【正文】 球殼目真菌大多是腐生的，其中也有不少是寄生的，以下各屬46 / 66都可引起重要的植物病害?！　?4)叉絲殼屬(Microsphaera)　　取核桃白粉病()和丁香白粉病()標(biāo)本，觀察癥狀特點。實訓(xùn)四子囊菌亞門真菌及其所致病害癥狀觀　　 一、實訓(xùn)目標(biāo)　　通過本次實驗了解子囊菌的形態(tài)特征及分類概況，熟悉該菌所致病害的癥狀特點，以便為子囊菌的分類和病害鑒定打下基礎(chǔ)。孢囊梗 23 根叢生，在假根相反方向從菌絲上產(chǎn)生，一般不分枝，頂生孢子囊，產(chǎn)生大量孢囊孢子，有囊軸，鑼錘形，孢囊孢子單胞，表面有飾紋，接合孢子色深，表面有瘤狀突起?！　?6)盤梗霉屬(Bremia)　　觀察萵苣霜霜霉病()標(biāo)本，注意癥狀特點，挑取病葉上的霉層制片(或取制備片 016)，鏡檢孢子囊梗的形態(tài)，注意分枝末端是否膨大呈盤狀?邊緣是否有小梗?孢子囊的形態(tài)及著生位置如何?　　7)白銹菌屬(Albugo)　　取十字花科白銹病()，注意受害部位，癥狀特點，切取白銹病病葉制片鏡檢(或鏡檢制備片 009—無性，010—有性)，注意孢子囊梗著生的位置，形態(tài)和排列特點，孢子囊的形態(tài)，注意觀察藏卵器內(nèi)卵孢子的數(shù)目，藏卵器壁與卵孢子壁是否愈合，另取該菌無性世代制備片 009，觀察孢子囊梗的形態(tài)，特別要注意分枝特點?！　「鶕?jù)孢囊梗的形態(tài)特點，霜霉目分為腐霉菌科(Pythiaceae)、白銹菌科(Albuginaceae)和霜霉菌科(Peronosporaceae)(見附錄)，該目與植病關(guān)系密切的有以下幾個屬。二、內(nèi)容、材料和方法　　(一)根腫菌綱(Plasmodiophoromycetes) 　　1 根腫菌屬(Plasmodiophora)　　觀察白菜根腫病()的液浸標(biāo)本，注意根腫的特點，然后鏡檢白菜根腫病菌制備片(001)，注意在寄主細(xì)胞內(nèi)能否見到成堆的休眠孢子 ?受病細(xì)胞的大小與正常細(xì)胞有無區(qū)別?是薄壁細(xì)胞受害，還是輸導(dǎo)組織受害 ? 　　2 粉痂屬(Spongospora) 　　觀察馬鈴薯粉痂病()標(biāo)本，鏡檢該病的制備片 (002)，注意馬鈴薯塊莖皮層上形成的瘡痂狀小瘤及寄主細(xì)胞內(nèi)由休眠孢子聚集成多孔的海綿狀圓球。銀鹽沉積法：滴甲液3—5分鐘，用蒸餾水輕輕沖洗甲液，再加乙液，處理30—60秒鐘，立即用蒸餾水輕輕沖洗乙液，空氣中自然干燥后，鏡檢(有人在加乙液后，在燈焰上微加熱，再用水洗)菌體染成深褐色，鞭毛染成褐色，注意鞭毛數(shù)目及著生方式。但是染劑也可以在載玻片上沉積，如果載玻上沉積染劑太多，就會影響鞭毛染色效果?！? 病原物形態(tài)圖的繪制，一般經(jīng)過哪幾個步驟? 如何很好完成這些繪圖步驟? 每一步都應(yīng)注哪些問題? 第三部分微生物病理技能訓(xùn)練實訓(xùn)一 植物病原細(xì)菌觀察一、實訓(xùn)目標(biāo)植物病原細(xì)菌形態(tài)觀察和種類鑒定二、內(nèi)容、材料和方法　(一)植物細(xì)菌病害的簡易診斷　　取水稻白葉枯病新病葉，在病斑病健交界處剪取22 mm 的小塊病組織，放在載玻片上，滴加一滴蒸餾水，蓋好蓋玻片后，立即在顯微鏡下觀察，注意葉組織維管束剪斷處是否有大量的細(xì)菌，呈云霧狀溢出，如將視野調(diào)暗觀察更易見到，按同樣方法用健康組織作鏡檢反證。繪圖時照顧各部分比例是必不可少的，同樣，圖繪完后要注明病害名稱和標(biāo)注圖注。 四、思考題 植物接種常用的方法有哪些? 舉例說明如何根據(jù)病害特點選擇接種方法?2－6 植物病原生物繪圖技術(shù)一、實訓(xùn)目標(biāo) 提高生物繪圖技術(shù)水平，為今后開展病理學(xué)有關(guān)工作奠定較好的基礎(chǔ)。將培養(yǎng)好的白菜軟腐病菌斜面菌種的菌苔以無菌水洗下作成菌懸液。將經(jīng) %升汞表面消毒 3 分鐘并用無菌水洗 3 次的小麥種子，分別播種在兩個花盆內(nèi)，插上標(biāo)牌，注明接種日期，方法病害名稱及接種人姓名，花盆放在室溫下，澆水保濕，遮陰管理，待幼苗出土展開葉子后(大約一周)，觀察并記載根腐病發(fā)生情況。 此外，有些萌發(fā)試驗，如藥效測定等，還需注意記錄芽管的寬度形狀變化以及是否有分枝等。 (四)載片引濕法 此法用于不適于直接在水滴中萌發(fā)的某些真菌。 (二)液滴法 ：小麥根腐病菌斜面菌種。2－4 真菌孢子的萌發(fā) 一、實驗?zāi)康? 欲了解病菌生活力的強(qiáng)弱，生存期的長短，有效傳播距離，抗藥性的大小，生活史，環(huán)境與發(fā)病的關(guān)系以及有些病菌的種類鑒定等，都必須進(jìn)行孢子萌發(fā)試驗。若限于條件實驗只能在普通房間進(jìn)行時，必須對房間進(jìn)行徹底掃除，清潔環(huán)境、搞好衛(wèi)生。 ：稀釋分離法適用于細(xì)菌、土壤菌及產(chǎn)生孢子多的真菌等病原菌的分離，16 / 66本次實驗以白菜軟腐病作為材料進(jìn)行分類離。 (二)分離方法 病原菌分離的方法因材料不同而異，植病實驗室最常見的方法有組織分離法和稀釋分離法兩種。 (8)抽取上述滅菌的培養(yǎng)基，放入 25℃溫箱中，48 小時后不見雜菌生出，便證明培養(yǎng)基已達(dá)到滅菌目的，可以使用。 (2)將要滅菌的培養(yǎng)基、滅菌水等裝入鐵絲籠中，并用牛皮紙蓋好后放入滅菌鍋中，關(guān)上器蓋，旋緊螺旋時，先將每個螺旋旋轉(zhuǎn)到一定程度(不要太緊)，然后再旋緊相對的兩個螺旋，以達(dá)到平衡旋緊，否則易造成漏氣，達(dá)不到徹底滅菌的目的。 (二)培養(yǎng)基的滅菌 為了得到某種病原物的純培養(yǎng)，配好的培養(yǎng)基必須經(jīng)過滅菌才能使用，滅菌是指用物理或化學(xué)方法完全殺死器物表面及其內(nèi)部的所有微生物，滅菌與消毒的概念不同，消毒則是指消滅器物或植物組織表面的某些微生物(能常稱雜菌)，而不是消滅所有的微生物。 牛肉浸膏和酵母浸膏十分粘稠，不易稱重，稱重時用小燒杯盛裝，以玻璃棒沾取，故要先稱好杯和棒的重量后，再開始沾取浸膏稱重，稱后將杯和棒上粘著的浸膏洗凈于鍋中。 2 整體封藏法和徒手切片法兩種基本徒手制片技術(shù)都在什么情況下使用? 徒手切法制片有什么優(yōu)缺點? 怎樣解決這種方法本身存在的問題?2－2 培養(yǎng)基的配制和滅菌一、 實驗?zāi)康? 微生物的生長發(fā)育都有一定的營養(yǎng)需要，培養(yǎng)基即人工培養(yǎng)微生物、為其生長發(fā)育提供所需營養(yǎng)的基質(zhì)。用臂力均勻地沿刀口后部起拉向前方，連續(xù)切割 4—5 片后，用毛筆蘸水輕輕沿刀口取下，放入盛有水的淺玻皿中，在此過程中左手握著的材料不要放下，否則再切時難按原位置拿材料，此外，在切片過程中，必須常用毛筆蘸水濕潤材料，以免材料干涸不便切割。用刀片割破葉背表皮再用小鑷子輕輕撕下，放在浮載劑中制片鏡檢白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形態(tài)。刮的方法是，用刮針的一刃，蘸浮載劑少許，在病部順同一個方向刮取 2—3 次，將刮得的病原蘸在載玻片的浮載劑中封片鏡檢。通過本次實驗系統(tǒng)學(xué)習(xí)實踐常用的徒手制片技術(shù)，為普通植物病理學(xué)和農(nóng)業(yè)植物病理學(xué)的深入學(xué)習(xí)以及以后開展病理學(xué)的有關(guān)研究工作奠定堅實的制片技術(shù)基礎(chǔ)。黑盤孢目真菌引起的病害如蘋果褐斑病、蘋果、辣椒、茄子、黃瓜棉花等的炭疽病等。如花生褐斑病、菜豆紅斑病、豇豆煤霉病等。③青霉屬(Penicillium )分生孢子梗直立，頂端一至多次分枝，形成掃帚狀。（3）分生孢子器（pyidium）：分生孢子器（pyidium）：球形、近球形、瓶狀或不規(guī)則形的子實體，具孔口，孢子梗聚生其內(nèi)。引起園藝植物的病害有：茭白黑粉病、慈。[玫瑰多胞銹菌（P. rosaemultiflorae ）引起玫瑰銹病]。寄主范圍很廣，可侵染 32 科 160 多種植物。代表：禾本科植物黑霉病D、黑星菌屬 Venturia假子囊殼很小，表面生有剛毛，埋生或表生。(痂圓孢屬Sphaceloma)我國有性世代未發(fā)現(xiàn)，主要無性。子囊孢子線形多胞。無性世代是殼囊孢屬(Cytospora)。(3)核菌①主要特點A、這類真菌種類多，形態(tài)變化大，子囊著生在具有孔口的子囊殼內(nèi)。閉囊殼內(nèi)有一個或多個子囊，子囊內(nèi)有 28 個子囊孢子，子囊孢子單孢無色。(2)白粉菌目 (Eryshiphales)① 白粉菌目的真菌一般稱作白粉菌，引致各種植物白粉病(Powdery mildew)。③子囊果（Ascocarp）：在子囊外部具一菌組織包被的殼，這種類型的子實體稱子囊果。分生孢子梗：可以分枝或不分枝，散生，叢生，束生，(孢梗束 Coremium)，有的分生孢子梗著生在簡單的分生孢子痤上(Sporodochium)，有的形成在分生孢子盤上(Acervulus)，有的形成分生孢子器上(Pyidium)。（4）黑根霉引起貯藏甘薯軟腐病。3 / 66（2）無性生殖形成孢子囊，產(chǎn)生不能游動的孢囊孢子。②孢囊梗有限生長，呈樹枝狀分枝。休眠孢子囊對不適宜的環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)，能在土中存活多年，是病菌的初侵染源。鞭毛菌亞門的致病特點(1)常見癥狀：腐爛、斑點、猝倒、流膠。(6)游動孢子囊形態(tài)多樣，均可釋放游動孢子。(3)鞭毛菌營養(yǎng)體從原質(zhì)團(tuán)到無隔菌絲體，屬低等真菌。既鞭桿是由 9 根纖絲組成一個圓筒型體，圓筒型體中心還有 2 根纖絲。(6)潛伏期短，可多次再侵染，一般在低溫多雨潮濕多霧、晝夜溫差大的氣候條件下，病害容易發(fā)生。②孢子囊卵圓形，成熟時脫落，萌發(fā)時產(chǎn)生游動孢子，或直接萌發(fā)長出芽管。③孢子囊橢圓形，成熟后寄主表皮散出如白銹粉。與園藝植物有關(guān)的接合菌根霉菌（Rhizopus）（1）菌絲發(fā)達(dá)，分布在基物上和基物內(nèi)，有匍匐絲和假根。很多可以形成營養(yǎng)菌絲的組織體。子囊之間的有的有側(cè)絲。 與園藝植物有關(guān)的子囊菌(1)外囊菌屬（Taphrina）無子囊果，子囊平行排列在寄主表面呈柵狀。分生孢子鏈生或單生，不斷產(chǎn)生。⑦白粉病發(fā)生的條件：對溫度要求不嚴(yán)格，干旱地區(qū)、潮濕地區(qū)都可發(fā)生，白粉菌的孢子在水中反而不易發(fā)芽或破裂，在潮濕的空氣中易發(fā)芽，該孢子滲透壓很高，3668 個大氣壓，因此很易吸收周圍的空氣中的水分。有性世代在自然界很少發(fā)生，無性世代為炭疽菌屬(Colletotrichum)。子囊較大，棍棒狀，子囊孢子單胞，無色，長度一般大于 。C、病害癥狀：斑點、瘡痂和腐爛。C、球腔菌屬 Mycosphaerella子囊座著生在寄主葉片表皮層下；假囊殼為埋生、球形，或扁圓形，孔口扁平或呈乳頭狀突起。核盤菌屬 Sclerotinia菌絲體可以形成菌核（真菌核和假菌核），菌核萌發(fā)后可形成長柄子囊盤，子囊棍棒狀，平行排列，有擬側(cè)絲。③層銹菌屬（Phakopsora）7 / 66冬孢子單細(xì)胞，無柄，不整齊地排列成數(shù)層；夏孢子表面有刺。（2）黑粉菌目（Ustilaginales）以雙核菌絲在寄主的細(xì)胞間寄生，有吸器伸入寄主細(xì)胞內(nèi)。層菌是弱寄生菌，經(jīng)傷口侵入到果樹的根部或枝干的維管束，主要破壞木質(zhì)部，造成根腐或木腐。引起白粉病，為白粉菌的無性階段 [橡膠粉孢( )引起三葉橡膠樹的白粉病]。]⑤褐孢屬(Fulvia )分生孢子梗黑色，頂端或中部形成分枝，分生孢子黑褐色，卵圓形、圓筒形或不規(guī)則形。麥類赤霉病，瓜類枯萎病。只有菌絲體，有時可形成菌核。 1 挑：對于在植物受病部位或基質(zhì)表面生長繁茂的霉?fàn)畈≡w(如霜霉菌)粉狀病原體(如銹菌、白粉菌)以及培養(yǎng)基上的許多培養(yǎng)菌，可用尖細(xì)的解剖針等直接挑取封埋制片，挑取病原體的量，在保證選材典型的前提下，越少越好，以免互相重疊，分辯不清。取小麥全蝕病或白粉病標(biāo)本，撥小黑點制片，鏡檢子囊果的形態(tài)。注意刀口必須以材料面垂直。 徒手切片的缺點是對于微小或過大，柔軟、多汁、肉質(zhì)及堅硬的材料不易切取，也難制成連續(xù)切片，此外切片的厚薄也難一致。12 / 66 馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基略帶酸性，培養(yǎng)真菌無需調(diào)節(jié) pH，培養(yǎng)細(xì)菌則調(diào)節(jié) pH 至中性，此培養(yǎng)基留作下次實驗分離培養(yǎng)病原真菌用，故不必調(diào)節(jié) pH。 5 人分為一組，4 兩組各作此培養(yǎng)基 500 毫升，其中 200 毫升分裝試管，每管約13 / 66100 毫升，滅菌后擺成斜面，其余 300 毫升分裝在 3 個 250—300 毫升的三角瓶中，每瓶裝100 毫升左右，滅菌后妥善存放，留待下次實驗使用。 (4)待箱內(nèi)空氣排出到一定程度時，閉上排氣孔，繼續(xù)加熱至一定溫度后，用定溫固定溫度，滅菌溫度一般 165℃—175℃保持 1 小時即可。一般從排氣到打開鍋蓋以10 分鐘左右為好。通過本次實驗學(xué)習(xí)植物病原菌分離培養(yǎng)的原理和常用的方法。 (2)種子內(nèi)部病原菌的分離（小麥根腐病菌的分離） 選擇典型的小麥黑胚粒 3—4 個，在 70%的酒精中浸 2—3 秒鐘后，以鑷子夾住投入 %升汞溶液中表面消毒 2—3 分鐘（處理時間可自 30 秒至 30 分鐘不等），然后取出小麥粒，以滅菌水沖洗 3 次，再移至已倒好的馬鈴薯瓊脂平板培養(yǎng)基上，注意要以小麥的黑胚部位著靠在培養(yǎng)基上，倒置在 25℃溫箱中培養(yǎng)，待菌落長出后，挑取前緣菌絲于馬鈴薯斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng) 34 天后，無菌條件下鏡檢是否獲得純培養(yǎng)。 如果因季節(jié)關(guān)系難得白菜軟腐病試材，則可用黃瓜細(xì)菌性角斑病、棉花角斑病、水稻白葉枯病病葉作試材進(jìn)行分離培養(yǎng)實驗。 白菜軟腐病病幫 3 塊(相鄰兩組共用)； 梨褐腐病病果 1 個(相鄰兩組共用)。然后翻轉(zhuǎn)蓋片制成懸滴，并封閉在特制的玻環(huán)內(nèi)，再將玻環(huán)放在底部盛少許水的培養(yǎng)皿中，蓋好皿蓋，放置在 26—28℃溫箱中培養(yǎng)，4—5 小時后檢查萌發(fā)結(jié)果。 ：取潔凈的載玻片，在熔化并冷至 50℃左右的 2%水瓊脂培養(yǎng)基中沾一下，待凝成薄層后，去掉一面瓊脂培養(yǎng)基，將有瓊脂培養(yǎng)基的一面朝