【正文】 ， 改變產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量 ，甚至出現(xiàn)新的品種 ； 4）分析雜交結(jié)果 ，可以總結(jié) 遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)移和傳遞規(guī)律 ， 促進遺傳學(xué)理論的發(fā)展 。 特點： 堿基類似物： 取代相應(yīng)堿基進入 DNA鏈，具有 很高的特異性，但回復(fù)突變率高，很少使用。 這樣 ， 可大大提高篩選的 工作效率 。 對 野生型菌株 單誘變因素有時也能取得好的效果 ， 但對老菌種單一誘變因素重復(fù)使用突變的效果不高 ， 這時可利用 復(fù)合因素 來擴大 誘變幅度 ， 提高 誘變效果 。 ? 抗反饋突變株一般通過抗結(jié)構(gòu)類似物突變的方法篩選。誘變因素 的種類很多 ， 有 物理的 、 化學(xué)的和生物的三大類 ， 見表 2－ 1。 菌種的自然突變往往有兩種可能性 :菌種衰退 ,生產(chǎn)性能下降 。 （五）毒性試驗 ? 自然界的一些微生物是在一定條件下產(chǎn)毒的 ， 將其作為生產(chǎn)菌種應(yīng)當(dāng)十分當(dāng)心 ， 尤其與食品工業(yè)有關(guān)的菌種 ， 更應(yīng)慎重 。 分初篩、復(fù)篩。 因此還必須分離 ， 純化 。 ? 富集培養(yǎng)的一般方法：采用有利于目的菌種而不利于無關(guān)微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)條件，以達到使目的菌種在群體中比例上升的目的。 從自然界篩選 ? 采樣季節(jié)：以溫度適中 ， 雨量不多的秋初為好 。 ? 采樣： 有針對性地采集樣品 。 ? 實驗室或生產(chǎn)用菌種若不慎污染了雜菌 ， 也必須重新進行分離純化 。 三、新種分離與篩選的步驟 （ 一）采樣 采樣對象 以采集土壤為主 。 ? 采土季節(jié)以春秋兩季最好。7H2O ，加水 1000ml。 常用的初選方法： ? 水解酶產(chǎn)生菌的篩選： 將酶的作用底物加在培 養(yǎng)基中，接種后適溫培 養(yǎng)，根據(jù)菌苔周圍是否 產(chǎn)生水解圈篩選出水解 酶產(chǎn)生菌。 培養(yǎng)條件包括：培養(yǎng)基 pH值 發(fā)酵溫度 供氧量等。 自然選育 在生產(chǎn)過程中 ， 不經(jīng)過人工處理 ， 利用菌種的 自然突變 而進行 菌種篩選 的過程叫做 自然選育 。 （ 2） 基因突變 是指 DNA分子結(jié)構(gòu)中的某一部位發(fā)生變化（又稱 點突變 ）。 ? 一般突變率隨誘變劑量的增大而增高，但達到一定劑量后，突變率會下降。 用作誘變的出發(fā)菌株必須對它的 產(chǎn)量、形態(tài)、生理 等方面有相當(dāng)了解。 D 變異菌株的篩選 誘變育種工作的一個主要任務(wù)是獲得 高產(chǎn)變異菌株 。誘變效率高，但它可能 影響鄰近基因的性能。 但是 ， 一個菌種 長期使用誘變劑處理之后 ， 其 生活能力 一般要逐漸下降 ， 例如 生長周期延長 ，孢子量減少 ， 代謝減慢 ， 產(chǎn)量增加緩慢 ， 誘變因素對產(chǎn)量基因影響的有效性降低 等 。 所謂 營養(yǎng)缺陷型菌株 是微生物經(jīng)誘變劑處理后產(chǎn)生的一種 生化突變體 。 參與融合的親株數(shù)并不限于一個 ， 可以多至三個 、 四個 ，這足一般常規(guī)雜交所達不到的 。 根據(jù)微生物細胞壁組成和結(jié)構(gòu)的不同 ， 采用不同的酶 ， 有時還要采取一些措施 ， 如添加甘氨酸 、蔗糖或抗生素等 ， 以提高細胞壁對酶解的敏感性； 原生質(zhì)體對滲透壓極其敏感 ， 低滲易引起細胞破裂 。 ? 篩選出來的融合重組子還需要對它們進行生理生化及生產(chǎn)性能的測定。 ? 細菌菌體培養(yǎng)時間一般為 1~2天，產(chǎn)芽孢的細菌培養(yǎng)則需要 5~10天。將孢子接入含液體培養(yǎng)基的搖瓶中，于搖瓶機上恒溫振蕩培養(yǎng)，獲得菌絲體（短菌絲），作為種子。但也與所選用工藝條件有關(guān)。 ?菌種在固體培養(yǎng)基上可呈現(xiàn)多種不同代謝類型的菌落，氮源品種越多，出現(xiàn)的菌落類型也越多，不利于生產(chǎn)的穩(wěn)定。 培養(yǎng)時間和冷藏時間 （ 1）培養(yǎng)時間 ?一般來說， 衰老的孢子不如年輕的孢子 ，因為衰老的孢子已在逐步進入發(fā)芽階段，核物質(zhì)趨于分化狀態(tài)。 接種量 ?接種量大小影響到培養(yǎng)基中孢子的數(shù)量，進而影響菌體的生理狀況。但接種量過大或者過小，均會影響發(fā)酵。 五、種子異常分析 ?菌種生長速度，過快或過慢 ?菌絲結(jié)團 ?菌絲粘壁 第四節(jié) 菌種的保藏與復(fù)壯 一、菌種保藏的意義 菌種是從事微生物學(xué)以及生命科學(xué)研究的基本材料，特別是利用微生物進行有關(guān)生產(chǎn)如抗生素、氨基酸、釀造等工業(yè)，更離不開菌種。 B 石蠟油封存法（酵母） 向培養(yǎng)成熟的菌種斜面上，倒入一層滅過菌的石蠟油，用量要 高出斜面一厘米 ，然后保存在冰箱中。 其次 ， 將斜面孢子制成孢子懸浮液接入沙土管中或?qū)⑿泵骀咦庸蜗?直接與沙土混合 ， 于干燥器中用真空泵抽干 ， 放在冰箱內(nèi)保存 。 這種方法的 基本操作 過程是先將微生物 制成懸浮液 ， 再 與保護劑混合 ，然后放在特制的安瓶管內(nèi)，用低溫酒精或干冰，使其迅速凍結(jié)，在 低溫下用真空泵抽干 ，最后將安瓿管真空熔封，并低溫保藏。這是因為液氮的溫度可達 一 196℃ ，遠遠低于其 新陳代謝作用停止的溫度（一 130℃ ） ，所以此時菌種的 代謝活動已停止 ， 化學(xué)作用亦隨之消失 。 由于液氮要蒸發(fā) ， 這樣溫度就會上升 ， 冰晶狀態(tài)發(fā)生變化 ， 從而導(dǎo)致菌種死亡 。 菌種保藏的原理是什么？常見的軍種保藏方法有哪些？ 菌種退化的原因有哪些？簡述防止菌種退化的措施。 （ 4）重新培養(yǎng) 當(dāng)要使用或檢查所保存的菌種時，可將安瓿管從冰箱中取出，室溫或 35－ 40℃ 水浴中迅速解凍 ，當(dāng) 升溫至 0℃ 時即可打開安瓿管 ，將菌種移到適宜的培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)。 （ 2） 菌種準(zhǔn)備及分裝 因為液氮法菌種要經(jīng)受 超低溫的冷凍過程 。 保護劑的作用可能是在冷凍干燥的 脫水過程中代替結(jié)合水而穩(wěn)定細胞成分（細胞膜）的構(gòu)型 ， 防此細胞膜因為凍結(jié)而破壞 。 D真空冷凍干燥保藏法 （ 細菌 ， 防線菌 ） 真空冷凍干燥保藏法 是目前常用的較理想的一種方法。 保存期約一年左右。其任務(wù)首先是使菌種不致死亡，同時還要盡可能設(shè)法把菌種的優(yōu)良特性保持下來而不致向壞的方面轉(zhuǎn)化。 ? 通常接種量，細菌 1~5%，酵母菌 5~10%，霉菌 7~15%，有時 20~25% 三、種子質(zhì)量的控制措施 ?種子質(zhì)量的最終指標(biāo)是考察其在發(fā)酵罐中所表現(xiàn)出來的生產(chǎn)能力。 培養(yǎng)條件 （ 1）溫度 （ 2）通氣量 （ 3） pH 種齡 ? 種齡：是指種子罐中培養(yǎng)的菌絲體開始移入下一級種子罐或發(fā)酵罐時的培養(yǎng)時間。 ?措施：孢子培養(yǎng)的時間應(yīng)該控制在 孢子量多、孢子成熟、發(fā)酵產(chǎn)量正常 的階段終止培養(yǎng)。如土霉素生產(chǎn)菌種在高于 37?C培養(yǎng)時，孢子接入發(fā)酵罐后出現(xiàn)糖代謝變慢，氨基氮回升提前，菌絲過早自溶，效價降低等現(xiàn)象。 種子質(zhì)量的控制 一、影響孢子質(zhì)量的因素及控制 ?培養(yǎng)基 ?培養(yǎng)條件 ?培養(yǎng)時間和冷藏時間 培養(yǎng)基