【正文】 　　(7)鉤絲殼屬 (Uncinula)37 / 66　　取榆樹白粉病()和葡萄白粉病()標(biāo)本觀察癥狀特點(diǎn)，并制片鏡檢38 / 66閉囊殼及附屬絲，注意閉囊殼內(nèi)子囊多數(shù)，附屬絲頂端卷曲呈鉤狀或螺旋狀。該菌為害花和果實(shí)，引起花腐和果腐，取制備片 024，鏡檢笄霉的孢囊梗和孢子囊形態(tài)，注意觀察該屬與根霉、毛霉的區(qū)別。注意癥狀特點(diǎn)，特別要注意葉片上病斑的位置，大小、狀態(tài)、顏色，邊緣是否清楚，是否產(chǎn)生灰白色的霉層(特別是葉背面)?挑取馬鈴薯晚疫病菌斜面培養(yǎng)菌制片(或取制備片 008)鏡檢游動(dòng)孢囊梗、游動(dòng)孢子囊和游動(dòng)孢子，注意孢囊梗分枝的特點(diǎn)及游動(dòng)孢子囊的形態(tài)。4．注意保持顯微鏡的潔凈，對(duì)金屬部分要用軟布擦拭，擦鏡頭必須用擦鏡紙，切勿用手或用普通布、紙等，以免損壞鏡頭?！　￡?yáng)性反應(yīng)的細(xì)菌染成紫色，陰性反應(yīng)的染成紅色，注意涂片菌液不能太濃，其次褪色要徹底?！　　　∮美L圖筆蘸碳素黑水照原稿線條描出全部線條輪廓，然后根據(jù)病原菌各部有無顏色，顏色深淺等特點(diǎn)，用黑點(diǎn)的有無及疏密程度點(diǎn)出，使之具有色調(diào)，質(zhì)地及立體之感。方法是用姆指沾銹菌夏孢子懸液自下向上輕輕涂欲接種的小麥葉片，也可先用手指沾水摩擦葉片，使葉表有一層水膜，然后將夏孢子粉抹在上面，以不涂抹孢子懸液或孢子粉的作為對(duì)照。三、孢子萌發(fā)的記載方法孢子萌發(fā)是先吸水膨脹，然后長(zhǎng)出芽管，通常以芽管長(zhǎng)度超過孢子直徑一半(不是正圓形的孢子以短徑為準(zhǔn))作為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，記載萌發(fā)的方法有以下幾種。 2 方法：在潔凈的蓋玻片中央滴玉米大斑病菌孢子懸浮液一滴，注意滴成圓形，大小適當(dāng)，菌懸液濃度以顯微鏡低倍鏡頭每個(gè)視野約 20 個(gè)孢子為宜。 以上分離實(shí)驗(yàn)也可以劃線法進(jìn)行，方法是先取兩付滅菌培養(yǎng)皿，每皿倒入約 15 毫升熔化的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，沿桌面輕輕搖勻，制成平板，然后用移置環(huán)沾取一環(huán)稀釋好的菌懸液，在第一個(gè)培養(yǎng)皿平面培養(yǎng)基的左方長(zhǎng)方形區(qū)內(nèi)劃平行線 5—7 條，再以此移置環(huán)繼續(xù)向右(和左方小區(qū)內(nèi)的幾條平行線成一定角度)劃 5—7 條平行線，依此法劃兩皿，倒置于26—28℃溫箱中培養(yǎng)，1—2 日后挑單個(gè)典型菌落移到斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)待用。分離和培養(yǎng)是植病實(shí)驗(yàn)室最基本的操作技術(shù)之一。 (3)關(guān)緊箱門，打開排氣孔接上電源。 成分：馬鈴薯 200 克 蔗 糖 10 克 瓊 脂 20 克 加水至 1000 毫升 方法：將馬鈴薯洗凈去皮切塊，加水煮沸半小時(shí)，用雙層紗布濾去薯塊，補(bǔ)足水量，加入瓊脂，加熱熔化，再加糖，待完全化后，乘熱用雙層紗布過濾分裝，塞好棉塞高壓滅菌。右手握穩(wěn)刀，從左向右后方斜向切割。常用的方法的概括為挑、刮、撥、撕四種。⑧鐮孢霉屬(Fusarium )大型分生孢子多細(xì)胞，鐮刀型；小型分生孢子單細(xì)胞，橢圓形至卵圓形。分生孢子串生，單胞無色。[亞麻柵銹菌（）引起亞麻銹菌病]。④盤菌引起植物病害大多腐生，少數(shù)寄生。B、無性生殖發(fā)達(dá)，可形成各種形態(tài)的分生孢子，對(duì)植物危害主要是分生孢子侵染。②主要種類A、小叢殼屬 Glomerella子囊殼小，球形，半埋生在子座內(nèi)；子囊棍棒狀，無側(cè)絲；子囊孢子單孢無色，長(zhǎng)橢圓形，稍彎曲。④ 無性世代：非常發(fā)達(dá)，由菌絲形成分生孢子梗和分生孢子。子囊有的單個(gè)散生，有的多個(gè)并列，有的叢生。與園藝植物病害有關(guān)的是接合菌綱、毛霉目、根霉屬。(3)疫霉屬（Phytophthora）①孢子囊在孢囊梗上，孢囊梗無限生長(zhǎng)。(8)鞭毛(Flagellum)的結(jié)構(gòu)是 9+2 型。(7)游動(dòng)孢子具 12 根鞭毛。（2）腐霉屬（Pythium）①腐霉是低等的鞭毛菌，無性繁殖在菌絲頂端形成孢子囊，孢子囊近球形或不規(guī)則形，成熟后一般不脫落，萌發(fā)時(shí)產(chǎn)生游動(dòng)孢子。（3）有性生殖形成接合孢子。分生孢子作用：在一個(gè)生長(zhǎng)季可以反復(fù)發(fā)生，是再侵染的來源，“可以遠(yuǎn)距離傳播”，有的高等子囊菌在一生中僅發(fā)生無性，無有性。② 菌絲白色，大都表生，產(chǎn)生吸器吸取植物營(yíng)養(yǎng)。B、子囊殼散生或聚生在寄主的組織中，子囊內(nèi)具 8 個(gè)子囊孢子。無性世代不發(fā)生。子囊孢子橢圓形，雙胞大小不等，淡色，個(gè)別褐色，可為害植物葉片和果實(shí)。⑤單胞銹菌屬（Uromyces ）冬孢子單細(xì)胞，有柄，頂壁較厚；夏孢子單細(xì)胞，有刺或瘤狀突起。（4）分生孢子盤（acervulus）：菌絲糾結(jié)形成盤狀的子實(shí)體，有的分生孢子盤中央或四周具深褐色的剛毛。 ⑦鏈格孢屬(Alternaria )分生孢子梗深色，頂端單生或串生淡褐色至深褐色、磚隔狀的分生孢子。二、內(nèi)容、材料和方法 徒手制片的方法有整體封藏法、徒手切片法、組織透明制片法和涂抹制片法等多種。(二)徒手切片法 欲觀察受病組織病變，病菌侵入和寄主體內(nèi)擴(kuò)展過程，以及埋生在基物內(nèi)真菌子實(shí)體的形態(tài)結(jié)構(gòu)等，都需將有關(guān)材料切成薄片，進(jìn)行鏡檢，徒手切片是最常用的簡(jiǎn)便易行的方法，不需要特殊的設(shè)備，而且節(jié)省時(shí)間，切成的片子不僅可作臨時(shí)觀察，也可進(jìn)一步制成永久性玻片標(biāo)本。培養(yǎng)基配好后必須經(jīng)過滅菌方能用于分離培養(yǎng)微生物試驗(yàn)，因此培養(yǎng)基的配制和滅菌是植物病理實(shí)驗(yàn)室中最基本的工作，通過本次實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)植病實(shí)驗(yàn)室中常用培養(yǎng)基的配制方法和高壓滅菌鍋的使用方法。 滅菌的方法很多，植病實(shí)驗(yàn)室常用的有干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌兩種方法，一般培養(yǎng)皿、吸管等玻璃儀器用干熱滅菌法進(jìn)行滅菌。 此外，有些培養(yǎng)基在經(jīng)高壓滅菌后，其營(yíng)養(yǎng)成分容易分解而失去使用價(jià)值，此時(shí)可采用間歇蒸氣滅菌法，即將培養(yǎng)基放入高壓滅菌器內(nèi)，加熱至 100℃，保持 1 小時(shí)，每天滅菌一次，連續(xù)進(jìn)行三次，即可達(dá)到滅菌的目的，又不至使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)分解。 白菜軟腐病最易伴生腐生細(xì)菌，分離時(shí)需以病組織接種健康菜幫上，經(jīng)數(shù)次轉(zhuǎn)種予以純化，其純化方法是將菜幫經(jīng)多次換水沖洗后，再用無菌水洗三次，切成適當(dāng)大小，放在15 厘米直徑的培養(yǎng)皿中，菜幫下襯以吸水紙保溫。孢子能否萌發(fā)，萌發(fā)率的高低，萌發(fā)勢(shì)的強(qiáng)弱以及萌發(fā)的方式等既受病菌自身內(nèi)在的因素影響，也受外界環(huán)境條件制約，因此要達(dá)到萌發(fā)試驗(yàn)的目的，必須充分掌握萌發(fā)所需的各種條件，本次實(shí)驗(yàn)主要學(xué)習(xí)孢子萌發(fā)常用的方法，同時(shí)通過實(shí)驗(yàn)理解各種孢子萌發(fā)所需條件不同。 ：玉米瘤黑粉病菌的黑粉孢子。 (二)噴霧法(玉米大斑病)氣流及雨水傳播的病害常用此法接種，將培養(yǎng)好的玉米大斑病的斜面菌種一支，用移植鉤刮于裝有 100 毫升無菌水的三角瓶中，用力振蕩，待孢子洗下后，以紗布過濾，并于濾液中加入 克中性肥皂，即成孢子菌絲懸液，用衛(wèi)生噴霧器均勻噴布在麥苗上。二、繪圖內(nèi)容、材料和方法　　(一) 病原菌形態(tài)圖的繪制　　以點(diǎn)線法繪制黑白圖的步驟和方法　　　　用普通白紙、鉛筆(1H) 起稿，先確定圖幅大小，一般要比制版尺寸大一些，但不能超22 / 66過一倍，制版時(shí)再縮小，有提高原圖質(zhì)量的效果，當(dāng)然如能精良繪制，亦可原圖制版，如在一張圖上繪出幾個(gè)內(nèi)容，如分生孢子梗和分生孢子子囊殼，子囊和子囊孢子，則應(yīng)按圖幅大小求出初稿上各部比例尺寸，其比例大小需按顯微測(cè)微尺度量算出。　　(二) 植物病原細(xì)菌形態(tài)觀察和種類鑒定　　　培養(yǎng)性狀觀察　　取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的馬鈴薯環(huán)腐病菌() ，茄青枯病菌(Burkholderia solanacearum)和白菜軟腐病菌()等，注意觀察菌落顏色、大小、質(zhì)地，是否產(chǎn)生熒光色素等，和植物病原真菌培養(yǎng)菌落有什么根本性的不同?染色反應(yīng)觀察　　(1)革蘭氏染色反應(yīng)　　供試菌種：馬鈴薯環(huán)腐病菌() 和白菜軟腐病菌() ?！　A性品紅染色法（Leifson賴夫生染色法）：的長(zhǎng)方形小格，將載玻片斜放，用移植環(huán)在每小格頂端加一滴菌懸液，流下的菌懸液用紙吸去，干燥后，在第一個(gè)小格加5滴染劑，經(jīng)過5s，10s，15s后，分別在第二、三、四3個(gè)格中加滴染劑，仔細(xì)觀察染劑中有很細(xì)的沉淀物（鐵銹色云霧狀物）產(chǎn)生，當(dāng)?shù)谝?、第二小格已產(chǎn)生沉淀時(shí)，立即用水洗去染劑，室溫下使載玻片干燥，然后直接在油鏡下鏡檢?！　?)腐霉屬(Pythium)　　觀察蔬菜幼苗猝倒病標(biāo)本，注意受害部位和癥狀特點(diǎn)?！　∪「适碥浉?)標(biāo)本，觀察癥狀特點(diǎn)，注意受害甘薯表面是否有白色毛狀物生出?在白色毛狀物中是否有黑點(diǎn)?挑取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的根足霉(帶少許培養(yǎng)基 )制片(或取制備片 022)，鏡檢小黑點(diǎn)是什么器官?注意匍匐枝和假根的形態(tài)，孢囊梗著生的位置，能否見到囊軸?什么形狀?　　毛霉屬(Mucor)　　無匍匐絲與假根，孢囊梗單生，直立，其它形態(tài)同根霉，挑取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的毛霉制片(或取制備片 020)，鏡檢孢囊梗，孢子囊和孢囊孢子，注意和根霉的區(qū)別。自丁香白粉病葉上挑取小黑點(diǎn)制片( 或取核桃白粉病菌制備片 141 或取丁香白粉病菌制備片 109)鏡檢閉囊殼和附屬絲，注意附屬絲頂端有數(shù)回二叉狀分枝，閉囊殼內(nèi)子囊多數(shù)的特點(diǎn)。44 / 66考慮到有些分目的特征難于掌握，界線并不很清楚，還有屬于末定的中間類型，所以不如45 / 66化繁為簡(jiǎn)都?xì)w納入球殼目。三、作業(yè)繪根足霉形態(tài)圖四、思考題　　1．接合菌和鞭毛菌在形態(tài)上有哪些異同點(diǎn)?　　2．毛霉和根霉有什么不同?　　3．試談異宗配合的概念。　　(5)假霜霉屬(Pseudoperonospora)　　觀察黃瓜霜霉病()標(biāo)本，注意為害部位和病狀特點(diǎn)，挑取霉層制片或取制備片 013)鏡檢孢囊梗和孢子囊，注意孢囊梗的分枝特點(diǎn)，與霜霉屬形態(tài)有何異同。學(xué)會(huì)病原物標(biāo)本臨時(shí)玻片的制作方法。不做特殊處理，一般光學(xué)顯微鏡是看不見的，鞭毛上沉積了染劑或銀鹽后才能看到，這是所有鞭毛染色的根據(jù)?！　?二) 病害癥狀圖的繪制　　病害癥狀是植物根、莖、葉、花、果實(shí)等部位的變形、變色或穿孔等特征，這類標(biāo)本多不規(guī)則，繪制時(shí)只求表示出特征就行了，不象病原物形態(tài)圖那樣嚴(yán)格，也不必繪出原稿，再根據(jù)原稿描繪原圖，有的純以線條，有的線點(diǎn)結(jié)合，可根據(jù)自己得心應(yīng)手者繪之，雖然這樣說，但對(duì)初學(xué)者，先構(gòu)劃草圖，再反復(fù)修改推敲是必要的。 ：取切成適當(dāng)大小的白菜幫兩塊、經(jīng)水洗，待水稍干后，以 10%漂白粉溶液作表面消毒，分放在兩個(gè)滅過菌的上下鋪有吸水紙的培養(yǎng)皿中，用酒精擦過的玻璃棒順著白菜幫打三排不穿透的孔穴。 (三)芽管平均長(zhǎng)度 即測(cè)定一定數(shù)目已萌發(fā)孢子的芽管長(zhǎng)度，求其平均值。蓋在盛有少量蒸餾水的皿底上，保溫保濕培養(yǎng)，此法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便，而且適用于大量孢子萌發(fā)測(cè)定。17 / 66平板劃線操作示意圖三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 (一)清潔環(huán)境：分離工作嚴(yán)格說應(yīng)在無菌條下進(jìn)行，無菌室或無菌箱是分離不可缺少的設(shè)施。病、健交接處，除材料新鮮，污染的可能性小外，病原菌的生活力強(qiáng)、比較活躍，容易分離成功。 2 高壓蒸汽滅菌法 高壓蒸汽滅菌法又稱濕熱滅菌，它的原理是利用高壓來提高蒸汽的溫度，達(dá)到滅菌的目的，其操作步驟如下： (1)關(guān)好排水閥門放入清水至標(biāo)度為止，注意水量一定要加足，否則容易造成事故。2 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（NA） 這種培養(yǎng)基主要用于細(xì)菌的分離和培養(yǎng) 成分：牛肉浸膏 3 克 蛋白胨 10 克 蔗糖 10 克 酵母浸膏 1 克 瓊脂 20 克 加水至 1000 毫升 方法：先將瓊脂加熱熔化于大部水中，再將其它各成分用少量水化開加入，調(diào)節(jié) pH至 7，趁熱用雙層紗布過濾，分裝，塞棉塞高壓滅菌。同時(shí)雙手不應(yīng)緊靠身體，而是要活動(dòng)自如。10 / 66 2 刮：對(duì)病部病原體稀少，或用放大鏡也難辯認(rèn)霉層的病害標(biāo)本，可采用兩側(cè)具刀的三角刮針(或可用刀片代替)刮取病原物制片。有的分生孢子盤四周或分生孢子梗之間具有黑色的剛毛。〔黃萎輪枝孢(棉黃萎病菌 )引起棉花黃萎病〕。黑粉菌分類主要以冬孢子的形狀、大小、有無不孕細(xì)胞、萌發(fā)的方式及冬孢子球的形態(tài)等。無性世代不發(fā)生。為害植物主要是無性世代，在分生孢子盤上產(chǎn)生分生孢子。B、黑腐皮殼屬 （Valsa）子囊殼埋生子座基部，有長(zhǎng)頸伸出子座；子囊孢子臘腸狀，單胞無色或暗色。⑤ 有性世代：寄生后期在菌絲的上部形成閉囊殼(小黑點(diǎn))，有附屬絲，便于傳播。在子囊內(nèi)排列的有散生，單列，雙列，并列，螺旋形排列。（3）有性生殖形成接合孢子（不常見）。(4)霜霉科（Peronosporaaceae） ①高等的鞭毛菌，都是植物體上的活體寄生菌，菌絲蔓延在寄生的細(xì)胞間，以吸器伸入寄主的細(xì)胞內(nèi)吸收養(yǎng)分。共 31 條亞纖絲。(4)鞭毛菌大多具有水生習(xí)性，因此只有在高濕、多雨、低洼積水和通風(fēng)透光不好的條件下，侵染植物導(dǎo)致病害。2 / 66與園藝植物有關(guān)的鞭毛菌(1)根腫菌屬（Plasmodiophora）由根腫菌屬的病菌引起的，在病組織內(nèi)這些呈魚卵狀排列的是病菌的休眠孢子囊。④卵孢子壁厚，表面有瘤狀突起。（2）子囊菌的無性繁殖產(chǎn)生分生孢子或孢子器，非常發(fā)達(dá)，形狀多樣，圓形，卵形，棒形，絲狀，鐮刀形(新月形)，蠟?zāi)c形，有單孢，雙孢，多孢。無性繁殖是子囊孢子在子囊內(nèi)芽殖產(chǎn)生芽孢子，芽孢子還可繼續(xù)芽殖。⑧白粉菌分屬依據(jù)：閉囊殼附屬絲的形狀和殼內(nèi)子囊的數(shù)目。D、間座殼屬（Diaporthe）子囊殼埋生在子座基部，梨形或球形，黑色，頂端有短喙?fàn)钔黄?。子囊孢子橢圓形、無色，雙胞大小相等。[棗層銹菌（P. ziziphivulgaris ）引起棗樹銹病]。1－5 半知菌亞門及其所致病害的特點(diǎn)半知菌亞門的主要特點(diǎn)常見的有 4 種：（1）分生孢子梗束（synnema）：呈束狀，基部聚生在一起，頂部分散，著生孢子。引起的