【正文】 種多樣 ， 在測定前 ， 樣品必須經(jīng)過預處理 ， 以排除各種輔料的干擾 ， 必要時還須進行輔料的檢查和測定 。 二 ） 國內(nèi)中藥制劑分析現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢 國內(nèi)中藥制劑分析現(xiàn)狀 1） 光譜法的應用 A 比色法 如丹參素 /丹參注射液 ， 阿魏酸 /當歸浸膏 定量 B 紫外 可見分光光度法 單波長法 如蒽醌 /何首烏，香豆素 /祖師栗膏 定量 ； 雙波長法 靛藍、靛玉紅 /喉痛消炎丸 定量 ； 三波長法 小檗堿 /三黃片 定量 ； 一階導數(shù)光譜法 綠原酸 /感冒咳嗽沖劑，麻黃堿 /哮喘丸 定量 二階導數(shù)光譜法 膽酸 /清宮沖劑，血竭 /七厘散 定量 ； 三階導數(shù)光譜法 氫溴酸東莨菪堿 /中麻 2號注射液 定量 。 2． 嚴格按照規(guī)定的取樣方法進行取樣：一般應從每個包裝的四角和中央五處取樣 ， 深度可達 1/3?2/3處 。丸劑一般取 10丸。 供試樣品檢驗完畢，應保留一半數(shù)量作為留樣觀察。 其中離子交換樹脂 、 硅藻土 、 鍵合相硅膠 C1 C8等目前有較多商品預處理柱 ， 使用方便 ， 操作簡單 ， 凈化效率高 。 3） 劑型的要求檢查類型 （ 制劑通則要求檢查項目 ） 中成藥一般質(zhì)量要求的檢查有：揮發(fā)油測定 、 水分測定 （ 固體制劑 ） 、 乙醇含量測定 、 總固體 、 相對密度 、 pH值 （ 酊劑 、 藥酒 ） 、裝量差異 （ 片重差異 ） 、 崩解度 （ 片劑 、 膠囊劑 ） 、 熔點測定 、 旋光度測定等 。 第二章 中藥制劑定量分析方法 第一節(jié) 可見 紫外光譜法 一 、 單一物質(zhì)的定量 定量依據(jù)是 BeerLambert定律 ， A=?lC。 二 ） 混合物中有 a， b兩種組分 ， 吸收光譜部分重疊 ， 在 a的 ?1處 ， b無吸收；在 b的 ?2處 ， a有吸收 。 可選靛玉紅的測定波長 ?s2=540nm、 參比波長?R2=。 A A A3為在三個波長處 分別測出的吸收度 。 可采用三波長法消除干擾 。 2． 應用舉例 差示光譜法測定含牛黃的中成藥中膽紅素的含量 1） 測定原理 膽紅素具有高度共軛體系結構 ， 在波長 453nm處為最大吸收 ， 在可見光照射下膽紅素易氧化成藍色產(chǎn)物 ， 在 453nm處吸收度顯著降低 。說明其他干擾組分在以上光照條件下不干擾膽紅素的測定。 特征： (1)導數(shù)光譜的階數(shù)愈高 ， 峰形愈尖銳且數(shù) 量亦增多 。L 根據(jù)導數(shù)光譜的定義 ， 對上式求導 ， 則： dA/dλ =（ dε /dλ ） 左圖中 p1。 其選擇原則：待測組分的導數(shù)曲線在 λ m λ m2處的形狀易辨認 ， 較特征；而干擾組分在此處的導數(shù)值相等或相近 。 Δ A =(A328 A332) (A368 A372)。 (ⅲ) 標準曲線 精密稱定膽酸對照品約 30mg， 置 100ml量瓶中 ，加入 60％ 醋酸稀釋至刻度 ， 分別精密吸取 、 ? 15ml具塞刻度試管中 ， 加 60％ 醋酸至 ， 加入稀硫酸 14． 0ml， 搖勻 ，70℃ 水浴中放置 20分鐘 ， 取出靜置 20分鐘后 ， 用 60％ 醋酸加 ， 測二階導數(shù)光譜 。 2． 定位 對本身有顏色的化合物可直接定位 ， 對有熒光的化合物可在紫外光下觀察定 位 ， 對多數(shù)無色化合物不可在薄層上直接噴顯色劑定位 ， 此時 ， 應將待測組分的薄層部分用 玻璃板懸空蓋住后再噴 ， 這樣可利用兩邊的對照點顯色定位 。 (一 )測定原理與方法 1． 吸收測定法 (1)KubelkaMunk原理及方程： 當強度為 I0的單色光照射到厚度為 X的薄層后，其情況如下圖所示。 Merck硅膠板的 SX=3， 青島硅膠板 SX＝ 3， 日本和光硅膠 F板 SX=7。 1．校正前的標準曲線 2．校正后的標準曲線 曲線校直法是一種簡便的薄層色譜掃描定量校準方法，但比較粗糙，且有時難于知道薄層板的 SX的準確值。 (三 )定量方法 主要有外標法和內(nèi)標法 ， 前者更為常用 。A IS /A 內(nèi)標二點法中標準曲線的方程式為： C1/（ CIS） 1 = F1 2． 點樣操作與隨行標準 原點直徑以 1～ 3mm較合適 ， 點樣過多會使原點 “ 超載 ” ， 展開劑出現(xiàn) “ 繞行 ” 現(xiàn)象 ， 引起斑點拖尾或重疊 ， 使掃描峰形不對稱或不能 “ 基線分離 ” 。為提高色斑的穩(wěn)定性，可將顯色后的薄層板避光保存，以同樣大小的玻璃片覆蓋并密封或?qū)⒈影褰?20％聚乙二醇甲醇溶液中，待甲醇揮發(fā)后，薄層上形成聚乙二醇薄膜，使色斑與空氣隔絕，以保證色斑的穩(wěn)定。 3．展開條件 將薄層板與展開槽進行預飽和，可得到重現(xiàn)的色譜圖。A 2/（ AIS） 2 + F1 解上述聯(lián)立方程式得： F1 = [C1/（ CIS） 1 C2/（ CIS） 2]/[ A1/（ AIS） 1 A2/（ AIS） 2] F2 = [C1/（ CIS） 1 + C2/（ CIS） 2] – F1 此時做標準曲線有 2個目的 ， 其一確定該組分的線性范圍 。 F與 C成正比，二者之間存在線性關系。 薄層色譜斑點中物質(zhì)的含量包含于 a及 b兩個參數(shù)中， 已知 a=（ S+K） /S， b=（ a2 1） 1/2 ，乘以 X，則 a= （ SX+KX） /SX b= [KX（ 2SX+KX） ]1/2/SX KX為吸收參數(shù)，相當于薄層色譜單位面積中物質(zhì)的含量（ ?g/cm2），即 KX=C。 j（ x） 為 x處的反射光強 。若為硬板，可直接用捕集器收集，也可用刀片將樣品區(qū)帶的吸附劑定量地刮下，再用合適溶劑洗脫后，進行定量測定，如圖 (C)。 本法平均回收率： ％ ， RSD＝ ％ 。 本法平均回收率 ％ ， RSD=%。 從圖中看出 ， 牡丹皮蒸提液紫外吸 收很強 ， 枇杷葉和蘆根蒸提液紫外吸收 較弱 ， 干擾丹皮酚的測定 ， 實驗表明： 丹皮酚在堿性溶液中的吸收光譜發(fā)生紅 移 ， Δλ = 35177。 4） 面積法 根據(jù)一階或二階導數(shù)光譜面 導數(shù)光譜的測量 積 ， 進行定量測定 。CL ； ?? dnA/dλ n=（ dnε /dλ n） 在零階光譜的兩拐點處 ， 奇階 導數(shù)光譜為極大或極小 。由回歸方程算得樣品的含量。 3） 精密稱取膽紅素 2mg于 50ml棕色量瓶中 ， 加入適量冷 (10℃ 以下 )的酸性氯仿 (150ml氯 仿中含 )， 于冰水浴中超聲振 蕩 20分鐘 ， 稀釋至刻度 ， 制成儲備液 。 3） 標準曲線 配制不同濃度的陳皮甙對照品溶液 ， 在選出的三個波長處 ， 分別測定吸收度 ， 并算出 Δ A值 ， 對 Δ A值與濃度 C進行直線回歸 ， 回歸方程為： Δ A = – (r = ) 4） 樣品測定 精密稱取二陳丸細粉約 ， 加 劑浸泡提取 15小時 ， 過濾 ， 取續(xù)濾液 ， 用溶劑稀釋至 ，在選出的三波長處 ， 分別測定吸收度 ， 計算其 Δ A值 ， 再按回歸方程算出陳皮甙含量 。 2．應用舉例 二陳丸中陳皮甙的測定 1） 總干擾組分的制備及其吸收光譜 ⅰ) 除去陳皮甙后 ， 陳皮其他組分提取液的制備：用溶劑 (含 ％ 氫氧化鈉的 75％ 乙醇液 )提取陳皮粉 ， 提取液經(jīng)薄層分離 ， 刮取除陳皮甙以外的所有斑點洗脫 ， 得除陳皮甙以外陳皮其他組分提取液 (I)。C 1 (r1＝ ) ?A2＝ 再從 Aa+b減去 Aa?2后求得 Ab?2， 就可求得 b的濃度 。 一個物質(zhì)若有幾個吸收峰時 ， 可選擇吸收峰較高 ，