22基因工程載體-噬菌體載體xxxx09(完整版)
【正文】 ?感染 Ecoli后，在宿主細胞內會形成雙鏈的復制型ＤＮＡ（ replication form DNA, RF DNA）。 由于 λ 噬菌體包裝時，當 DNA的長度短于野生型的 78%或超過 105%時，噬菌體的活性就急劇下降。λ噬菌體的基因組結構5‘CGGGGCGGCGACCTCG3’3’GCCCCGCCGCTGGAGC5’ Cleavage Ligation(during packaging) (after infection) GGGCGGGCGACCTCG3’5’CG + GC5’3’GCCCCGCCGCTGGAThe phage ? cos endsCircular form Linear form （二） λ噬菌體載體的主要類型 （ 1） 插入式載體 一種只具有一個可供外源 DNA插入的克隆位點的 派生載體。噬菌體溫和噬菌體，具有溶源生長周期和溶菌生長周期烈性噬菌體 ,只具有溶菌生長周期分為兩種：（ 1） 溶菌周期：噬菌體的生活周期烈性噬菌體（ virulent phage)（ 2） 溶原周期：感染細菌后，將自己的 DNA整合到細菌的染色體 DNA中。溶源周期中，注入寄主細胞的噬菌體 DNA是整合到寄主細胞染色體上并可以隨著寄主細胞的分裂而進行復制。 λ 噬菌體感染細菌后的溶菌性生長和溶源性生長 溶菌性生長（ lytic pathway） 噬菌體感染細菌后，借助其 2個 COS位點互補成環(huán)，在宿主菌體內連續(xù)復制，合成大量基因產(chǎn)物，進而裝配成噬菌體顆粒，裂解宿主菌，釋放出來的噬菌體又可感染其他細菌。 （ 3）凱倫噬菌體載體既有插入型；又有替換型在基因工程實驗中的用途十分廣泛承受外源 DNA的能力：幾個 kb到 23kb（左右臂 連 接） （三段自身 連 接） （插入片段） （三）體外包裝 λ 噬菌體 DNA體外重組后，一般必須經(jīng)過體外包裝，然后以噬菌體感染的方式將重組 DNA導入 。1. 重組噬菌體 的分子量必須在 野生型噬 菌體 分子量大小的 75% 至 105% 之間。3. 克隆的外源基因片段不宜大于 1000bp。所以 M13噬菌體并不存在包裝限制的問題。許多 M13載體的多克隆位點與質粒載體 pUC序列的多克隆位點是相同的，在克隆位點選擇上更為方便。MCS噬菌體 ori質粒 oriAmprlacZ’ lacI約 3000bp（比 M13小）② 克隆能力大能插入 10kb的外源 DNA。② 特點PCR產(chǎn)物往往在 3’ 端突出一個 A，所以能與這個載體直接連接。由于 cosmid載體的大片段克隆能力，多用于基因組文庫的構建，而 λ噬菌體載體多用于 cDNA文庫的構建?？滤官|粒pHC79系由質粒 pBR322和噬菌體 λ 的cos位點的一段 DNA構成全長 設計構建的柯斯質粒一般長 4～ 6kb。OVer!!!!演講完畢，謝謝觀看！。凡具有 cos位點的任何DNA分子只要在長度相當于噬菌體基因組，就可以同外殼蛋白結合而被包裝成類似噬菌體 λ 的顆粒。2. 加入 ?噬菌體 頭部和尾部蛋白，可將 粘粒包裝成類似于 ?噬菌體 的具感染能力的顆粒，方便地進入大腸桿菌。柯斯質粒能被包裝到 λ噬菌體粒子中，感染大腸桿菌；它攜帶入宿主細菌的 DNA片段（超過 45kb）要比質粒載體攜帶的要大（一）粘粒 (cosmid) 組成：2. 抗性基因；1. 質粒復制的起始位點 (ORI)；3. 用于插入目的基因的單個酶切位點；4. ?噬菌體的 cos位點 。既能在大腸桿菌中以質粒的形式雙鏈復制，又能在噬菌體內進行單鏈復制。所以如果要同時分離Ｄ
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