【正文】 大小，采平行樣 l～ 4個，用浸有滅菌生理鹽水的棉拭子，在規(guī)格板內(nèi)涂抹 10次（往返計(jì)為 1次），將棉拭子放入 l0ml滅菌生理鹽水的采樣管中。 ? 7如此反復(fù)洗脫 4次．即 A、 B、 C和 D，直至洗脫累積量 (初始污染菌 )不再增加，最后瀝干樣品，將其平鋪于無菌平皿中 (E)。 (即 SIP=1 ) ? SIP選擇舉例，見表 1 表 1 SIP 選擇舉例 表 1 SIP 選擇舉例 校正因子 校正因子 ? 定義：用于對活菌計(jì)數(shù)或滅菌前活菌計(jì)數(shù)進(jìn)行修正的數(shù)值，以補(bǔ)償產(chǎn)品上無法完全洗脫的微生物，以便計(jì)算出生物負(fù)載估計(jì)值。但這往往被認(rèn)為是不可行的，產(chǎn)品單元上的樣品份額宜在實(shí)驗(yàn)室易于操作的前提下盡可能大。 釋出物檢查 ? 解釋：通過與陽性對照對比，如果在培養(yǎng)容器內(nèi)看不到微生物生長，則說明使用的樣品能抑止細(xì)菌或霉菌的生長。 無菌實(shí)驗(yàn)：結(jié)果判斷 ? 肉湯培養(yǎng)基有菌生長的常見三種形式： ? 混濁生長：液體變混濁。 ? 5對測試中使用的設(shè)備、材料和產(chǎn)品進(jìn)行滅菌 ? 6簡化進(jìn)行測試必須的操作 ? 7盡量避免懸浮微粒的產(chǎn)生 ? 8環(huán)境時(shí)時(shí)監(jiān)測（沉降菌檢測） 無菌實(shí)驗(yàn)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) ? 微生物學(xué)方法 第二部分：確認(rèn)滅菌過程的無菌試驗(yàn) ? ISO 117372 2023醫(yī)用器材的滅菌 微生物學(xué)方法 第二部分：確認(rèn)滅菌過程的無菌試驗(yàn) 無菌實(shí)驗(yàn)：培養(yǎng)條件 ? 不論哪種無菌試驗(yàn)方法： 177。 全部保存菌種應(yīng)具備清單 ， 并定期向部門負(fù)責(zé)人報(bào)告 。這種操作方式，新培養(yǎng)物對接種培養(yǎng)物而言就稱為一代。 麥 氏 1 號 管 稀 釋 梯 度 表（ cfu/ml） 菌懸液制備（使用分光光度儀 ） 分光光度儀 菌懸液制備的保存 ? 菌懸液制備：菌懸液制備后應(yīng)在 2小時(shí)內(nèi)使用，若保存在 2～ 8℃ 的菌懸液可以在 24小時(shí)內(nèi)使用。 ? 方法：用接種針，將取有細(xì)菌的接種針自培養(yǎng)基中央刺入（不要接觸管底），沿原穿刺線撥出，注意在刺入與拔出時(shí)不可晃動接種針；接種后做好標(biāo)記。創(chuàng)造無菌的培養(yǎng)環(huán)境包括提供密閉的培養(yǎng)容器、培養(yǎng)容器的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌等；防止一切其它微生物的侵入的措施包括紫外線殺菌、甲醛熏蒸、超凈臺的消毒與檢測、操作工具、器皿滅菌、 操作方法 等。 采樣點(diǎn)布置 環(huán) 境 檢 測 參 照 標(biāo) 準(zhǔn) 微生物實(shí)驗(yàn)室管理 嚴(yán)格區(qū)分污染區(qū)及清潔區(qū) 相 關(guān) 標(biāo) 準(zhǔn) ? GB 159792023 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) ? GB 159801995 一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) ? GB 159811995消毒與滅菌效果的評價(jià)方法和標(biāo)準(zhǔn) 三、滅菌控制 ? 微生物實(shí)驗(yàn)使用的試劑、器材等常需用濕熱滅菌法。 ? ，被測試潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過消毒。 潔凈室沉降菌測試方法 ? ? 用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用 5～ 10倍放大鏡檢查，有否遺漏。準(zhǔn)備區(qū)即試液及培養(yǎng)基配制 /滅菌區(qū)域、實(shí)驗(yàn)器皿洗滌、烘干、滅菌、實(shí)驗(yàn)用品及易耗品儲藏等沒有特殊要求的功能間，可為一般清潔環(huán)境。操作室或工作臺應(yīng)保持正壓。微生物實(shí)驗(yàn)室的管理者其專業(yè)技能和經(jīng)驗(yàn)水平應(yīng)與他們的職責(zé)范圍相符，如：管理技能、實(shí)驗(yàn)室安全、檢驗(yàn)安排、預(yù)算、實(shí)驗(yàn)研究、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評估和數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查、技術(shù)報(bào)告書寫等。 ? 檢驗(yàn)人員必須熟悉相關(guān)監(jiān)測方法、程序、檢驗(yàn)?zāi)康暮徒Y(jié)果評價(jià)。無菌操作室應(yīng)具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置。 二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 【要求】 ? 培養(yǎng)室及其他功能間 培養(yǎng)室用于放置培養(yǎng)細(xì)菌和真菌的培養(yǎng)箱?？擅颗x定 3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。 潔凈室沉降菌測試方法 ? ? ? ，被測試潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。 ? 采樣點(diǎn)位置的詳細(xì)規(guī)則見附錄 B（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。 ? 無菌操作技術(shù)主要包括兩方面：創(chuàng)造無菌的培養(yǎng)環(huán)境及在操作和培養(yǎng)過程中防止一切其它微生物的侵入。 ? 方法：用滅菌接種環(huán)取細(xì)菌培養(yǎng)物少許；以無菌操作將沾有細(xì)菌的接種環(huán)伸入肉湯中，將 環(huán)上細(xì)菌輕輕研磨于接近液面的管壁上，然后將試管稍傾斜，使肉湯碰及細(xì)菌即可 ；接種后管口滅菌，塞回塞，接種環(huán)滅菌，并做好標(biāo)記，置 37℃ 培養(yǎng) 1824小時(shí) 半固體接種法（穿刺接種法） ? 目的：增菌和保存菌種；觀察細(xì)菌有無動力。 ? 找張白紙打上平行直線，利用光在不同濃度液體折射不同幫助觀察比較。（ 2代） ? 代： 將活的微生物接種到新鮮培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，并希望獲取新的微生物培養(yǎng)物。 ? 購置菌種 ， 應(yīng)有介紹信 。 無菌實(shí)驗(yàn) 無菌實(shí)驗(yàn)預(yù)防假陽性措施 ? 1在一個專門準(zhǔn)備、環(huán)境控制的房間內(nèi)的層流罩的環(huán)境中進(jìn)行測試 ? 2在整個測試過程中使用無菌技術(shù) ? 3用避免污染的方法把測試器皿、培養(yǎng)基和測試物品引入測試區(qū) ? 4測試產(chǎn)品表面的細(xì)菌污染，在引導(dǎo)測試物品進(jìn)入測試區(qū)之前，先對產(chǎn)品的外包裝進(jìn)行消毒。陰性對照不得有菌生長。選擇合適的微生物，重復(fù)以上步驟。 ? 2取樣注意事項(xiàng) ? ，試驗(yàn)應(yīng)使用整個產(chǎn)品單元。如果產(chǎn)品單元有標(biāo)簽說明只是液路無菌，宜把液路視為整個試驗(yàn)單位。 ? 注：當(dāng)微生物數(shù)少時(shí) ,從 B洗脫液開始，即可用無菌濾膜過濾后直接放培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 ? 選用滅菌產(chǎn)品，如果產(chǎn)品直接放人培養(yǎng)基中，可以參照無菌實(shí)驗(yàn)的抑菌實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。 ? 30~300之間的，當(dāng)只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí)，則以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)即為細(xì)菌總數(shù) (見例 1