植物組織培養(yǎng)(已改無錯字)
2023-02-04 04:56:47 本頁面
【正文】 移到半固體培養(yǎng)基上，或漂浮于液體培養(yǎng)基的濾紙上培養(yǎng)。先置于黑暗條件下培養(yǎng) 15— 30天，然后轉移到光照下培養(yǎng)。 (7)待恢復生長后， 統(tǒng)計存活率 。 此外，在化凍洗滌后，可采 TTC法和 FDA熒光染色法 觀測細胞的活力和存活率 。 (8)當愈傷組織長到良好狀態(tài)時， 轉移到分化培養(yǎng)基上，檢驗形態(tài)發(fā)生能力 的保持情況。 (9)植株 形態(tài)特征、生長發(fā)育及遺傳性狀 的觀察和分析． 莖尖超低溫保存植物種類： 八、 芽及莖尖分生組織的超低溫保存 2. 莖尖分生組織的超低溫保存程序： （ 1） 種子消毒滅菌 ，種子經(jīng) 70％酒精迅速漂洗， 10％漂白粉溶液消毒 20分鐘，無菌水洗滌 4次． (2)在 無菌條件下播種 于具潤濕濾紙的滅菌培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)。置于 25— 28℃ 培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)。 (3)萌發(fā) 生長 4— 5天后，在無菌條件下切取莖尖的分生組織， ，第 1對葉原基。在實體解副鏡下進行操作。 (4)將切取的 莖尖分生組織接種于固體 B5培養(yǎng)基上，內(nèi)含／ L BA及 5%DMSO，光照 16小時，溫度 20℃ ／ 15℃預培養(yǎng) 48小時。 (5)預培養(yǎng)后，將培養(yǎng)瓶浸入 冰浴中 2小時 。 (6)將莖尖分生組織 轉移到在冰浴中預冷的具有 1m1液體 B5培養(yǎng)基的離心管 中。 (7)逐步 加入等體積的預冷的 10％ DMSO，在 30分鐘內(nèi)加完，使 DMSO的最終濃度為 5%， 然后再放置 10一 30分鐘． (8)密封離心管口， 以每分鐘降低 ℃ 的速度慢速降溫到 — 40℃ ，然后浸入液氮中 (— 196℃ )。 (9)在液氮中貯存 — 定時期后， 取出材料在 27℃ 水浴中迅速化凍 ?；瘍龊螅⒓磳⒃嚬苻D移到冰浴中． (10)用等體積 B5培養(yǎng)基 在 30分鐘內(nèi)，分 6次逐步加入試管中。 (11)吸去混合液，并用 B 5培養(yǎng)基洗滌 4次。然后將 莖尖分生組織轉移到固體 B5分化培養(yǎng)基 上。 3周后可分化成苗。植株的再生率達 70％以上，已有的試驗表明，貯存 2年多仍能存活。 Sakai(1990)和 Yamada(1991)建立了一種莖尖分生組織的超低溫保存簡便方法，該技術的關鍵是， 在冰凍前，用高濃度的冰凍保護劑使保存材料脫水，以致不需要慢速程序降溫，從室溫直接浸入液氯， 即可獲得很高的存活率。 保存程序： (1)從試管苗中切取莖尖分生組織。 (2)在含 1． 2 mo1／ L 山梨糖醇的 B5培養(yǎng)基上 4℃ 預培養(yǎng) 2天。 (3)將預培養(yǎng)后分生組織放入試管， 然后加入高濃度的冰凍保護劑。在含 0。 4 mo1 ／ L 蔗糖的 B5培養(yǎng)基中溶解 30％ (w／ v)甘油， 35％ (W／ v)乙二醇和 15％ (w／ V)DMSO，在25℃ 停留 5分鐘，或者在 0℃ 停留 15分鐘，期間更換 2次溶液。 (4)直接浸入液氮保存。 (5)貯存一定時間后， 在 25 ℃ 水浴中快速化凍， 為 280 ℃ ／分。 (6)化凍后，倒出保護劑， 將材料放入含 moI／ L蔗糖的 B5培養(yǎng)基中， 25℃ 10分鐘。 (7)轉移到固體 B 5培養(yǎng)基上的滅菌濾紙上。 1天后，再轉移到新鮮的同樣培養(yǎng)基濾紙上， 25 ℃ 、 l 4小時光照下培養(yǎng)。 3天內(nèi)恢復生長， 3周后產(chǎn)生成苗，成苗率 (存活率 )達 80— 90％。 該方法也適用于愈傷組織及懸浮培養(yǎng)細胞。 2023年 12月 14日 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 , February 2, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人
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