葡聚糖凝膠測(cè)蛋白質(zhì)分子量(完整版)
【正文】 ，進(jìn)入凝膠篩孔的程度不同，其洗脫體積決定于分子大小，蛋白質(zhì)在葡聚糖凝膠柱上層析的洗脫體積和分子量的對(duì)數(shù)呈直線關(guān)系。 當(dāng)樣品流經(jīng)凝膠柱時(shí)，大于孔隙的大分子完全不滲入到凝膠內(nèi)部，只需V0體積的洗脫液便可將其由一端洗脫到另一端；相反，如果樣品體積小于孔隙，那么需要V0＋Vi體積的洗脫液，才能將它們由一端洗脫到另一端。,第四頁(yè)，共十頁(yè)。例如，G25為每克凝膠膨脹(p233。凝膠過(guò)濾法測(cè)定(c232。ng zh224。,將凝膠裝柱后，柱床體積稱為“總體積〞，以Vt〔total volume〕表示。中等分子〔分子大小在上述兩種極限之間〕所需洗脫液體積介于兩者之間，Ve＝V0＋KdVi〔0Kd1〕， Kd為分配系數(shù)，它表示一種物質(zhì)在孔隙內(nèi)的滲透程度，相當(dāng)于這種物質(zhì)在孔隙內(nèi)所占體積和孔隙總體積的比值。假設(shè)用分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)在一定型號(hào)葡聚糖凝膠柱上層析，精確測(cè)其洗脫體積，并以洗脫體積Ve對(duì)分子量的對(duì)數(shù)logMW作圖，可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。 二、裝柱 層析柱必須粗細(xì)均勻，通常柱愈長(zhǎng)，別離效果愈好，但柱過(guò)長(zhǎng)，反而(fǎn 233。把已經(jīng)溶脹好的凝膠調(diào)成薄漿，傾入柱內(nèi)，膠粒逐漸擴(kuò)散下沉。L1氯化鉀溶液以每管3ml/10min流速洗脫，用自動(dòng)局部收集器收集流出液。ng)總結(jié),凝膠過(guò)濾法測(cè)定蛋
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