【正文】 并利用反向遺傳學技術包裝病毒，在細胞及動物水平評價 病毒的變異對宿主嗜性及致病力的影響，以此揭示病毒跨種間的傳播機制 。 2. 豐富病毒毒株庫和基因 庫；闡明新型病毒的基因和生物學特點；確定病毒非編碼區(qū)的功能位點。 7. 發(fā)表研究論文 20 篇以上 研究內容 預期目標 第 三 年 1. 對檢測為陽病毒性的進行病毒分離培養(yǎng)；開展新分類病毒的細胞和動物敏感性實驗，評價病毒的宿主范圍和對實驗動物的致病能力 。 3． 獲得不同基因型的乙型腦炎病毒、登革病毒、流感病毒囊膜蛋白；獲得部分囊膜蛋白的晶體結構。 解析重要病毒在不同宿主細胞中的復制機制 利用現代生命組學等技術解析新型 冠狀病毒 、乙型腦炎 病毒 等基因組復制、轉錄、表達以及組裝的機理，弄清病毒蛋白在 不同宿主細胞復制過程中 的作用基礎；解析 病毒在不同宿主細胞復制過程中病毒及宿主細胞 MicroRNA表達譜改變，以及 MicroRNA 表達譜對不同病毒復制轉錄的影響與結構基礎 ，探討 病毒感染的種屬與組織嗜性及復制的共性與特性 ； 鑒定 出 和登革熱病毒 的蚊子細胞蛋白因子，確定它們在病毒 RNA復制過程中的作用。 解析 流感病毒聚合酶基因突變 、插入、缺失等 對病毒 復制和致病性 的影響。 4． 對病毒目的基因進行定點突變，觀察病毒突變株和野生株對不同宿主細胞及不同組織來源細胞中復制能力的差別，尋找決定病毒在不同種屬宿主細胞中復制的關鍵位點。 2. 繼續(xù)進行病毒分子流行病學的調查與研究，分析病毒的進化和變異規(guī)律；利用構建的反向遺傳操作技術平臺，研究病毒基因點變異、基因突變、基因重配等對病毒致病性和傳播性的影響，重點探討影響病毒傳播特性尤其是跨種間傳播特性的關鍵因子或因素。 3. 獲得重組表達的受體蛋白；闡明病毒囊膜蛋白與受體直接的相互作用能力 。 重要病毒在不同宿主中的復制機制 以 新型人冠狀病毒 、 登革熱病毒 和 流感病毒 為突破口，利用 反向遺傳學平臺，采用分子生物學、細胞生物學等各種手段 ，研究病毒蛋白在 不同宿主細胞復制過程中調控、變異、重 組、嗜性 的作用基礎， 研究 病毒在不同宿主細胞復制過程中病毒及宿主細胞 MicroRNA表達譜改變，以及 MicroRNA表達譜對 不同病毒復制轉錄的影響與結構基礎 ，探討 病毒感染的種屬與組織嗜性及復制的共性與特性 ； 研究 登革熱病毒 在蚊 細胞系中復制的順式作用元件 ， 確定它們在病毒 RNA復制過程中的作用。結合蛋白質生物大分子相互作用研究，研究病毒與不同物種宿主細 胞的相互作用 ；同時利 用昆蟲細胞表達 病毒表面蛋白 及各種突變體蛋白， 從結構層面研究受體與配體的作用，以此為基礎， 用物理方法（ SPR）和生物學 檢測 手段研究病毒表面蛋白的突變對受體結合能力的影響。 1. 揭示蝙蝠、嚙齒類動物、食蟲目動物在病毒跨種群傳播的關鍵基因序列； 初步弄清楚我國犬流感病毒的可能的來源 。 5. 篩選出 26 種分別與流感病毒和漢坦病毒相互作用的宿主限制性因子；闡明部分宿主限制性因子對流感病毒和漢坦病毒復制的影響及其作用機制；獲得狂犬病病毒感染前后宿主在蛋白質水平的差異點 6. 明確高致病性禽流感病毒對在HLAA2/DR HLAA11/DR1 轉基因小鼠體內感染特性，初步揭示 MHC限制性在高致病性禽流感病毒跨物種感染過程中的作用； 完成新型病毒的基因組測序，利 用生物信息學方法并發(fā)現嗜神經性相關毒力位點，通過反向遺傳學手段進行驗證。 6． 人 MHC轉基因小鼠構建 ； 高致病性禽流感病毒、西尼羅病毒等新型病毒嗜神經生物學特征鑒定 1． 采集蝙蝠樣本 500 份；家畜樣本500 份； 2． 獲得流感病毒、新型冠狀病毒、乙腦病毒等的分離毒株和序列；獲得分離毒株的致病性和傳播性特點。 揭示 跨種間傳播中病毒 配體與受體的 作用 機制 用現代分子生物學技術和反向遺傳操作 技術構建系列假病毒及嵌合病毒 ， 結合蛋白質生物大分子相互作用研究， 闡明 病毒 配體 與不同物種宿主細 胞 受體 的相互作用 機制 ，病毒侵入宿主細胞過程的囊膜蛋白－受體結合與融合機制 ； 揭示 部分新型冠狀病毒的受體 類型及性質，奠定 型冠狀病毒跨物種感染 研究 的 基礎 ；通過體外真核表達病毒識別宿主細胞受體蛋白，弄清基因重要結構位點的改變，對其受體結合功能和侵入細胞功能的影響，以及與病毒高致病力的關系； 應用細胞轉染等現代技術， 在不操作活病毒的基礎上，找尋黃病毒受體 。 ５ 、 揭示宿主限制性因子在病毒跨 種 間 傳播中的作用 機制 篩選 鑒定出與流感病毒、 漢坦病毒 、狂犬病毒和逆轉錄病毒 蛋白互作的宿主 細胞 限制性因子 ；通過研究不同種屬的宿主限制性因子對病毒感染性的影響， 闡明宿主限制性因子在病毒感染、致病及跨種屬感染中的分子機制。 5． 篩選出 510 種分別與流感病毒、漢坦病毒及狂犬病