動物細胞培養(yǎng)常用技術(完整版)
【正文】 到飽和密度后，細胞與營養(yǎng)液的交換面積減少，代謝產(chǎn)物積累，PH下降細胞停止增殖，進入停滯期。所謂細胞“一代”，即從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時間。如肝細胞失掉產(chǎn)生精氨酸酶及氨基酸轉移酶的特性后，儲存肝糖元的能力喪失，并很難再現(xiàn)。（Organ Culture） 培養(yǎng)的是器官的原基、器官的一部分或整個器官，使之在體外生存、生長和保持一定功能的方法。動物細胞培養(yǎng)常用技術 動物細胞培養(yǎng)中山大學實驗動物中心前 言 1885年Roux最早嘗試使組織離體培養(yǎng)，材料是雞胚神經(jīng)板，采用生理鹽水為培養(yǎng)液，并首次采用組織培養(yǎng)這個術語。組織培養(yǎng)的細胞生物學特點: ：當人工條件和體內(nèi)實際情況不完全相同時，細胞在體外培養(yǎng)后，一旦失去神經(jīng)體液調(diào)節(jié)和細胞間相互影響，生活在缺乏動態(tài)平衡的環(huán)境中，發(fā)生變化則是必然。不適應和脫分化兩個概念不同：不適應是因為生存條件改變而使分化發(fā)生抑制；從分子水平考慮，脫分化很可能是基因變異所致。如某一細胞系為50代即該細胞已傳代50次。在此時應及時進行換液傳代，否則因細胞中毒受損，大量細胞出現(xiàn)死亡，至少再傳12代后，細胞才能恢復。6)其它添加成分：緩沖系統(tǒng)，常用為HEPES（N’2hydroxyethylpiperazineN’ethanesulfonic acid），緩沖效能(pKa)在20℃，37℃； HEPES不是起維持pH恒定的作用，而是起恒定和抵抗快速pH變化的，所以調(diào)整pH常常用NaHCO3溶液。滲透壓：培養(yǎng)液滲透壓一般介于260~320 mosm/kg之間。2）膠原酶解離細胞法：這種方法對解離胚胎性、正常和惡性組織是很有效的。由于細胞本身是不粘附的，如小鼠白血病細胞和腹水腫瘤細胞；通過機械攪動使細胞保持懸浮狀態(tài)；通過選擇培養(yǎng)得到能懸浮生長的細胞進行懸浮培養(yǎng)。℃，細胞生長緩慢；℃，細胞存活力降低。： 染色體是一種鑒定細胞系的種屬、性別來源較為確切的指標；也是檢查細胞系是否趨于穩(wěn)定，在離體培養(yǎng)條件下細胞有否發(fā)生轉化的可靠指標；是區(qū)別正常細胞與惡性細胞的指標。遇到培養(yǎng)污染要分析原因，及時處理。: 支原體污染細胞后，能抑制細胞代謝和生長，改變核酸合成，影響細胞的抗原性，引起細胞染色體改變，干擾病毒的復制，以及具有類病毒作用。 過濾法：。所以一種細胞冷凍保存之前要測試出其最適冷凍速度，擬保證獲得最高冷凍存活率。具有滲透性的冷凍保護劑可以滲透到細胞內(nèi)，一般是一些小分子的物質，主要有甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。 冷凍保存溫度 冷凍保存溫度是指能長久保存細胞的一個深低溫度。冷凍保存的細胞復蘇時，復溫速率不當也會降低冷凍存活率。 細胞間交叉污染為避免細胞間交叉污染，應注意：了解各細胞系的特征；培養(yǎng)各細胞系的操作手續(xù)要快速；培養(yǎng)各細胞系不用同一瓶的培養(yǎng)液和酶等；吸過培養(yǎng)液和細胞懸液的吸管，不能放回儲存培養(yǎng)液和酶的瓶內(nèi)；經(jīng)常檢查培養(yǎng)物特征，注意任何突然的形態(tài)學改變，通過染色體或同工酶譜分析，檢查是否有交叉污染。支原體檢測方法和處理
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