生化3第三章核酸化學-wenkub
2023-01-31 10:36:32 本頁面
【正文】 組成成分及組成單位 （一）、戊糖 組成核酸的戊糖有兩種。 DNA所含的糖為 βD2脫氧核糖； RNA所含的糖則為 βD核糖。 多聚核苷酸的表示方式 DNA RNA 二、 RNA的降解 RNA的化學降解 ?堿降解： RNA用稀堿降解產物為 2’核苷酸和 3’核苷酸混合物。末端都具有 CpCpAOH的結構。 HDNA 三、 DNA的三級結構 DNA雙螺旋的進一步扭曲構成三級結構，負超螺旋 原核 雙鏈環(huán)狀DNA（ dcDNA） 病毒 單鏈環(huán)狀DNA（ scDNA） 單鏈線性DNA（ ssDNA） 第四節(jié) 核酸及核苷酸的性質 一、溶解性 DNA在 。 PH的溶解性 二 .兩性性質 : 胸腺嘧啶 核苷酸兩性離解及等電點 三、核酸的紫外吸收特性 在核酸分子中，由于嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵體系，因而具有獨特的紫外線吸收光譜，一般在 260nm左右有最大吸收峰，可以作為核酸及其組份定性和定量測定的依據。因此，通常將紫外吸收的增加量達最大量一半時的溫度稱熔解溫度，用Tm表示。因而測定 Tm值，可反映 DNA分子中 G, C含量，可通過經驗公式計算：（ G+C)%=()* （二） . 核酸的復性 變性核酸的互補鏈在適當的條件下，重新締合成為雙螺旋結構的過程稱為 復性 。 退火溫度＝ Tm－ 25℃ 復性影響因素 片段濃度 /片段大小 /片段復雜性（重復序列數目） / 純度 /溶液離子強度 第五節(jié) 核酸及其組分的分離純化與測定 一 .分離純化的一般原則 二 .DNA的分離純化 三 .RNA的分離純化 四 .核酸組分的分離純化 破細胞（ 1mol/LNACL） 離心去沉淀（含 RNAPr） 上清（含 DNAPr） SDS法 /酚法（去蛋白） 離心去沉淀（變性蛋白） 上清（含 DNA） 乙醇沉淀 離心收集沉淀（ DNA） 細胞（飽和酚處理） 離心去沉淀（含 DNAPr） 上清液調節(jié) PI（ RNA PI） 離心去上清 收集沉淀（總 RNA） 不同的 RNA分離時可用： DEAESephadex 超離心 Oligdt 親和層析 ： 四種核苷酸之間的分離采用離子交換法 陽離子交換劑洗脫次序： 理論次序 U G A C 實際次序 U G C A 陰 離子交換劑洗脫次序： 理論次序 C A G U 實際次序 C A U G : 堿基 ,核苷 ,核苷酸之間的分離采用 SephadexG10/G25 洗脫次序：核苷酸 核苷 堿基 核苷一磷酸 ,核苷二磷酸 ,核苷三磷酸的分離采用柱層析和 薄層層析法分離 . 柱層析洗脫次序 AMP ADP ATP 薄層層析遷移次序 AMP ADP ATP : 五 .核酸及其組分含量的 測定與純度測定 （一） .核酸含 量的測定方法 1ug/ml DNA A260 = 1A260 = 50 Ug/ml DNA 1ug/ml RNA A260 = 1A260 = 40 Ug/ml RNA (20250ug RNA,40400ug DNA) 苔黑酚法
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