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1-2dna重組技術(shù)的基本操作程序(完整版)

2025-02-01 01:25上一頁面

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【正文】 編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)DNA聚合酶剪接有關(guān)的酶RNA聚合酶mRNA前體mRNA單鏈 DNAcDNA反轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄剪接反轉(zhuǎn)錄復制啟動子啟動子 終止子基因不含 非編碼區(qū) 和 內(nèi)含子cDNA文庫與基因組 DNA文庫cDNA反轉(zhuǎn)錄受體菌群體與運載體 連接導入cDNA文庫某種生物某個時期的 mRNA 某生物體內(nèi)全部 DNA 許多 DNA片段受體菌群體限制酶基因組文庫與運載體 連接導入基因組文庫與 cDNA文庫的比較文庫類型 cDNA文庫 基因組文庫文庫大小基因中啟動子(具有啟動作用的 DNA片段)基因中內(nèi)含子(位于編碼蛋白質(zhì)序列的非編碼 DNA片段)基因多少 物種間的基因交流小 大無 有無 有某種生物的部分基因 某種生物的全部基因可以 部分基因可以(二)利用 PCR技術(shù)擴增目的基因1 概念:PCR全稱為 _______________,是一項在生物_____復制 ______________的核酸合成技術(shù)。表達載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動子、終止子 三部分結(jié)構(gòu)② 用到的工具酶: 限制酶和 DNA連接酶,兩種酶作用的化學鍵都是磷酸二酯鍵③ 啟動子、終止子 對于目的基因表達必不可少④ 目的基因不能單獨進入受體細胞, 必需以表達載體的方式攜帶進去。,是否都能穩(wěn)定維持和表達? 不一定,需要檢測思考四、目的基因的檢測與鑒定探針15N15N轉(zhuǎn)基因生物的 DNA14N14N( 1)檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA上是否插入 了 目的基因基因探針: 放射性同位素等標記的 含目的基因DNA分子方法 —— DNA分子雜交技術(shù)變性變性變性變性檢測 ——分子水平的檢測變性變性方法 —— 分子雜交技術(shù)( 2)檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA探針15N15N轉(zhuǎn)基因生物的 mRNA14N檢測 ——分子水平的檢測提?。ǎ?3)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì))檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)方法 —— 抗原 抗體雜交蘇云金桿菌 將 Bt毒蛋白注射小鼠體內(nèi)從小鼠血管抽出血液分離出抗 Bt毒素的抗體抗體蛋白質(zhì) 出現(xiàn)雜交帶脫分化組織培養(yǎng)Bt毒素蛋白檢測 ——分子水平的檢測鑒定 ——個體水平的鑒定抗蟲、抗病接種實驗,活性比較實驗  例:用棉鈴飼喂棉鈴蟲,如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀,說明未導入目的基因或?qū)肽康幕蛭幢磉_。課堂練習 有關(guān)基因工程的敘述中,錯誤的是 ( ) A、 DNA連接酶將黏性末端的堿基對連接起來
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