小不一致，呈棕黃色顆粒(kēl236。晚期的凋亡細(xì)胞，清晰可見細(xì)胞核裂解產(chǎn)生的凋亡小體。而細(xì)胞壞死是一種被動(dòng)的細(xì)胞死亡過程，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)常有RNA的損失。,細(xì)胞(x236。表現(xiàn)為細(xì)胞 脹大，胞膜破裂，細(xì)胞內(nèi)容(n232。C孵育(fū y249。)空斑試驗(yàn),第四十八頁，共七十五頁。 37℃ 5%CO2培養(yǎng)18小時(shí)（NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞）； 每孔加終濃度為0.15%的胰酶和0.0125%DNA酶37℃處理30min（消化細(xì)胞和處理掉死亡(sǐw225。f224。nlǐ),將靶細(xì)胞用51Cr標(biāo)記后，再與特異性的IgG抗體結(jié)合，加入K細(xì)胞后即可發(fā)生ADCC效應(yīng)，引起靶細(xì)胞的溶解并釋放51Cr。bāo)功能測定,第三十六頁，共七十五頁。 混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)：混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)或稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)常用于器官移植前的組織配型，以測定受體和供體主要組織相容性抗原(HLA抗原)相容的程度。,補(bǔ)體(bǔtǐ)依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)（CDC）,染料(rǎnli224。 細(xì)胞復(fù)蘇的原理與方法：細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)速度要快，使之迅速通過細(xì)胞最易受損的－5～0℃，細(xì)胞仍能生長，活力受損不大。bāo)。MACS分選柱置于一個(gè)永久性磁場—MACS分選器中，可以將磁力增強(qiáng)1000倍，足以滯留(zh236。nh233。ng)，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細(xì)胞懸浮在分層液中。一、免疫細(xì)胞(x236。吸取分層液液面的細(xì)胞，就可從外周血中分離到單個(gè)核細(xì)胞。)單個(gè)核細(xì)胞懸液在通過尼龍毛柱時(shí)，B細(xì)胞、漿細(xì)胞、單核細(xì)胞和一些輔助細(xì)胞被選擇性粘附于尼龍毛上，而多數(shù)T細(xì)胞則通過尼龍毛柱，這是獲得富含T細(xì)胞群的有效方法。li浮懸在分層界面而不形成E花環(huán)的群則富含B細(xì)胞，而沉降在管底的形成E花環(huán)的細(xì)胞用低滲法處理，使圍繞細(xì)胞周圍的綿羊紅細(xì)胞快速裂解，則獲得純的T細(xì)胞。 目前常用的保護(hù)劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對細(xì)胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞。o),補(bǔ)體(bǔtǐ),第二十七頁，共七十五頁。由于MLC中淋巴細(xì)胞接受同種異型抗原的刺激而發(fā)生活化、增殖，產(chǎn)生種類眾多的細(xì)胞因子，促進(jìn)NK、LAK和CTL等殺傷細(xì)胞(x236。,放射性測定(c232。用計(jì)數(shù)儀分別檢測上清和細(xì)胞沉淀中的cpm，根據(jù)上清中釋放的51Cr的多少，可判斷(p224。ng)率（%） 2(上清cpm—本底cpm) 100% (上清cpm本底cpm)＋( 沉淀cpm本底cpm) 51Cr 特異釋放率（%） 試驗(yàn)釋放率—自然釋放率 100% 最大釋放率－自然釋放率,第四十一頁，共七十五頁。ng)靶細(xì)胞釋放出來的放射性DNA）。,細(xì)胞吞噬(tūnsh236。)25min。ir243。bāo)凋亡,第六十二頁，共七十五頁。根據(jù)(gēnj249。,第六十七頁，共七十五頁。)者為陽性細(xì)胞。 w224。細(xì)胞在內(nèi)源性基因調(diào)控下發(fā)生的主動(dòng)死亡過程，也稱程序性死亡。,（2）原位末端標(biāo)記法（TUNEL）,原理：利用標(biāo)記的dUTP，在TdT作用下結(jié)合DNA斷片的3’末端羥基，顯示斷鏈DNA，提示凋亡 方法：制備組織(zǔzhī)切片 標(biāo)記物結(jié)合 標(biāo)記物顯色 鏡檢,第七十一頁，共七十五頁。)成塊，出現(xiàn)染色質(zhì)沿核膜內(nèi)側(cè)排列的核邊集現(xiàn)象。i)觀察法,（1）普通光鏡檢測 HE染色 甲基綠派諾寧染色：細(xì)胞凋亡是一種細(xì)胞主動(dòng)死亡過程，需要有細(xì)胞內(nèi)蛋白酶的激活，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)常有mRNA表達(dá)的增強(qiáng)。bāo)皺縮 （2）染色質(zhì)邊集 （3）凋亡小體出現(xiàn),第六十一頁，共七十五頁。 壞死（necrosis）：壞死是細(xì)胞受到強(qiáng)烈理化或生物因素作用引起細(xì)胞無序變化的死亡過程。n)試驗(yàn),方法(fāngfǎ)：,抗凝血 + 硝基藍(lán)四氮唑（NBT），37。nɡ xu232。,（2）方法 試驗(yàn)組孔：脾細(xì)胞懸液(淋巴細(xì)胞) ：標(biāo)記的靶細(xì)胞懸液100:1左右； 對照組：單純加標(biāo)記的靶細(xì)胞。n)和計(jì)算,51Cr實(shí)驗(yàn)釋放(sh236。,（1）原理(yu225。)試驗(yàn),第三節(jié) 免疫細(xì)胞(x236。,淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)：刺激