生化3第三章核酸化學(xué)-wenkub
2023-01-31 10:36:32 本頁(yè)面
【正文】 組成成分及組成單位 （一）、戊糖 組成核酸的戊糖有兩種。 DNA所含的糖為 βD2脫氧核糖； RNA所含的糖則為 βD核糖。 多聚核苷酸的表示方式 DNA RNA 二、 RNA的降解 RNA的化學(xué)降解 ?堿降解： RNA用稀堿降解產(chǎn)物為 2’核苷酸和 3’核苷酸混合物。末端都具有 CpCpAOH的結(jié)構(gòu)。 HDNA 三、 DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu) DNA雙螺旋的進(jìn)一步扭曲構(gòu)成三級(jí)結(jié)構(gòu)，負(fù)超螺旋 原核 雙鏈環(huán)狀DNA（ dcDNA） 病毒 單鏈環(huán)狀DNA（ scDNA） 單鏈線性DNA（ ssDNA） 第四節(jié) 核酸及核苷酸的性質(zhì) 一、溶解性 DNA在 。 PH的溶解性 二 .兩性性質(zhì) : 胸腺嘧啶 核苷酸兩性離解及等電點(diǎn) 三、核酸的紫外吸收特性 在核酸分子中，由于嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵體系，因而具有獨(dú)特的紫外線吸收光譜，一般在 260nm左右有最大吸收峰，可以作為核酸及其組份定性和定量測(cè)定的依據(jù)。因此，通常將紫外吸收的增加量達(dá)最大量一半時(shí)的溫度稱熔解溫度，用Tm表示。因而測(cè)定 Tm值，可反映 DNA分子中 G, C含量，可通過經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算：（ G+C)%=()* （二） . 核酸的復(fù)性 變性核酸的互補(bǔ)鏈在適當(dāng)?shù)臈l件下，重新締合成為雙螺旋結(jié)構(gòu)的過程稱為 復(fù)性 。 退火溫度＝ Tm－ 25℃ 復(fù)性影響因素 片段濃度 /片段大小 /片段復(fù)雜性（重復(fù)序列數(shù)目） / 純度 /溶液離子強(qiáng)度 第五節(jié) 核酸及其組分的分離純化與測(cè)定 一 .分離純化的一般原則 二 .DNA的分離純化 三 .RNA的分離純化 四 .核酸組分的分離純化 破細(xì)胞（ 1mol/LNACL） 離心去沉淀（含 RNAPr） 上清（含 DNAPr） SDS法 /酚法（去蛋白） 離心去沉淀（變性蛋白） 上清（含 DNA） 乙醇沉淀 離心收集沉淀（ DNA） 細(xì)胞（飽和酚處理） 離心去沉淀（含 DNAPr） 上清液調(diào)節(jié) PI（ RNA PI） 離心去上清 收集沉淀（總 RNA） 不同的 RNA分離時(shí)可用： DEAESephadex 超離心 Oligdt 親和層析 ： 四種核苷酸之間的分離采用離子交換法 陽(yáng)離子交換劑洗脫次序： 理論次序 U G A C 實(shí)際次序 U G C A 陰 離子交換劑洗脫次序： 理論次序 C A G U 實(shí)際次序 C A U G : 堿基 ,核苷 ,核苷酸之間的分離采用 SephadexG10/G25 洗脫次序：核苷酸 核苷 堿基 核苷一磷酸 ,核苷二磷酸 ,核苷三磷酸的分離采用柱層析和 薄層層析法分離 . 柱層析洗脫次序 AMP ADP ATP 薄層層析遷移次序 AMP ADP ATP : 五 .核酸及其組分含量的 測(cè)定與純度測(cè)定 （一） .核酸含 量的測(cè)定方法 1ug/ml DNA A260 = 1A260 = 50 Ug/ml DNA 1ug/ml RNA A260 = 1A260 = 40 Ug/ml RNA (20250ug RNA,40400ug DNA) 苔黑酚法
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