【正文】 定量點(diǎn)樣時(shí) ， 盡可能在同一塊薄層板上同時(shí)點(diǎn)上已知濃度的對(duì)照品 ， 即隨行標(biāo)準(zhǔn) ， 一同展開 ， 定量 ， 并由這些對(duì)照品的測(cè)定值計(jì)算樣品含量 。 1． 外標(biāo)法 首先做待測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線 ， 其縱坐標(biāo)為各個(gè)斑點(diǎn)的峰面積積分值 A， 橫坐標(biāo)為相應(yīng)各斑點(diǎn)的物質(zhì)量 (微克數(shù) )。 SX數(shù)值大小直接影響薄層色譜斑點(diǎn)的吸光度 濃度曲線偏離Beer定律的程度。 3．捕集、洗脫和測(cè)定 定位后，應(yīng)捕集洗脫，若為軟板，可將待測(cè)組分的帶狀區(qū)域用捕集器收集，如圖 (B)。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為： Δ A = + （ r = ） (ⅳ) 樣品測(cè)定 取同一批號(hào)或不同批號(hào)樣品 ， 分別精密量取10ml于 25ml量瓶中 ， 加 ， 混勻 ， 以， 在測(cè)定波長(zhǎng)處測(cè)其吸收度 ， 算出Δ A， 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程 ， 計(jì)算樣品中丹皮酚含量 。 3） 峰 零法 測(cè)量峰值到零線間的垂直距 離 ， 左圖中 p2。 (2)在零階光譜的極大處 ， 其相應(yīng)的奇階光 譜通過零點(diǎn) 。 2） 選用日光下照射 30分鐘或在紅外燈下照射 4小時(shí)測(cè) Δ A值 。 根據(jù)相似三角形的等比性質(zhì) ， 可推導(dǎo)出下式 ， Δ A= A2 （ m A1+nA3） /（ m + n） ={??2 –（ m??1 + n??3） /（ m + n） }CL 三波長(zhǎng)分光光度法的原理 說明 Δ A與待測(cè)組分濃度 C成正比 。 先在 ?2處測(cè)定總吸收 Aa+b， 再在 ?1處測(cè)定 Aa?1；先從 Aa?1直接求出 a的濃度 ， 根據(jù) a的濃度求出 Aa?2。 3．含量測(cè)定 中成藥含量測(cè)定所采用的方法除經(jīng)典的重量法 、 容量法 (包括中和法 、 容量沉淀法 、 絡(luò)合滴定法 、 氧化還原法及非水溶液滴定法等 )外 ， 還可采用電位法 、 庫(kù)倫滴定法 、 比色法 、 可見 紫外分光光度法 、 紅外分光光度法 、 液相色譜法 、 薄層色譜法 、 氣相色譜法 、高效液相色譜法 、 雙波長(zhǎng)薄層掃描法等 。 二、 測(cè)試樣品溶液的制備 中藥制劑測(cè)試樣品溶液的制備一般分為提取、分離、凈化等過程。 取得的樣品裝入清潔 、干燥 、 具磨口塞的容器或密封的塑料袋中 ， 并注明品名 、 批號(hào) 、 數(shù)量 、 取樣日期及取樣人 。 ， 很多在單味中藥鮮品中存在的化學(xué)成分 ， 經(jīng)過炮制或制備工藝中經(jīng)加熱處理后已不復(fù)存在 ， 或在制備過程中因揮發(fā) 、 分解 、 成鹽 (沉淀 )反應(yīng)等增加了中成藥分析工程的困難。 中藥材的同名異物 ， 同物異名現(xiàn)象普遍存在 。 3）電化學(xué)分析法的應(yīng)用 A 庫(kù)侖法 B 電位法 藥物電極測(cè)定法和電位溶出分析法 4）其他 A 原子吸收光譜法和冷原子技術(shù) B 原子發(fā)射光譜 C X射線分析法 目前，中藥體系存在的突出問題具體表現(xiàn)在： (1)定量分析指標(biāo)與其主要藥效作用間缺乏相關(guān)性； (2)與化學(xué)藥物相比，中藥是一個(gè)由多成分、多因素構(gòu)成的復(fù)雜體系，目前還沒有建立起一套有效的中藥復(fù)雜體系定量分析標(biāo)準(zhǔn)。 依標(biāo)示量及供試量稱取部分藥料供分析。 2） 顯微鑒別 因?yàn)楹兄兴幵鄣闹谐伤幘Ａ糁兴幉牡娘@微特征 。 一個(gè)物質(zhì)若有幾個(gè)吸收峰時(shí) ， 可選擇吸收峰較高 ， 在此吸收峰處吸光度隨波長(zhǎng)變化較小 ， 并且其它物質(zhì)無吸收的波長(zhǎng)作為定量條件 。C 1 (r1＝ ) ?A2＝ 3） 標(biāo)準(zhǔn)曲線 配制不同濃度的陳皮甙對(duì)照品溶液 ， 在選出的三個(gè)波長(zhǎng)處 ， 分別測(cè)定吸收度 ， 并算出 Δ A值 ， 對(duì) Δ A值與濃度 C進(jìn)行直線回歸 ， 回歸方程為： Δ A = – (r = ) 4） 樣品測(cè)定 精密稱取二陳丸細(xì)粉約 ， 加 劑浸泡提取 15小時(shí) ， 過濾 ， 取續(xù)濾液 ， 用溶劑稀釋至 ，在選出的三波長(zhǎng)處 ， 分別測(cè)定吸收度 ， 計(jì)算其 Δ A值 ， 再按回歸方程算出陳皮甙含量 。由回歸方程算得樣品的含量。CL ； ?? dnA/dλ n=（ dnε /dλ n） 從圖中看出 ， 牡丹皮蒸提液紫外吸 收很強(qiáng) ， 枇杷葉和蘆根蒸提液紫外吸收 較弱 ， 干擾丹皮酚的測(cè)定 ， 實(shí)驗(yàn)表明： 丹皮酚在堿性溶液中的吸收光譜發(fā)生紅 移 ， Δλ = 35177。 本法平均回收率： ％ ， RSD＝ ％ 。 j（ x） 為 x處的反射光強(qiáng) 。 F與 C成正比，二者之間存在線性關(guān)系。A 2/（ AIS） 2 + F1 解上述聯(lián)立方程式得： F1 = [C1/（ CIS） 1 C2/（ CIS） 2]/[ A1/（ AIS） 1 A2/（ AIS） 2] F2 = [C1/（ CIS） 1 + C2/（ CIS） 2] – F1為提高色斑的穩(wěn)定性，可將顯色后的薄層板避光保存，以同樣大小的玻璃片覆蓋并密封或?qū)⒈影褰?20％聚乙二醇甲醇溶液中，待甲醇揮發(fā)后，薄層上形成聚乙二醇薄膜，使色斑與空氣隔絕，以保證色斑的穩(wěn)定。A IS /A 內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法中標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程式為： C1/（ CIS） 1 = F1 1．校正前的標(biāo)準(zhǔn)曲線 2．校正后的標(biāo)準(zhǔn)曲線 曲線校直法是一種簡(jiǎn)便的薄層色譜掃描定量校準(zhǔn)方法，但比較粗糙，且有時(shí)難于知道薄層板的 SX的準(zhǔn)確值。 (一 )測(cè)定原理與方法 1． 吸收測(cè)定法 (1)KubelkaMunk原理及方程： 當(dāng)強(qiáng)度為 I0的單色光照射到厚度為 X的薄層后，其情況如下圖所示。 (ⅲ) 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱定膽酸對(duì)照品約 30mg， 置 100ml量瓶中 ，加入 60％ 醋酸稀釋至刻度 ， 分別精密吸取 、 ? 15ml具塞刻度試管中 ， 加 60％ 醋酸至 ， 加入稀硫酸 14． 0ml， 搖勻 ，70℃ 水浴中放置 20分鐘 ， 取出靜置 20分鐘后 ， 用 60％ 醋酸加 ， 測(cè)二階導(dǎo)數(shù)光譜 。 其選擇原則：待測(cè)組分的導(dǎo)數(shù)曲線在 λ m λ m2處的形狀易辨認(rèn) ， 較特征；而干擾組分在此處的導(dǎo)數(shù)值相等或相近 。L 根據(jù)導(dǎo)數(shù)光譜的定義 ， 對(duì)上式求導(dǎo) ， 則： dA/dλ =（ dε /dλ ） 說明其他干擾組分在以上光照條件下不干擾膽紅素的測(cè)定。 可采用三波長(zhǎng)法消除干擾 。 可選靛玉紅的測(cè)定波長(zhǎng) ?s2=540nm、 參比波長(zhǎng)?R2=。 第二章 中藥制劑定量分析方法 第一節(jié) 可見 紫外光譜法 一 、 單一物質(zhì)的定量 定量依據(jù)是 BeerLambert定律 ， A=?lC。 其中離子交換樹脂 、 硅藻土 、 鍵合相硅膠 C1 C8等目前有較多商品預(yù)處理柱 ， 使用方便 ， 操作簡(jiǎn)單 ， 凈化效率高 。丸劑一般取 10丸。 二 ） 國(guó)內(nèi)中藥制劑分析現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì) 國(guó)內(nèi)中藥制劑分析現(xiàn)狀 1） 光譜法的應(yīng)用 A 比色法 如丹參素 /丹參注射液 ， 阿魏酸 /當(dāng)歸浸膏 定量 B 紫外 可見分光光度法 單波長(zhǎng)法 如蒽醌 /何首烏，香豆素 /祖師栗膏 定量 ； 雙波長(zhǎng)法 靛藍(lán)、靛玉紅 /喉痛消炎丸 定量 ； 三波長(zhǎng)法 小檗堿 /三黃片 定量 ； 一階導(dǎo)數(shù)光譜法 綠原酸 /感冒咳嗽沖劑，麻黃堿 /哮喘丸 定量 二階導(dǎo)數(shù)光譜法 膽酸 /清宮沖劑，血竭 /七厘散 定量 ； 三階導(dǎo)數(shù)光譜法 氫溴酸東莨菪堿 /中麻 2號(hào)注射液 定量 。 二 、 中藥制劑分析的特點(diǎn) 一 ） 中藥制劑分析的對(duì)象是復(fù)雜的混合物 。 在進(jìn)行質(zhì)量分析時(shí)首先以中醫(yī)理論和用藥原則為指導(dǎo) ， 進(jìn)行組方分析 ， 按功能主治分出主 、 輔 、 從 、 次藥味和藥群 ， 選擇某合適的化學(xué)成分為指標(biāo)來說明其與質(zhì)量的關(guān)系 。 貴重藥品可酌情取樣 。 適宜遇熱不穩(wěn)定的有效成分；