光譜分析技術(shù)(好資料)(完整版)
【正文】 ????μm 0 .0 6~1 .2 52 0 e v~1Δ電 子電 子??λEμm 1 .2 5~251 e v~0 .0 5Δ??振 動(dòng)振 動(dòng)λEμm 25~1 0 0 00 . 0 5 e v~0 . 0 0 0 1Δ轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)動(dòng)??λE遠(yuǎn)紅外光譜 （轉(zhuǎn)動(dòng)光譜） 中紅外光譜 （振動(dòng)光譜） 紫外 可見光譜 （電子光譜） 基本原理 帶狀光譜 發(fā)生電子躍遷時(shí)必然要發(fā)生振動(dòng)能級和轉(zhuǎn)動(dòng)能級的躍遷，這使得紫外 可見吸收光譜呈現(xiàn)帶狀 典型的紫外 可見吸收光譜圖 吸收峰 最大吸收波長 (λmax) 基本原理 價(jià)電子 σ電子 → 飽和的單鍵 π電子 → 不飽和的雙鍵、三鍵 n電子 → 孤對電子 分子中分子軌道有 成鍵軌道 與 反鍵軌道 ： 它們的能級高低為： σπ n π* σ* ? ?* ? ?* n 非鍵軌道 反鍵軌道 反鍵軌道 成鍵軌道 成鍵軌道 ?→?* n→?* ?→?* n→?* C O H n p s H →σ * 躍遷： 飽和烴（ CC， CH ） 能量很高， λ150 nm 2. n→σ * 躍遷： 含雜原子飽和基團(tuán)（ OH， NH2） 能量較大， λ150~250 nm 3. π→π *躍遷： 不飽和基團(tuán)（ C=C， C ≡ C ） 能量較小， λ~ 200nm 共軛體系， E更小， λ 200nm 4. n→π *躍遷： 含雜原子不飽和基團(tuán)（ C ≡N ， C=O ） 能量最小， λ 200~400nm 基本原理 影響紫外 可見吸收光譜的因素 1 共軛效應(yīng) 共軛體系越長， π與 π*的能量差越小，紅移效應(yīng)和增色效應(yīng)越明顯。 朗伯 比爾定律 Io It b a A = lg(I0/It) = Kbc 朗伯 比爾定律 吸光系數(shù)： 當(dāng)溶液濃度 c的單位為 g/L,溶液液層厚度 b的單位為 cm時(shí)， K叫“ 吸光系數(shù) ”，用 a表示，其單位為 L 比如，得到的 OD600的數(shù)值如果在 ，表明細(xì)菌處于旺盛生長的對數(shù)生長期， OD6003表明細(xì)菌已經(jīng)飽和等。 2. 產(chǎn)生熒光的有機(jī)物質(zhì)，都含有共軛雙鍵體系，共軛體系越大，熒光越容易產(chǎn)生。 量子點(diǎn) （無機(jī)納米粒子） 熒光染料 （有機(jī)小分子） 熒光蛋白 （蛋白質(zhì)） 熒光光譜的應(yīng)用 —— 電泳 Midori Green Ethidiumbromide 熒光光譜的應(yīng)用 SYBR Green I 實(shí)時(shí)定量熒光 PCR（ RTqPCR） — 分子信標(biāo) 熒光光譜的應(yīng)用 TaqMan 熒光光譜的應(yīng)用 幾種含苯基側(cè)鏈的氨基酸可以發(fā)出熒光，且受微環(huán)境變化的影響，因此可用于作為內(nèi)源熒光探針來研究蛋白質(zhì)構(gòu)象。 ，有機(jī)熒光材料會(huì)遭遇 光漂白 ，長時(shí)間激發(fā)后造成熒光效率的不斷降低；量子點(diǎn)則可承受長時(shí)間高強(qiáng)度的激發(fā)。 （這意味著什么？） 量子點(diǎn) 熒光光譜的應(yīng)用 當(dāng)需要同時(shí)熒光標(biāo)記幾個(gè)不同靶標(biāo)時(shí)，量子點(diǎn)較廣的激發(fā)范圍意味著可以在同一激發(fā)光波長下同時(shí)激發(fā)不同的量子點(diǎn)。分子質(zhì)量為 26kDa，由 238個(gè)氨基酸構(gòu)成。 3. 剛性平面結(jié)構(gòu) 熒光與有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu) 熒光強(qiáng)度與濃度的關(guān)系 CKI F ?熒光的淬滅 熒 光 淬 滅 ：熒光分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子相互作用引起熒光強(qiáng)度降低或消失的現(xiàn)象。 200 Pro多功能酶標(biāo)儀 ELISA 酶 底 物 顯色反應(yīng) 測定波長 辣根過氧化物酶 鄰苯二胺 四甲替聯(lián)苯胺 氨基水楊酸 鄰聯(lián)苯甲胺 2,2‘ 連胺基 2(3乙基 并噻唑啉磺酸 6)銨鹽 橘紅色 黃色 棕色 蘭色 藍(lán)綠色 492 460 4
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