【正文】 ? 生產(chǎn)過程中經(jīng)常出現(xiàn)種子質(zhì)量不穩(wěn)定的現(xiàn)象，其主要原因是原材料質(zhì)量波動。 種子罐的作用 ?主要是使孢子發(fā)芽，生長繁殖成菌（絲）體，接入發(fā)酵罐能迅速生長，達到一定的菌體量，以利于產(chǎn)物的合成。 ? 培養(yǎng)的溫度一般為 25~28?C。這些純種培養(yǎng)物稱為 種子 。 原生質(zhì)體融合 ? 兩親本的原生質(zhì)體在 高滲條件下 使之混合，由聚乙二醇（ PEG）作為 助融劑 ，使它們互相凝集，發(fā)生 細胞融合 ，接著兩親本基因組 由接觸到交換 ，從而 實現(xiàn)遺傳重組 。 （ 4） 可以和其他育種方法相結(jié)合 ， 把由其它方法得到的優(yōu)良性狀通過原生質(zhì)體融合再組合到一個單株中 。 遺傳標記 所謂 原生質(zhì)體融合 就是把兩個親本的細胞壁分別通過酶解作用加以瓦解 ， 使菌體細胞在高滲環(huán)境中釋放出只有原生質(zhì)膜包裹著的球狀體 （ 稱 原生質(zhì)體 ） 。 雜交育種 是指將兩個 基因 型不同的菌株經(jīng) 吻合 （ 或接合 ） 使 遺傳物質(zhì)重新組合 ， 從中 分離和篩選 具有新性狀的菌株 。 2）化學誘變劑：堿基類似物（ 5BU）、脫氨劑（羥胺、 亞硝酸）、 嵌入劑（吖啶類）等。 因為不同的菌種表現(xiàn)的 變異形式 是不同的 ，從一個菌種的變異規(guī)律去發(fā)現(xiàn)那些與 產(chǎn)量有關(guān)的特性 ，并根據(jù)這些特性 ， 分門別類地挑選一定數(shù)最的典型菌株進行 發(fā)酵和鑒定 ， 以確定各種 類型與產(chǎn)量 之間的關(guān)系 。 B 復合誘變因素的使用 在微生物 誘變育種 中 ， 可利用各種 物理 、 化學誘變因素 來處理菌種 。 （ 2）抗反饋阻遏和抗反饋抑制突變菌株的篩選 ? 調(diào)節(jié)基因或操縱基因發(fā)生突變，使產(chǎn)生的阻遏蛋白不能再和終產(chǎn)物結(jié)合或結(jié)合后不能作用于已突變的操縱基因，因此不再起反饋阻遏作用； ? 編碼酶的結(jié)構(gòu)基因發(fā)生突變，使變構(gòu)酶不再具有結(jié)合終產(chǎn)物的能力但仍具有催化活性，從而解除了反饋抑制。 誘發(fā)突變 是指用各種物理 、 化學因素人工誘發(fā)的基因突變 。 一般認為引起自然突變有 兩個原因 ：即 多因素低劑量的誘變效應(yīng) 和 互變異構(gòu)效應(yīng) 。 ?現(xiàn)代分類鑒定方法：遺傳特性、細胞化學組分、計算機數(shù)值分析。 ? 拮抗菌的篩選 — 對峙培養(yǎng)： 將病原指示菌與待測菌株 相對接種在平板上適溫培 養(yǎng)，根據(jù)病原菌的生長情 況篩選出拮抗性菌株。 （三）培養(yǎng)分離 ? 盡管通過增殖培養(yǎng)效果顯著 ， 但還是處于微生物的混雜生長狀態(tài) 。 ? 多點采土、混合分離，可以代表每一地塊上的微生物分布平均情況 （二）增殖培養(yǎng) ? 含有目的菌較多的土樣不需要富集培養(yǎng) ? 如果原有樣品中目的菌含量低，可以人為地添加相應(yīng)的基質(zhì)，培養(yǎng)使之以較其它微生物更快的速度生長繁殖，從而提高它們在樣品中的比例，便于分離。 采樣的對象也可以是植物 ， 腐敗物品 ， 某些水域等 。 ? 定方案： 首先要查閱資料 ， 了解所需菌種的生長培養(yǎng)特性 。 ? 有了優(yōu)良的菌種，還要有合適的工藝條件和合理先進的設(shè)備與之配合。 一般園田土和耕作過的沼澤土中 ， 以細菌和放線菌為主 ， 富含碳水化合物的土壤和沼澤地中 ， 酵母和霉菌較多 ，如一些野果生長區(qū)和果園內(nèi) 。 ? 采土方法：選擇適當?shù)攸c、鏟除表土、取土樣數(shù)十克，盛入事先準備的無菌防水紙袋中，其上記錄采土時間、地點、植被情況等。一般培養(yǎng)在 30℃ 下。 一般采用平板篩選。 （五）菌種鑒定 ? 經(jīng)典分類鑒定方法：形態(tài)特征、生理生化特征、血清學試驗等。 所謂 自然突變 就是指某些微生物在沒有人工參與下所發(fā)生的那些突變 。 ? 根據(jù)突變發(fā)生的原因又可分為 自然突變 和 誘發(fā)突變 。 突變菌株的篩選 （ 1）營養(yǎng)缺陷型突變株的篩選 ? 生物合成途徑的某一步發(fā)生了酶缺陷，合成反應(yīng)不能完成，末端產(chǎn)物不能積累，因此末端產(chǎn)物的反饋調(diào)節(jié)作用被解除。挑選出發(fā)菌株的標準是 產(chǎn)量高、 對誘變劑的敏感性大 、 變異幅度廣 ， 再確定誘變劑的使用及篩選條件 。 從經(jīng)誘變的大量個體中挑選優(yōu)良菌種不是一件容易的事 。 紫外線是常用的誘變劑。 因此 ， 有必要利用 雜交育種方法 。由于 基因突變 ， 它失去了 合成某種物質(zhì) （ 氨基酸 、 維生素或核苷酸堿基 ）的能力 ， 在 基本培養(yǎng)基上不能生長 ， 大多數(shù)營養(yǎng)缺陷型菌株需要補加 一定種類的有機物質(zhì) 后 才能生長 。 （ 3） 重組頻率特別高 ， 因為有聚乙二醇作助融劑 。 一般將原生質(zhì)體放在高滲的環(huán)境中維持它的穩(wěn)定 。 第三節(jié) 生產(chǎn)菌種的擴大培養(yǎng) ? 種子擴大培養(yǎng) ：是指將保存在砂土管、冷凍干燥管中處于 休眠狀態(tài) 的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后，在經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級放大培養(yǎng)而獲得一定 數(shù)量 和 質(zhì)量 的純種過程。 霉菌孢子的制備 ? 霉菌孢子的培養(yǎng)一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。 試管 → 三角瓶 → 搖床 → 種子罐 厭氧培養(yǎng)：對于酵母菌（啤酒，葡萄酒，清酒等） 試管 → 三角瓶 → 卡式罐 → 種子罐 二、生產(chǎn)車間種子制備 ?實驗室制備的孢子或液體種子移種至種子罐擴大培養(yǎng)，種子罐的培養(yǎng)基雖因不同菌種而異，但其原則為采用易被菌利用的成分如葡萄糖、玉米漿、磷酸鹽等，如果是需氧菌，同時還需供給足夠的無菌空氣，并不斷攪拌，使菌（絲）體在培養(yǎng)液中均勻分布，獲得相同的培養(yǎng)條件。如改變種子罐的培養(yǎng)條件，加速了孢子發(fā)芽及菌體的繁殖，也可相應(yīng)地減少種子罐的級數(shù)。 ?措施 ? 培養(yǎng)基所用原料要經(jīng)過發(fā)酵試驗合格才可使用 ? 嚴格控制滅菌后培養(yǎng)基的質(zhì)量 ? 斜面培養(yǎng)基使用前，需在適當溫度下放置一定時間 ? 供生產(chǎn)用的孢子培養(yǎng)基要用比較單一的氮源，作為選種或分離用的培養(yǎng)基則采用較復雜的有機氮源 培養(yǎng)條件 （ 1）溫度 溫度對多數(shù)品種斜面孢子質(zhì)量有顯著的影響。過于衰老的孢子會導致生產(chǎn)能力的下降。 二、影響種子質(zhì)量的因素及控制 ?孢子的質(zhì)量 ?培養(yǎng)基 ?培養(yǎng)條件 ?種齡 ?接種量 培養(yǎng)基 ?營養(yǎng)成分適合種子培養(yǎng)的需要 ? 選擇有利于孢子發(fā)芽和菌體生長的培養(yǎng)基； ? 營養(yǎng)上要易于被菌體直接吸收和利用； ? 營養(yǎng)成分要適當豐富和完全，氮源和維生素含量要高 ?營養(yǎng)成分要盡可能與發(fā)酵培養(yǎng)基相近。過大會引起溶氧不足，影響產(chǎn)物合成；而且會過多移入代謝廢物，也不經(jīng)濟；過小會延長培養(yǎng)時間，降低發(fā)酵罐的生產(chǎn)率。所以菌種保藏是進行微生物學研究和微生物育種工作的重要組成部分。此法可 通用于不能利用石蠟油作碳源的細菌、霉菌、酵母等微生物的保存 。 一般 保存期為 1年左右 。 保護劑一般采用脫脂牛奶或血清 。 b 操作方法及步驟 （ 1） 安瓿管要求 由于液氮保存于超低溫狀態(tài) ， 所使用的 安瓿管需能承受大的溫差而不致于破裂 ， 一般用 95料或 GCl7的玻璃管 ， 安瓿管選好后 印上標記 ， 加棉塞后滅菌 ， 烘干后備用 。所以要 常常注意液氮的殘存量 ， 定期補加 。 常見的菌種復壯措施有哪些？