【正文】 二、具體要求實驗前510分鐘到達實驗室。從早取出的培養(yǎng)液開始依次測定，對細胞密度大的培養(yǎng)液用LB液體培養(yǎng)基適當稀釋后測定，~(測定OD值前，將待測定的培養(yǎng)液振蕩，使細胞均勻分布)。如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個帶測定管的三角瓶，在不同的培養(yǎng)時間(橫坐標)取樣測定，以測得的klett units為縱坐標，便可很方便地繪制出細菌的生長曲線。(二)基本原理大多數(shù)細菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時期的大腸桿菌細胞每20min分裂一次。（3）測OD值 將1至7號不同濃度的菌懸液搖均勻后于560nm波長、1cm比色皿中測定OD值。但是，由于光密度或透光度除了受菌體濃度影響之外，還受細胞大小、形態(tài)、培養(yǎng)液成分以及所采用的光波長等因素的影響。2．學習、掌握光電比濁計數(shù)法的操作方法。由1010106三個稀釋度計算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應相差太大。的稀釋菌懸液各lmL，對號放入編好號的無菌平皿中。將多余的菌液放回原菌液中。平板菌落計數(shù)法雖然操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時間才能取得，而且測定結(jié)果易受多種因素的影響，但是，由于該計數(shù)方法的最大優(yōu)點是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(如活菌制劑)，以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測。A表示五個中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。每個計數(shù)室選5個中格(可選4個角和中央的一個中格)中的菌體進行計數(shù)。2．鏡檢計數(shù)室在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進行鏡檢。血細胞計數(shù)板構(gòu)造如圖l51。除了用這些計菌器外，還有在顯微鏡下直接觀察涂片面積與視野面積之比的估算法，此法一般用于牛乳的細菌學檢查。測定細胞物質(zhì)的方法有細胞干重的測定，細胞某種成分如氮的含量、RNA和DNA的含量測定，代謝產(chǎn)物的測定等。一 顯微鏡直接計數(shù)法（一）目的要求1．明確血細胞計數(shù)板計數(shù)的原理。目前已有一些方法可以克服這一缺點，如結(jié)合活菌染色微室培養(yǎng)（短時間）以及加細胞分裂抑制劑等方法來達到只計數(shù)活菌體的目的。圖15—1 血細胞計數(shù)板構(gòu)造（一）圖15—2 血細胞計數(shù)板構(gòu)造（二）；； 放大后的方格網(wǎng)，中間大方格為計數(shù)室；；計數(shù)時，通常數(shù)五個中方格的總菌數(shù)，然后求得每個中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。取樣時先要搖勻菌液；加樣時計數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。計數(shù)一個樣品要從兩個計數(shù)室中計得的平均數(shù)值來計算樣品的含菌量。（二）、基本原理平板菌落計數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個細胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞。3．儀器或其他用具lm1無菌吸管，無菌平皿，試管架，恒溫培養(yǎng)箱等。吹吸菌液時不要太猛太快，吸時吸管伸人管底，吹時離開液面，以免將吸管中的過濾棉花浸濕或使試管內(nèi)液體外溢。由于細菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養(yǎng)皿后，應盡快倒入融化并于已冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基，立即搖勻，否則細菌將不易分散或長成的菌落連在一起，影響計數(shù)。平板菌落計數(shù)法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進行。因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測定光密度，作出光密度—菌數(shù)標準曲線。另外，對于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質(zhì)的懸液不適合用此法進行測定。測定時用無菌生理鹽水作空白對照。不同的細菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長曲線不同，同樣的細菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長曲線也不相同。3．儀器或其他用具 722型分光光度計，水浴振蕩搖床，無菌試管，無菌吸管等。2．分別在培養(yǎng)0、1116和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測定OD值。實驗前洗手，保持試驗臺清潔，保持室內(nèi)安靜。由于操作不當損壞玻璃器皿，先登記姓名，并扣分，每件1分。玻片凝集試驗（1）、要求用傷寒診斷血清，采用玻片凝集試驗的方法檢測待檢細菌是否為傷寒桿菌。（2）、要求各環(huán)節(jié)無菌操作正確。第四篇：微生物學實驗考試題《微生物學實驗》試題在進行高壓蒸汽滅菌時，是否只要滅菌鍋壓力表到達所需的值時鍋內(nèi)就能獲得所需的滅菌溫度？為什么？在手提式高壓滅菌鍋的蓋上有哪些部件？它們各起什么作用？高壓蒸汽滅菌鍋的操作有哪幾個步驟？每一步驟應注意哪些問題？在微生物學實驗中，常用于配制固體培養(yǎng)基的凝固劑是什么？它有哪些特性？如何使用？環(huán)境樣品梯度稀釋、涂布平板法分離微生物時，如何選擇不同稀釋梯度樣品的涂布順序？為什么？在革蘭氏染色實驗中，為什么會出現(xiàn)假陽性和假陰性？如何避免？在革蘭氏染色實驗中，不經(jīng)復染這一步，能否區(qū)別革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌？為什么？為何用計數(shù)板可以計得樣品中的總菌值？如何計算樣品中的菌體濃度？血球計數(shù)板計數(shù)時，計數(shù)室內(nèi)如有氣泡會對結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？如何避免產(chǎn)生氣泡？試分析血球計數(shù)板計數(shù)法的誤差來源，并提出減少誤差的方法和措施。（2）放大倍數(shù)放大倍數(shù) = 物鏡的放大倍數(shù)目鏡的放大倍數(shù)四、實驗器材顯微鏡、標本、擦鏡紙、香柏油、二甲苯五、顯微鏡的使用方法對光：光強時用平面鏡，光弱時用凹面鏡，視野明亮即可。三、實驗材料菌種金黃色葡萄球菌、巨大芽孢桿菌、大腸桿菌、灰色鏈霉菌器材顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種針、香柏油、堿性染料等。三、實驗方法 菌落顏色、光澤、質(zhì)地、表面特征等。實驗四 青霉和曲霉的形態(tài)觀察一、實驗目的掌握曲霉、青霉菌落和個體形態(tài)特征。實驗五 培養(yǎng)基的制備和常用器皿準備一、實驗目的 二、原理培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。儀器：高壓蒸汽滅菌鍋、干熱滅菌箱。三、實驗器材材料：土壤、糧食或者食