植物組織培養(yǎng)(完整版)
【正文】 如果將細(xì)胞懸浮在溶液中，隨著溫度的降低，細(xì)胞外部的水分會首先結(jié)冰，從而使得未結(jié)冰的溶液中電解質(zhì)濃度升高。而且不同的冷凍保護劑其冷凍保護效果也不一樣。 (6) 保存后的化凍：一般在 37— 40 ℃ 溫水浴中快速化凍。 (2)預(yù)培養(yǎng)，增加培養(yǎng)基中的糖濃度，提高滲透壓；或在預(yù)培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)抗寒力的物質(zhì)或冰凍保護劑，如脫落酸 (ABA)，山梨糖醇、脯氨酸及二甲基亞砜 (DMSO)等。 植物體內(nèi)的水分在降溫冰凍過程中， 從 10℃ 到 140℃ 是冰晶形成和增長的危險溫度區(qū)， 在 140℃ 以下，冰晶不再增生。 第一步是用慢速降溫法從 0℃ 降到一定的預(yù)凍溫度，使細(xì)胞達到適當(dāng)?shù)谋Ｗo性脫水； 第二步，投入液氮中迅速冰凍。 6．光照對恢復(fù)生長的影響 黑暗條件下有利于超低溫保存培養(yǎng)物的恢復(fù)生長。 4)同工酶譜的分析。 (3)以 1℃ ／分的降溫速度從 0℃ 降到 10℃ ，輕輕搖動試管，使試管內(nèi)的溶液結(jié)冰。 此外，在化凍洗滌后，可采 TTC法和 FDA熒光染色法 觀測細(xì)胞的活力和存活率 。 (6)將莖尖分生組織 轉(zhuǎn)移到在冰浴中預(yù)冷的具有 1m1液體 B5培養(yǎng)基的離心管 中。 Sakai(1990)和 Yamada(1991)建立了一種莖尖分生組織的超低溫保存簡便方法，該技術(shù)的關(guān)鍵是， 在冰凍前，用高濃度的冰凍保護劑使保存材料脫水，以致不需要慢速程序降溫，從室溫直接浸入液氯， 即可獲得很高的存活率。 (6)化凍后，倒出保護劑， 將材料放入含 moI／ L蔗糖的 B5培養(yǎng)基中， 25℃ 10分鐘。 :13:1904:13Feb232Feb23 1故人江海別，幾度隔山川。 04:13:1904:13:1904:132/2/2023 4:13:19 AM 1成功就是日復(fù)一日那一點點小小努力的積累。 , February 2, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 2023年 2月 2日星期四 4時 13分 19秒 04:13:192 February 2023 1一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。 :13:1904:13Feb232Feb23 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯兒。 04:13:1904:13:1904:13Thursday, February 2, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 :13:1904:13:19February 2, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 1天后，再轉(zhuǎn)移到新鮮的同樣培養(yǎng)基濾紙上， 25 ℃ 、 l 4小時光照下培養(yǎng)。 (2)在含 1． 2 mo1／ L 山梨糖醇的 B5培養(yǎng)基上 4℃ 預(yù)培養(yǎng) 2天。 (9)在液氮中貯存 — 定時期后， 取出材料在 27℃ 水浴中迅速化凍 。 (9)植株 形態(tài)特征、生長發(fā)育及遺傳性狀 的觀察和分析． 莖尖超低溫保存植物種類： 八、 芽及莖尖分生組織的超低溫保存 2. 莖尖分生組織的超低溫保存程序： （ 1） 種子消毒滅菌 ，種子經(jīng) 70％酒精迅速漂洗， 10％漂白粉溶液消毒 20分鐘，無菌水洗滌 4次． (2)在 無菌條件下播種 于具潤濕濾紙的滅菌培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)。然后以同樣降溫進度降到 30℃ － 40℃ ，停留 2小時，然后浸入液氮中。 6)抗逆性的分析。 2. 2．顯示細(xì)胞存活率的二醋酸酯熒光素 (FDA)染色法，反映酯酶的脫脂化作用，或采用中性紅染色法。保存材料經(jīng)冰凍保護劑在 0℃ 預(yù)處理后，逐步通過這些溫度，樣品在每級溫度 上停留一定時間 (4— 6分鐘 )，然后浸入液氮。 (2)慢速冰凍法：通常成熟的植物細(xì)胞都具有大的液泡，含有大量水
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