【正文】 2020 年 3 月 2 目 錄 第一篇 常規(guī)標(biāo)本制作程序 第一節(jié) 組織標(biāo)本收集取材和固定 一、標(biāo)本收集和查驗程序 二、活檢組織取材 （一）取材時必須注意以下問題 （二）各種器官取材的方法 第二節(jié) 尸體解剖的受理和規(guī)則 一、中華醫(yī)學(xué)會規(guī)定尸檢受理規(guī)則 二、尸體解剖須知 三、尸體剖檢的一般常識 四、一般尸體解剖的主要步驟與要求 五、尸體剖檢的取材和固定 六、科學(xué)研究材料的取材 第三節(jié) 組織 固定 （一）固定的作用 （二）固定的目的 （三）固定的注意事項 （四）固定液的使用 第四節(jié) 病理常規(guī)制作程序 一、常規(guī)石蠟切片制作法 （一）組織脫水 （二）組織的透明 （三）組織浸蠟 （四）組織塊包埋 （五）蠟塊的修切 （六）石蠟切片 （七）裱片 （八）烘烤切片 （九）切片的普通染色 （十）蘇木素的種類及其配制法 （十一）伊紅染液的配制 二、超聲波快速石蠟制片法 三、快速石蠟制片法 第五節(jié) 冰凍切片 （一）冷凍切片的種類 （二）冷凍切片的目的 （三）冷凍切片的制作方法 （四）冷凍切片的快速染色法 （一） MW 固定組織 （二） MW 快速石蠟制作法 （三） MW 技術(shù)的特殊染色法 （四） MW 技術(shù)的免疫組化染色法 3 第二篇 各種組織特殊染色法 一、膠原纖維染色法 Van Gieson 染色法 Masson 氏三色染色法 二、網(wǎng)狀纖維染色法 Gomori’s 氨銀法 Godon 和 Swet 氏法 Wilder 氏法 Foot 氏法 三、彈性纖維染色法 Weigert 氏雷鎖辛品紅法 Gomori 醛品紅法 Unna 地衣紅技術(shù) Verhoff 氏酒精蘇木素技術(shù) 四、橫紋肌染色法 磷鎢酸蘇木素染色法（ PTAH） Masson 氏法染色法 Van Gieson 氏法 五、基底膜的顯示 六氨銀顯示法 PAS 顯示法 Masson 氏三色染色法 AFOG 法 六氨銀 —— AFOG 聯(lián)合染色法 六、纖維素染色法 MSB的改良法 PTAH 法 七、細菌染色法 WarthinSatamy 氏法顯示幽門螺桿菌 甲苯胺藍染色法 WadeFite 氏抗酸菌染色法 GrocottGomori 氏六氨銀改良法顯示真菌 六氨銀改良法顯示組織胞漿菌 八、病毒包涵體染色法 Macchiaello 氏改良法顯示 SARS 病毒包涵體 Giemsa 法顯示多種病毒涵體 伊紅和甲基藍顯示合胞和巨細胞病毒包涵體 九、淀粉樣物的染色法 甲基紫法 改良的剛果紅甲醇法 十、神經(jīng)系統(tǒng)染色技術(shù) （一）蘇木素 VG 法染中樞神經(jīng) （二）神經(jīng)細胞尼氏體染色 4 （三）改良的 Masland、 Glees 方法 （四）改良的 Palmgren 氏法染神經(jīng)纖維 （五）改良的 Eger’s 氏法染變性軸索 （六）改良的 Loyez 氏法染神經(jīng)髓鞘 第三篇 組織化學(xué)及其顯示法 一、色素顯示法 硫酸亞鐵法 Masson Fontana 氨銀法 二、含鐵血黃素顯示法 Perls 亞鐵氰化鉀法 三、脂褐素顯示法 PAS 法 Schmorl 氏法 四、鈣鹽顯示法 硝酸銀法 五、脂類染色法 蘇丹 III ② 對于細小標(biāo)本如肺支氣管穿刺物標(biāo)本胃腸鏡活檢標(biāo)本 [1]等，應(yīng)將其染上伊紅顏色后，用擦鏡紙或特別脫水袋將其包上或裝上，以防漏出脫水盒的小孔。具體用大頭針能順利扎入骨組織則可。取材：乳頭及其下組織，腫瘤及腫瘤交界處，腫瘤下胸肌 ，全部淋巴結(jié)（注明組別），根據(jù)各種病變的情況，確定取材的塊數(shù)，如切緣、包膜、腫瘤等均應(yīng)取到各組淋巴結(jié)分別全部切材。 腸癌：切除腸管的長度，腫瘤 生長部位、大小、局部漿膜等情況。有變化 的腸壁厚度，闌尾，腫大淋巴結(jié)。取材：腫瘤 切面一塊，陰莖截除端一塊。取材：腎實質(zhì)厚處及 薄處各取一塊，輸尿管各取一塊。切面：顏色，質(zhì)均勻否，有無壞死，出血，囊性變。取材：擴張的支氣管，支氣管周圍發(fā)炎組織，膿腫壁。 ① 淤血性脾腫大或脾功能亢進，注意靜脈內(nèi)有無血栓，靜脈壁 有無變化，有無梗死，切面上有無含鐵小結(jié)節(jié)。取材：腫瘤及與組織交界處，骨破壞處，軟組織浸潤處。 取材：囊性瘤取囊壁較厚處，實質(zhì)，突起處，囊與輸卵管相連處及輸卵管。 2軟組織腫瘤標(biāo)本：部位、大小、形狀、色澤、表面有無包膜，完整否，硬度，切面有無出血、壞死、囊性變等，與周圍組織的關(guān)系，切面暴露最大面，必要時多作幾個平行切面。 （ 1）死者的死亡證明。 （ 5）同意對尸檢過程進行必要的攝影、錄像，并確認(rèn)是否同意教學(xué)示教。 （ 5）疑因或確因烈性傳染病死亡的病例，尸檢方不具備相應(yīng)尸檢設(shè)施條件者。 三、尸體解剖的一般常規(guī) 1， 參加尸檢的一切人員，都應(yīng)態(tài)度嚴(yán)肅，保持尸體清潔，頭部及外陰部須用紗布遮蓋，參觀者必須嚴(yán)守尸檢室規(guī)則，未經(jīng)許可，不得隨意取用尸檢器材及標(biāo)本，在未得出正確結(jié)論前，對尸檢所見不得隨意外傳。病毒性腦炎或疑有病毒性腦炎的病例，需采取腦組織上作病毒分離者，須在死后 3 小時內(nèi)進行剖檢，首先剖 檢腦部。尸檢時切口最好不經(jīng)手術(shù)切口，對創(chuàng)口內(nèi)外，手術(shù)部縫合及周圍情況應(yīng)仔細觀察，必要時攝影記錄，若一時在原位不能弄清須解決的有關(guān)問題，則連同周圍組織一并切下，以便仔細剖析。 12， 尸檢時如發(fā)現(xiàn)法定傳染病，應(yīng)在確診后及時報告衛(wèi)勤領(lǐng)導(dǎo)機關(guān)，必要時報告當(dāng)?shù)匦l(wèi)生防疫機構(gòu)。 四，一般尸體解剖的主要步驟與要求 （一） [體表檢查 ]稱體重，量體長，觀察發(fā)育、營養(yǎng)狀況，檢查體表有無黃疸，發(fā)疳，出血點，疤痕，創(chuàng)口等，及其部位，大小；眼、耳、鼻、口腔等有無潰瘍、分泌物或液體流出，外生殖器有病變，淺表淋巴結(jié)腫大否；有無尸冷、僵、腐敗現(xiàn)象。 （ 2） 在肋骨軟骨聯(lián)接線內(nèi)側(cè)約 處，將第二肋骨到肋弓的軟骨切斷，緊沿胸骨后壁將橫及縱隔割離，注意勿損及心包及大血管，然后檢查胸腔有無積液，其 12 量及性質(zhì)，必要時涂片檢查與細菌培養(yǎng)。檢查心臟增大否，外膜光滑度，有無滲出物等，心臟按血流方向剖開，測量各瓣膜的周徑及左右心室的厚度。 心臟剖開后，檢查心肌厚度、硬度、色澤、心內(nèi)膜光滑度，瓣膜周圍有無增厚，及贅生物，有無狹 窄或關(guān)閉不全，檢查冠狀動脈開口情況。 （ 4） 腹腔及盆腔器官的取出： 一般先將脾臟摘出，繼之取出小腸、腎上腺、肝、膽囊、胃、十二指腸、胰，最后取出腎及盆腔器官。沿胃大彎剪開胃，檢查粘膜病變，將胃及十二指腸從后壁分離，與胰臟一并取出，在檢查胰臟前，注意觀察脾靜脈有何變化。 （五）腦與脊髓的取出： 1， 從兩耳后經(jīng)頭頂部作一切口，將刀插入切口，切開頭皮，向前后剝離，劃好鋸線。必要時鑿開中耳或?qū)⒅卸〕觥?采取腦脊液培養(yǎng)時，于尸檢前用無菌手術(shù)，在第二及第三腰椎間隙作穿刺，取腦脊液 23ml,置于無菌試管內(nèi)送檢。 動物標(biāo)本全部臟器的每個臟器取一塊，對于部分臟器的根據(jù)需要取材。固定液可以固定任何蛋白質(zhì)，凡有生命的東西，都 由蛋白質(zhì)組成，蛋白質(zhì)被固定，生命就停止，細菌也就失去了活力。 對某些具有 傳染性的標(biāo)本，能防止疾病的擴散。組織經(jīng)過及時的固定，最終可見到切片有鮮艷的染色，而些時如果有一批 未經(jīng)及時固定的組織，將看到最終的結(jié)果是，核染色不清楚，灰淡色，由此可得結(jié)論，固定可以增強染色的作用。因此，對于較大的組織，必須先進行處理，切成制片材料再行固定，這是最佳的處理方法，如遇到胃腸的器官，則應(yīng)將其剪開，放平后，再行固定，若非特急病例，最好在固定后才取材，因這類組織、粘膜和肌層容易分開，沒固定時，難以取得最佳制片材料，對于產(chǎn)酶類的器官如肝、腎、脾等，更要處理好，否則更容易出現(xiàn)自溶現(xiàn)象。例如：丙酮，它對組織有明顯的皺縮，硬化作用，平常它是決不會被用來作固定液的，用它不但太浪費，造價太高，而且也使切片較為困難，但是，對于某些酶的研究，狂犬病腦組織的固定，某些細胞的培養(yǎng)等。時間太短 ，就不能很多的固定組織，因為不管組織大小，固定液浸入組織之中，都需要有一定的時間，時間太短，就會影響組織固定的效果，對以后一系列關(guān)系的處理都有影響，切片質(zhì)量難以保證，固定時間太長，也不好。對于大的標(biāo)本，原則上是不讓其暴露部分被吹干，這是因為在現(xiàn)實 111 當(dāng)中，大的標(biāo)本往往露出容器一大半，因此對于這種情況，應(yīng)取些脫脂棉或紗布，浸濕固定液后，蓋于組織表面，以免使組織被風(fēng)干，影響制片效果。這種方法稱為二次固定或后固定。 Ⅲ類：蛋白變性類，甲醇，乙醇，醋酸等。 甲醛有效固定作用的要點是，在蛋白質(zhì)末端基團之間形成交聯(lián)鏈。 Bouin 氏固定液 苦味酸飽和水溶液 75 ml 甲醛 2 ml 冰醋酸 5 ml 該固定液中的冰醋酸，對膠原纖維等組織有膨脹作用。但美中不足的是：經(jīng)它固定的組織，可與蛋白形成醛交聯(lián)蛋白，這種醛鍵可封閉抗原。 可溶解苯類物質(zhì)為染色步驟中的橋梁試劑。 可與其它試劑配成多種的混合固定液，有時為了加快固定，常采用酒精和其它試劑來配成混合固定液，這種固定液在固定的同時，兼有對組織脫水的作用。因此，它不作為單純的固定液。從經(jīng)濟學(xué)的角度，應(yīng)用酒精固定組織劃不來，例如：一瓶 500ml的甲醛，可配成 500ml 的固定液，按每例標(biāo)本需要 100ml 計，可固定 50例標(biāo)本，而一瓶 500ml 的酒精，即使配成 80% 酒精，也只能固定 6 例標(biāo)本，因此，若用酒精固定組織，其價格比用甲醛固定組織的要高 8 倍。臨用時，取貯存液 950ml，加入 50ml 的冰醋酸，即可使用。另外，在蘇木素和伊紅染液中，也常加入了冰醋酸。 此液原配方要求加入硫酸鈉，但據(jù)我們經(jīng)驗認(rèn)為，硫酸鈉在液中對組織無任何作用，故省去。它可使組織蛋白凝固，迅速硬化而形成白色硬膜，這是由于它穿透力極弱所致，因此它不適合固定較厚的組織。 具有毒性。按實際的應(yīng)稱為微波輻射凝固蛋白。例如多少 ml 的固定液需要多少時間達到多少溫度，用的是哪一檔次的火等。 23 （一） 組織脫水 把含于組織內(nèi)或細胞內(nèi)的水份用脫水劑把 其置換出來的過程稱組織脫水。 組織脫水，目前常用的有兩種方法 人工組織脫水法 該法經(jīng)濟實惠，靈活度高，可根據(jù)不同的組織及其大小來確定脫水時間，也可根據(jù)不同組織及大小分批進行脫水，其優(yōu)點是： 可根據(jù)不同的組織及大小，任意增減脫水時間，達到脫水目的。這種機子容量小，脫水用的試劑不足一升毫升，組織塊脫水用的提籃小，每次只能容納 40 塊組織左右，它適合于較 小的單位，但不適合于大單位。 這種脫水機由電腦、反應(yīng)缸和試劑貯存缸三個部分組成，這三 部分可以分開使用，也可以結(jié)合在一起，形成一個柜式，一臺電腦可控制 5 臺脫水機。 根據(jù)我們對各種不同的脫水機的應(yīng)用比較，認(rèn)為這種脫水機有以下特點： 該機容量大，每次可處理組織塊 250300 塊，這對于大、中等醫(yī)院的病理科較合適。 如為揭蓋式的脫水機，液體容易揮發(fā)，污染環(huán)境，影響工作條件。如果組織在二甲苯放置到一定時間后，仍沒有達到透明，組織塊中間可出現(xiàn)粉白色的現(xiàn)象，這說明組織沒有完全脫水，處理這種情況有兩種方法，一是將其重新放入酒精 25 脫水，然后再透明，這種方法處理的組織很硬，切片較難。如果將沒脫水好的組織繼續(xù)做下去，切片將不完整。它們是二甲苯、苯、三氯甲烷（氯仿）、香柏油、苯酚、松節(jié)油和汽油等。這樣一是保證了試劑不揮發(fā)，尤其是夏天，室溫較高，試劑揮發(fā)快，如為揭蓋式的脫水機，試劑揮發(fā)的程度無法形容，幾乎每天都必須添加，這樣試劑用量大，二是對環(huán)境污染不明顯，保證了舒適的工作環(huán)境。根據(jù)需要，該機可編九套程序輸入電腦，我們的編程如下：第一套為正常室溫下脫水程序，該程序在換新試劑的幾天內(nèi)使用。 圓盤式自動組織脫水機。 可以多層次地進行脫水。據(jù)測定，人體的物質(zhì)組成約含水 55~67%，蛋白質(zhì) 15~18%，脂類 10~15%，無機鹽 3~4%及糖類 1~2%[14]。 一提固定，以往總與福爾馬林分不開，而經(jīng)微波輻射后的固定效果，竟然比前者好，這就解決了一大難題，即快速石蠟切片及冰凍切片的組織固定，以往用加熱固定的方法，其結(jié)果導(dǎo)致福爾馬林蒸發(fā)，使整個房間都充滿福爾馬林氣味，既污染了環(huán)境，也影響了身體的健康。 究竟微波產(chǎn)生的熱量需要多高，才級使蛋白凝固的呢： Masson 氏等人的研究表明，70090℃，對沒有固定的蛋白可發(fā)生變性。 [8]－ [9] 組織固定的結(jié)果是組織中的蛋白質(zhì)凝固，以保存組織中原有的微細結(jié)構(gòu)。應(yīng)用升汞配成的固定液的優(yōu)點有： 細胞核及細胞漿染色清晰。 重鉻酸鉀的不足之處有： 不能沉淀蛋白質(zhì)，它必須和醋酸配成混合固定液，方能發(fā)揮作用，產(chǎn)生鉻酸，沉淀蛋白質(zhì)。 價格較貴。應(yīng)用該固定液的組織，細胞核及細胞漿染色十分清晰，特別是要顯示骨骼肌的橫紋時，應(yīng)用本液可獲得滿意的結(jié)果，但由于其含有醋酸，故不能用于保存細胞顆粒，紅細胞及含鐵血黃素。冰醋酸為無色透明的液體，易