【正文】 04:13:1904:13:1904:132/2/2023 4:13:19 AM 1越是沒(méi)有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 04:13:1904:13:1904:13Thursday, February 2, 2023 1乍見(jiàn)翻疑夢(mèng)，相悲各問(wèn)年。 保存程序： (1)從試管苗中切取莖尖分生組織。 (8)當(dāng)愈傷組織長(zhǎng)到良好狀態(tài)時(shí)， 轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，檢驗(yàn)形態(tài)發(fā)生能力 的保持情況。 5)特殊產(chǎn)物的分析。 (4)逐級(jí)冰凍法：此方法是制備不同等級(jí)溫度的冰浴，如 — 10℃ ， — 15℃ ， — 23℃ ， — 35℃ ，或 — 40℃ 等。 (3)低溫鍛煉：如香石竹莖尖經(jīng) 4℃ 低溫預(yù)處理14天，不僅提高了存活率．而且分化率從 30％增加到 60％。 1. 主要儀器設(shè)備 (1) 用于組織和細(xì)胞培養(yǎng)的全套設(shè)備； (2) 普通電冰箱； (3)70 ℃ 80℃ 的低溫冰箱； (4) 程序降溫器； 四、超低溫保存的基本設(shè)備和程序 (5) 玻璃或塑料試管（ 5ml 或 10 m1），封蓋嚴(yán)密，不進(jìn)液氮； (6) 液氮 。當(dāng)以適當(dāng)?shù)姆椒▽龃娴纳锊牧匣謴?fù)至常溫時(shí)，其內(nèi)部的生化反應(yīng)可恢復(fù)正常。 限制生長(zhǎng)保存是利用限制離體培養(yǎng)物的生長(zhǎng)速度來(lái)保存種質(zhì)的方法，是離體保存的常用方法。這種因保存溶液中溶質(zhì)濃度升高而導(dǎo)致的細(xì)胞損傷稱為 溶質(zhì)損傷或稱溶液損傷。如果是單細(xì)胞或原生質(zhì)體，可采用活性熒光素染色法，顯示活細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)存活率。 (2)慢速冰凍法：通常成熟的植物細(xì)胞都具有大的液泡，含有大量水分。 2. 2．顯示細(xì)胞存活率的二醋酸酯熒光素 (FDA)染色法，反映酯酶的脫脂化作用，或采用中性紅染色法。然后以同樣降溫進(jìn)度降到 30℃ － 40℃ ，停留 2小時(shí)，然后浸入液氮中。 (9)在液氮中貯存 — 定時(shí)期后， 取出材料在 27℃ 水浴中迅速化凍 。 1天后，再轉(zhuǎn)移到新鮮的同樣培養(yǎng)基濾紙上， 25 ℃ 、 l 4小時(shí)光照下培養(yǎng)。 04:13:1904:13:1904:13Thursday, February 2, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 2023年 2月 2日星期四 4時(shí) 13分 19秒 04:13:192 February 2023 1一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 04:13:1904:13:1904:132/2/2023 4:13:19 AM 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 (6)化凍后，倒出保護(hù)劑， 將材料放入含 moI／ L蔗糖的 B5培養(yǎng)基中， 25℃ 10分鐘。 (6)將莖尖分生組織 轉(zhuǎn)移到在冰浴中預(yù)冷的具有 1m1液體 B5培養(yǎng)基的離心管 中。 (3)以 1℃ ／分的降溫速度從 0℃ 降到 10℃ ，輕輕搖動(dòng)試管，使試管內(nèi)的溶液結(jié)冰。 6．光照對(duì)恢復(fù)生長(zhǎng)的影響 黑暗條件下有利于超低溫保存培養(yǎng)物的恢復(fù)生長(zhǎng)。 植物體內(nèi)的水分在降溫冰凍過(guò)程中， 從 10℃ 到 140℃ 是冰晶形成和增長(zhǎng)的危險(xiǎn)溫度區(qū)， 在 140℃ 以下，冰晶不再增生。 (6) 保存后的化凍：一般在 37— 40 ℃ 溫水浴中快速化凍。 如果將細(xì)胞懸浮在溶液中，隨著溫度的降低，細(xì)胞外部的水分會(huì)首先結(jié)冰，從而使得未結(jié)冰的溶液中電解質(zhì)濃度升高。 種質(zhì)資源的離體保存是對(duì)離體培養(yǎng)的小植株、器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體等材料，采用限制生長(zhǎng)、延緩或停止其生長(zhǎng)的處理使之保存，在需要時(shí)可以重新恢復(fù)其生長(zhǎng)，并再生植株的方法。 而 復(fù)蘇 就是以一定的復(fù)溫速率將凍存的體外培養(yǎng)物或生物活性材料恢復(fù)