【正文】 包裝的規(guī)定 制品檢驗(yàn)的有關(guān)規(guī)定 制品的貯藏、運(yùn)輸和使用辦法 II 滅活疫苗 III 活疫苗 IV 抗血清 V 診斷制品 VI 附錄 培養(yǎng)基制造方法 溶液配制 —— PBS、 Tris緩沖液等 原料標(biāo)準(zhǔn) —— 玻璃瓶、瓶塞等 試驗(yàn)方法 —— HA、 HI、中和試驗(yàn)法 等 檢驗(yàn)方法 —— 活菌計(jì)數(shù)法、支原體檢驗(yàn)法 測定方法 —— 甲醛、苯酚含量測定法等 這些方法一般為通用方法。 對(duì)發(fā)生臨床不良反應(yīng)或用戶發(fā)現(xiàn)質(zhì)量問題制品的實(shí)驗(yàn)室復(fù)查 。 驗(yàn)證與核對(duì) 驗(yàn)證是一個(gè)規(guī)定的程序 ， 可提供很高的可信度 ， 使某一特定工藝過程能穩(wěn)定地生產(chǎn)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的生物制品 。生產(chǎn)用器具或材料，滅菌除菌前和滅菌除菌后作明顯標(biāo)志。 制定使用 、 維修 、 清潔和保養(yǎng)規(guī)程 ， 定期檢查 、 清潔 、 保養(yǎng)與維修 ， 并由專人進(jìn)行管理和記錄 ， 并建立檔案 。 實(shí)行 GMP管理的單位 ， 生產(chǎn)部門和質(zhì)控部門負(fù)責(zé)人不能兼職 。 (1) 實(shí)施涉及兩個(gè)方面 政府獸醫(yī)藥政管理部門 ， 從管理角度出發(fā)把 GMP看成是政府對(duì)獸藥企業(yè)提出的最低要求 ， 并作為獸藥藥政管理部門檢查獸藥企業(yè)和獸藥質(zhì)量的依據(jù) 。 我國對(duì)獸用生物制品生產(chǎn)實(shí)行雙重許可 ， 即生產(chǎn)許可證制度和產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào)制度 。 （三）管理?xiàng)l列、規(guī)范、辦法、規(guī)定和規(guī)程 《 中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程 》 ， 農(nóng)業(yè)部獸用生物制品規(guī)程委員會(huì)編 。 《 獸用生物制品管理辦法 》 ， 2023年 9月 17日業(yè)經(jīng)農(nóng)業(yè)部常務(wù)會(huì)議審議通過，自 2023年 1月 1日起施行。 提出新獸藥注冊(cè)申請(qǐng)時(shí) ， 還要提供菌 （ 毒 、 蟲 ） 種 、 細(xì)胞等有關(guān)材料和資料 ， 并由國務(wù)院獸醫(yī)行政管理部門指定的機(jī)構(gòu)保藏 。 1994年又頒布了 《 獸藥生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范實(shí)施細(xì)則 》 。 證明符合要求和有效 ， 以保證產(chǎn)品的質(zhì)量 。 (2)生產(chǎn)管理和質(zhì)量控制部門的主要負(fù)責(zé)人與高級(jí)技術(shù)人員 應(yīng)具有獸醫(yī)學(xué)或藥學(xué)等相關(guān)專業(yè)知識(shí) ， 經(jīng)過有關(guān)專業(yè)領(lǐng)域和基礎(chǔ)理論的培訓(xùn)和學(xué)習(xí) ， 有豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn) ， 有能力對(duì)生產(chǎn)和質(zhì)量或本專業(yè)領(lǐng)域中出現(xiàn)的實(shí)際問題作出正確的判斷和處理 。 5. GMP軟件方面的基本要求 (1)衛(wèi)生及無菌管理 衛(wèi)生管理 廠區(qū)、車間、操作室、包裝室、儲(chǔ)存庫等必須保持整潔、無堆積廢物；工作人員保持良好的衛(wèi)生習(xí)慣，定期體檢，建立健康檔案。 ? 記錄： 在實(shí)施 GMP管理中 ， 必須認(rèn)真做好生產(chǎn)記錄 、 檢定記錄 、 銷售記錄及用戶意見與不良反應(yīng)記錄 。 質(zhì)量控制部門的主要職責(zé)和權(quán)限包括質(zhì)量監(jiān)督管理和質(zhì)量檢定兩個(gè)方面 。 對(duì)用戶的產(chǎn)品質(zhì)量投訴和產(chǎn)品不良反應(yīng)作詳細(xì)的記錄和調(diào)查處理 ， 并連同原投訴材料存檔備查 。 滅活疫苗不得含有活的本菌或本毒 。 自小瓶中吸取培養(yǎng)物 ， 分別接種 2支 ，每支 ， 1支臵 36?1?C， 1支臵 25?1?C 另取 1支 ， 臵 25?1?C， 均培養(yǎng) 5天 ， 應(yīng)無菌生長 。 如發(fā)現(xiàn)個(gè)別瓶有雜菌或結(jié)果可疑時(shí) ， 可重檢原瓶 (如為安瓶或凍干制品 ， 可重抽樣品 )， 如無菌或無雜菌生長 ， 可作無菌或純粹通過 。 如有細(xì)菌生長 ， 將培養(yǎng)物接種體重 350～ 450g的豚鼠之只 ，每只肌肉注射 1m1， 觀察 10天 。 1．安全檢驗(yàn)的內(nèi)容 檢驗(yàn)外源性污染 滅活或脫毒效果檢查 殘余毒力或毒性物質(zhì)檢查 檢查對(duì)胚胎的毒性 （ 1） 檢驗(yàn)外源性污染 不僅是因?yàn)橛兄虏⌒约?xì)菌的污染 ， 而且即使是非病原菌 ，如數(shù)量過多 ， 其代謝產(chǎn)物也會(huì)影響安全 。 如無毒炭疽芽孢苗菌種的毒力標(biāo)準(zhǔn)是在注射部位引起劇烈水腫 ， 家兔不死亡 ，豚鼠可死亡 1/2， 小鼠可全部死亡 。 1．安全檢驗(yàn)的內(nèi)容 疫苗和免疫血清的成品安全檢驗(yàn)方法主要是動(dòng)物檢驗(yàn) ， 劑量應(yīng)大于使用劑量 。 又如不同日齡的小鼠對(duì)豬丹毒的敏感性也下一致 ， 日齡過大敏感性差 。 用雞作檢驗(yàn)用動(dòng)物 ， 被檢樣品不做處理 。 采用用補(bǔ)體結(jié)合 (COFAL)試驗(yàn) ， 即用 9～ 11日齡的 SPF雞胚 ，制成雞胚成纖維細(xì)胞單層 ， 將用特異性血清中和過的疫苗 (至少含 50個(gè)使用劑量 )接種于成纖維細(xì)胞單層上 ， 維持培養(yǎng)不少于 14天 ， 在此期間每隔 3~4天細(xì)胞繼代 1次 。 (2) 非禽源細(xì)胞的活疫苗檢驗(yàn) —— 熒光抗體檢查法 (2) 非禽源細(xì)胞的活疫苗檢驗(yàn) —— 熒光抗體檢查法 檢驗(yàn)方法及判定： 確定被檢對(duì)象后 ， 取片進(jìn)行染色與鏡檢 。 紅細(xì)胞懸液應(yīng)是豚鼠紅細(xì)胞 、 人 O型紅細(xì)胞 、 雞紅細(xì)胞的等量混合懸液 ， 混合或 分別滴加于不同的細(xì)胞單層上 。 診斷制品 ， 則影響檢疫及診斷的正確性 。 1．效力檢驗(yàn)的內(nèi)容 (4) 抗原量的測定 疫苗效力取決于接種動(dòng)物的抗原量 ， 即一定量病毒 (細(xì)菌 )才能在體內(nèi)增殖到一定程度 ， 促使機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答 。 2．成品的效力檢驗(yàn) （ 1）動(dòng)物保護(hù)力試驗(yàn) —— 使用動(dòng)物的原則 這種方法是以待檢品接種動(dòng)物 ， 經(jīng) 2~3周后 ， 用相應(yīng)的強(qiáng)毒攻擊 。 （ 1）動(dòng)物保護(hù)力試驗(yàn) —— 定量免疫變量攻擊法 將疫苗稀釋為各種不同的免疫劑量接種動(dòng)物 ， 間隔一定時(shí)間 ， 各免疫組均用同一劑量強(qiáng)毒攻擊 ， 觀察一定時(shí)間 ，用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)算能使 50%的動(dòng)物得到保護(hù)的免疫劑量 。 某些活疫苗的菌數(shù)與保護(hù)力之間有著密切而穩(wěn)定的關(guān)系 ，因此 ， 可以不用動(dòng)物來測保護(hù)力 ， 只需要進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù) 。 （ 2）活菌計(jì)數(shù)與病毒量的滴定 —— 蝕斑計(jì)數(shù)或其它滴定病毒量的方法 在我國的獸醫(yī)生物制品的成品檢驗(yàn)中使用血請(qǐng)學(xué)檢驗(yàn)方法 ，主要用于診斷用制品 。 （ 3）血清學(xué)試驗(yàn)檢驗(yàn)方法 D. 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 這在很多診斷用制品中常用 ， 如牛肺疫補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)抗原 、 馬傳染性貧血補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)抗原 、 布魯氏菌補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)抗原等 。 B. 熱型反應(yīng)與發(fā)病觀察 如牛瘟活疫苗 ， 用綿羊效檢 ， 規(guī)定應(yīng)有 2/3羊?yàn)槎ㄐ蜔岱磻?yīng) 。這種試驗(yàn)主要用于： ① 生物制品的試驗(yàn) ， 即根據(jù)生物制品的性狀 (生物學(xué) 、 理化方面等 )進(jìn)行核實(shí)檢查 。 如炭疽芽孢苗靜臵后為透明液體 ， 瓶底應(yīng)有少量白色沉淀 。 凍干制品都要求測定水分含量 ， 水分含量高低 ， 直接影響制品的質(zhì)量和保存 。 在上述兩種方法中卡氏法要求更高 ， 雨天不宜進(jìn)行 ， 且化學(xué)藥劑的配制標(biāo)化保存都比較麻煩 ， 所以一般部使用真空法 。 新制品申報(bào)的資料應(yīng)包括： 新制品只能在經(jīng)獸藥規(guī)程委員會(huì)審定認(rèn)可后方可正式生產(chǎn)、銷售。 真空測定的方法是通過高頻火花真空測定器來測定 ， 凡容器內(nèi)出現(xiàn)白色 、粉色或紫色輝光者為合格 。 測剩余水分的方法有兩種 。 2． 物理性狀檢驗(yàn) (2)血清制品 所有血清都應(yīng)為微帶乳光橙黃色或茶色清朗液體 ， 不應(yīng)有搖不散的絮狀沉淀與異物 。 目前我國規(guī)程中有不少制品有此檢驗(yàn)規(guī)定 。 （ 4）其它效檢方法 (1) 檢驗(yàn)動(dòng)物的影響 效力檢驗(yàn)?zāi)壳爸饕€是以動(dòng)物保護(hù)試驗(yàn)為主 。 例如： 如破傷風(fēng)抗毒素單位的測定 ， 是將被檢血清不同倍數(shù)稀釋與定量標(biāo)準(zhǔn)毒素中和 ， 同時(shí)以標(biāo)準(zhǔn)血清與定量標(biāo)準(zhǔn)毒素作對(duì)照 ， 用小鼠來測定 ， 以與對(duì)照動(dòng)物死亡時(shí)間相近的最高稀釋度數(shù)的一半 ， 即為待檢血清的抗毒單位 。在其它生物制品中也有少數(shù)使用血清學(xué)方法檢驗(yàn)的 ， 如牛瘟活疫苗 ， 在效檢時(shí)當(dāng)體溫反應(yīng)可疑時(shí)可用體溫可疑牛的血清以免作中和試驗(yàn)以判定其效力 。 如無毒炭疽芽孢苗計(jì)活芽孢數(shù) ， 每毫升含活芽孢數(shù)應(yīng)在500萬～ 2023萬之間 。 3~4周后 ， 每只雞肌肉注射 105ELD50的強(qiáng)毒 ， 觀察 14天 。 （ 1）動(dòng)物保護(hù)力試驗(yàn) —— 定量強(qiáng)毒攻擊法 例如： 豬丹毒活疫苗效檢 ， 用小鼠 10只 ， 每只注射 疫苗 ， 14天以后連同未接種的小鼠 3只攻擊 1000個(gè)小鼠 MLD強(qiáng)毒 ， 另 3只攻 1個(gè) MLD。 所以 ， 常以測定抗原量來檢查制品的效力 ， 當(dāng)然實(shí)驗(yàn)室的檢定指標(biāo)應(yīng)和使用效果一致 。 如制豬丹毒滅活疫苗的菌種應(yīng)選擇 2型菌 ， 因?yàn)?2型菌株免疫原性良好 ， 試驗(yàn)證明對(duì)其它菌型也有免疫力 。 若無明顯的紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象可重復(fù)一次 ， 在細(xì)胞單層加入紅細(xì)胞懸液后臵 20～ 25?C培養(yǎng) 30 min， 用 PBS洗滌 ， 再次檢查紅細(xì)胞吸附情況 。 若被檢組出現(xiàn)不明顯熒光 ， 必須重檢 ， 重檢仍出現(xiàn)不明顯熒光 ， 為不合格 。 （ 1） 用于雞的活疫苗檢驗(yàn) —— 檢查禽白血病病毒 用適于接種本疫苗日齡的 SPF雞 20只 ， 點(diǎn)眼 、 滴鼻接種 10個(gè)使用劑量 ， 肌肉注射 100個(gè)使用劑量 ， 接種后 21天 ， 按上述方法重復(fù)接種 1次 ， 第一次接種后 42天采血 ， 進(jìn)行有關(guān)疫病的血清抗體檢驗(yàn) 。 方法 1： 用 9~11日齡 SPF雞胚 20個(gè) ， 分為 2組 ， 每胚各以 10個(gè)使用劑量接種 ， 第一組 10個(gè)胚接種于尿囊腔內(nèi)；第二組 10個(gè)胚接種于絨毛尿囊膜上 ， 在 37?C 培養(yǎng) ， 棄去在接種后 24小時(shí)內(nèi)死亡的胚 ， 但每組胚須存活 6個(gè)以上