【正文】 首先在試管內(nèi)將 Dane顆粒沉淀，再用裂解劑裂解 Dane顆粒外殼，使 HBcAg暴露游離，并經(jīng)過屢次洗滌處理后，用放免或酶免方法檢測(cè)。該 DNA疫苗具有良好的細(xì)胞免疫原性，確可刺激宿主產(chǎn)生較強(qiáng)的 CTL反響。慢性乙型肝炎患者和 HBV慢性攜帶者體內(nèi)針對(duì) HBV的特異性 CTL應(yīng)答明顯低下，糾正這種 CTL低反響狀態(tài)，對(duì)于機(jī)體有效地去除 HBV至關(guān)重要。這對(duì) HBcAg DNA的疫苗研究有重要的指導(dǎo)意義。 HBcAg包裝HBV DNA，在病毒成熟過程中起重要作用。 第二頁，共四十二頁。血清 HBcAg陽性可提供肝內(nèi)HBV合成的信息，是病毒存在的直接標(biāo)志， HBcAg感染的肝細(xì)胞是細(xì)胞免疫效應(yīng)攻擊的靶細(xì)胞，肝細(xì)胞溶解后 HBcAg可直接釋放入血，故能直接反映肝細(xì)胞損害和病情進(jìn)展的程度。 1 生物學(xué)特性 HBcAg由 HBV基因組的 C開放讀碼區(qū)〔 ORF〕編碼，從第二個(gè) ATG〔 1 901 nt〕起始翻譯〔終止密碼子在 2 458 nt〕。 第五頁，共四十二頁。 第七頁，共四十二頁。 采用治療性疫苗打破宿主對(duì) HBV的免疫耐受狀態(tài)來治療慢性乙型肝炎和慢性乙型肝炎病毒攜帶者是一新的有效途徑。 HBcAg是乙型肝炎病毒〔 HBV〕的核心成分，假設(shè)在血清中檢出HBcAg那么說明有 HBV復(fù)制。 不能以HBsAg陰性就排除 HBV感染 ， 臨床上 HBsAg陰性的患者 ， 只要 HBcAg檢出陽性 ，說明仍有乙型肝炎病毒復(fù)制 。但局部陰性者 HBeAg的血清中仍可檢出 HBcAg和〔或〕HBV DNA，說明 HBeAg的表達(dá)可能不是 HBV復(fù)制的必然結(jié)果，對(duì) HBeAg陰性感染者的帶毒狀態(tài)及抗 HBe表達(dá)的臨床意義必須重新認(rèn)識(shí)，不能無視其具有傳染性的可能。 第十七頁，共四十二頁。慢性乙型肝炎患者，血 HBcAg陰性者比陽性者有明顯的臨床及生化指標(biāo)的改善。 第二十一頁，共四十二頁。 第二十三頁，共四十二頁。 第二十五頁，共四十二頁。HBcAg及 HBV DNA陽性的肝組織，炎癥活動(dòng)明顯，界面呈碎屑?jí)乃?，灶性壞死。肝?nèi)HBcAg呈彌漫性分布者，多見于 10歲以內(nèi)的較小兒童；而呈局灶性分布者，多見于 10歲以上的較大兒童， HBcAg呈局灶性分布比彌漫性分布者， ALT水平較高并伴有較明顯的肝臟炎癥活動(dòng)。 第三十二頁，共四十二頁。 3 小結(jié) 總之，充分認(rèn)識(shí) HBcAg的生物學(xué)特點(diǎn)和其在血液、肝組織內(nèi)表達(dá)的規(guī)律，有助于我們通過對(duì) HBcAg的檢測(cè)而正確判斷是否有 HBV的復(fù)制以及復(fù)制的強(qiáng)度，正確評(píng)估肝病活動(dòng)及肝組織損害的程度，從而指導(dǎo)制定有效的治療方案。 〔 3〕 加開殼劑釋放出 HBcAg。 每孔中參加終止液 〔 2MH2SO4〕 50ul，混勻 ， 選擇波長(zhǎng) 450nm， 空白孔調(diào)零 ， 上酶標(biāo)儀測(cè) OD值 。 〔 6〕 結(jié)果判定 。一般認(rèn)為，當(dāng) HBeAg/抗 HBe轉(zhuǎn)換后， HBV復(fù)制趨于減少，沒有傳染性或傳染性很小 第四十二頁，共四十二頁。 標(biāo)本 OD值 ≤Cutoff值 ， 為陽性；OD值＞ Cutoff值 ， 為陰性 。 Cutoff值 〔 界限值 〕 =陰性對(duì)照 OD均值 /。 第三十七頁，共四十二頁。 第三十五頁，共四十二頁。研究結(jié)果證實(shí)肝組織 HBcAg檢測(cè)具有多種實(shí)用價(jià)值，值得推薦。 第三十頁，共四十二頁。 HBcAg與肝組織炎癥活動(dòng)關(guān)系 觀察肝內(nèi)顆 HBcAg粒的分布類型 ， 有助于判斷 HBV在肝組織中的復(fù)制狀況；肝組織病變的活動(dòng)程度 。 增生胞核抗原 〔 PCNA〕〕 是再生肝細(xì)胞的標(biāo)志 ，代表肝組織的炎癥活性 ， PCNA與胞質(zhì) HBcAg表達(dá)程度正相關(guān) ， 但不是胞核型 HBcAg的獨(dú)立影響因素 。在病毒活潑復(fù)制的 ASC，常有較強(qiáng)的 HBcAg胞核表達(dá)和 HBeAg胞質(zhì)表達(dá)；活動(dòng)性慢性乙型肝炎時(shí)常有 HBcAg的胞質(zhì)表達(dá)，因免疫去除而病毒減少，難以檢出 HBeAg。Delladetsima et al發(fā)現(xiàn)膽管上皮細(xì)胞也是HBV的適合宿主， HBV能夠在其中復(fù)制并表達(dá) HBcAg和 HBsAg抗原。 第十九頁，共四十二頁。它與 HBV復(fù)制標(biāo)志呈正相關(guān)，可以反映 HBV活動(dòng)的復(fù)制程度。 HBcAg與