生化3第三章核酸化學(xué)(更新版)
【正文】 人的第 22號(hào)染色體已完全破譯。 。1982, Reihart,Eastern) 電轉(zhuǎn)移技術(shù) :(1983,Aubertin) （二） .核酸雜交 核酸雜交的概念 :DNA單鏈與在某些區(qū)域有互補(bǔ)序列的異源 DNA單鏈或 RNA鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)的過程。 DNA的 Tm值與分子中的 G和 C的含量有關(guān)。 性 微 溶于水，不溶于有機(jī)溶劑 ,水中 溶解度 DNA達(dá) 2%， RNA達(dá) 4% DNA蛋白，溶于 1mol/L Nacl ，低鹽不溶。 ?分子中含有較多的修飾成分。第三章 核酸化學(xué) 1. 核酸的化學(xué)組成結(jié)構(gòu)及其性質(zhì) 2. 核酸的測定方法 3. 核酸的研究技術(shù) 4. 了解人類基因組計(jì)劃 重點(diǎn)： 1. RNA. DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的測定原理與方法 ，三葉草結(jié)構(gòu)要點(diǎn) 3. 核酸研究的常用技術(shù)及應(yīng)用 4. 核酸含量的測定原理與方法 難點(diǎn)： 1. DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)測定的原理與方法 2. 核苷酸的兩性離解 3. 雙螺旋結(jié)構(gòu)的要點(diǎn) 教學(xué)目的 1868年， F. Miescher從細(xì)胞核中分離得到一種酸性物質(zhì)，即現(xiàn)在被稱為核酸的物質(zhì)。DNA抗堿 (高溫不抗堿 ) ?酸降解：水解速度 嘌呤糖苷鍵 嘧啶糖苷鍵 脫氧核糖糖苷鍵 核糖糖苷鍵 糖苷鍵 脂鍵 ?在低溫的酸性條件下 DNA， RNA則穩(wěn)定 核酸酶有 :外切酶，內(nèi)切酶和磷酸酯酶 牛胰 RNaseI 產(chǎn)物： 3’嘧啶核苷酸（結(jié)尾） 內(nèi)切酶 Rnase T1 產(chǎn)物： 3’鳥嘌呤核苷酸（結(jié)尾） Rnase U2 產(chǎn)物： 3’嘌呤核苷酸（結(jié)尾） SPDase (牛脾 ) 5’端開始，產(chǎn)物： 3’核苷酸 外切酶 VPDase (蛇毒 )3’端開始，產(chǎn)物： 5’核苷酸 磷酸單酯酶（ PNase） 5’磷酸 三、 RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的測定 用 ?32p –ATP標(biāo)記 5’末端 （一）、末端基團(tuán)分析 堿解 5’ pGGCCGAoH3’ pGp+2Gp+2Cp+A 外切酶 : 如： SPDase 5’ pGGCCGAoH3’ pGp+2Gp+2Cp+A 末端標(biāo)記 （二）酶的部分降解及產(chǎn)物的分離 尿素柱層析 雙向電泳 凝膠電泳 （三）小片段核苷酸的順序測定 按序降解法 核酸酶外切酶部分降解法 核酸內(nèi)切酶降解法 （四） .由小片段核苷酸的順序推測 RNA分子順序 pAGCUG pAGCU +G pAGCUG pAGC+U+G pAG+C+U+G pA+G+C+U+G VPDase （一） RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu) 四 .RNA的高級(jí)結(jié)構(gòu) ?占 RNA總量的 15％ ?一種氨基酸對(duì)應(yīng)最少一種 RNA ?分子量 25000左右，大約由 70－ 90個(gè)核苷酸組成，沉降系數(shù)為 4S左右。 RNA在 。 一般 DNA的 Tm值在 7085?C之間。 濾膜 :硝酸纖維素濾膜， DEAE纖維素濾膜 印跡種類 : Southern blotting:（ 1975） Northern blotting:（ 1979， Alwine) （ 1979， Towbin,ImmunoblottingWestern。 。 三 .HGP面臨的挑戰(zhàn)
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