【正文】 附錄 B t值表 附錄 C 舉例 相關(guān)工作組和評論摘要 相關(guān)工作組和委員評論摘要 質(zhì)量系統(tǒng)方法 相關(guān) NCCLS出版物 6 前 言 當(dāng)某分析物濃度或活性的測量值與真值成數(shù)學(xué)上的直線關(guān)系時，我們認(rèn)為這種定量測定方法是線性的。因而，遵守這些自愿 一致性 標(biāo)準(zhǔn)（或指南）不能減輕使用者對遵守應(yīng)用規(guī)定的責(zé)任。 建議 ： NCCLS文件作為建議標(biāo)準(zhǔn)或指南處在被臨床檢驗界評審的第一階段。 出版物 NCCLS文件以標(biāo)準(zhǔn)、指南、委員會報告出版。 1 EP6A ISBN 1562384988 Volume 23 Number 16 ISSN 02733099 Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach。 標(biāo)準(zhǔn) ： 通過一致化過程形成的文件，并對材料、方法、或?qū)嵺`以不能修改方式明確規(guī)定其特定的基本要求。此文件需要接受廣泛徹底的技術(shù)審核，包括對范圍、方法、用途和逐字逐行對技術(shù)和行文內(nèi)容的全面評審。 評 論 實驗室使用者 的評論對一致化過程是很重要的。對于分析和臨床實驗方法來說，線性特征是非常重要的。 第一版 EP6P僅用 線性失擬誤差 檢驗（ LoF檢驗）來判斷線性關(guān)系。然而， EP6A作為一種多項式回歸方法，是一種非線性選擇的特殊參數(shù)模型，特別能夠很好地鑒別非線性。 NCCLS認(rèn)識到醫(yī)學(xué)術(shù)語在美國、歐洲和其他地方表達(dá)不一致，這些不同也表現(xiàn)在 7 NCCLS、國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ ISO）和歐洲標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ CEN）的文件中。 所有的術(shù)語和定義為了能得到更廣泛的應(yīng)用，在下一次的版本中將再一次修正。精密 度很差時，會妨礙線性關(guān)系的評價，因而重復(fù)性的檢查也包括在內(nèi)。線性試驗有助于評價偏倚的大?。ǖ蔷€性并不是偏倚的全部），偏倚是測量誤差的一部分。這種方法的優(yōu)點是非?？煽?，且基于嚴(yán)格的科學(xué)原理。 允許誤差來表示。 最小二 乘法 （ Least square regression） ： 一種統(tǒng)計學(xué)方法 ， 由所有數(shù)據(jù)點得到的直線或曲線上每個點到 X軸 （ 即與 Y軸平行 ） 的垂直距離的平方和達(dá)到最小。 測量范圍 （ Measurement range） ： 指測量儀器的誤差在特定范圍內(nèi)的 一系列 分析物的測量結(jié)果 ，以前稱為可報告范圍。 2． 4 實驗方法的概述 本指南所用的多項式回歸最初由 Kroll等提出，有嚴(yán)密的統(tǒng)計學(xué)規(guī)律，且容易用表格來完成。 3． 2 實驗時間 全部實驗數(shù)據(jù)盡可能在較短的時間內(nèi)收集，如可能，單個分析試驗最好在一天內(nèi)做完。 本指南推薦用高值和低值濃度的樣本按比例精確配成等間距的不同濃度樣本，但等間距不是本方法所必需的。如果上述條件不可避免，則應(yīng)在最后的報告 中注明在評價實驗中所用的標(biāo)本處理方法或基質(zhì)類型。對于有些分析系統(tǒng)來說，允許用病人的標(biāo)本稀釋法來評價線性，可用經(jīng)認(rèn)可的稀釋液來對超過分析范圍的病人標(biāo)本進(jìn)行稀釋，這時需提供材料證明該稀釋液是可用于該分析系統(tǒng)的。注意這些處理可能改變分析物或基質(zhì)的物理或化學(xué)特性。 水溶液 當(dāng)用水溶液時，對分析方法的響應(yīng)曲線的影響未測試，基質(zhì)效應(yīng)可能影響到響應(yīng)曲線和結(jié)果的解釋。 4． 5 分析順序 14 分析順序應(yīng)是隨機(jī)的，但如果存在明顯攜帶污染或漂移，則可妥協(xié)。 以下以五個濃度等間距的配制（參考附錄 A： 5到 11個等間距濃度的分配方法）舉例。 V1+C5如需配制 110單位的上述分析物溶液，則可以用 第 1管溶液和 5管溶液混勻，它的編號數(shù)為 。對于某些分析物，或在某個濃度水平，需重復(fù)測量 35次。在圖上，每一個Ｙ值有一個對應(yīng)的Ｘ值，將每個濃度水平重復(fù)測定的均值點在圖上，手工方法或用計算機(jī)將這些點連接起來，觀察每個點與直線的大致偏差，這樣容易發(fā)現(xiàn)異常點，明顯的抄寫錯誤，或儀器故障等。離群值應(yīng)從數(shù)據(jù)中刪除。離群值指某結(jié)果不適用其它數(shù)據(jù)所擬合的模型，可以通過統(tǒng)計學(xué)方法計算，但大多數(shù)情況下，目視檢查檢測值與預(yù)期值就可以發(fā)現(xiàn)離群值。如五個濃度水平的覆蓋范圍為 20到 100mg/dL，等間距時其它濃度分別為 40， 60， 80 mg/dL，配制溶液時參見 Appendix A。 一次多項式 模型中的 b0和 b1兩個系數(shù)不用分析，因為它們不反映非線性。 非線性度 通過計算回歸 標(biāo)準(zhǔn)（誤）差（ Sy,x），確定 最適的 一次多項式 或 三次多項式 模型。 （ 2）觀察響應(yīng)（測量）濃度與預(yù)期值散點 圖，判斷非線性是在分析濃度范圍的兩端或是中間。 兩次重復(fù)測定時，可以用手工方法方便地計算兩次測量的差值，如下： 2) 計算每個樣本濃度處的兩次重復(fù)測量的差值； 3) 計算差值的平方； 4) 差值平方的求和； 5) 除以（樣本數(shù) *2）； 6) 求平方根。 有時不精密度在不同 濃度時是明顯不同的，這是最好選用加權(quán)回歸線性模型，它是采用每個濃度重復(fù)測定方差的倒數(shù)。 線性聲明的 確認(rèn) 本指南旨在幫助用戶 核實 其檢測系統(tǒng)該 方法聲明的線性范圍是合適的。 6． 4 其它誤差影響 不合格的實驗結(jié)果可能來自于程序錯誤，儀器、試劑或定標(biāo)問題，環(huán)境因素，方法錯誤，或基質(zhì)（包括干擾）。 發(fā)布線性聲明的指導(dǎo)方針 推薦格式 推薦格式如下，除非方法開發(fā)者提供特定的格式（包括線性范圍和最大允許偏差）。例如，如果每次檢測需要 ， 5個濃度水平各測 2次 , 那么需要 5ml標(biāo)本， e或者至少高濃度和低濃度標(biāo)本各 需要 5ml。最后按非線性反應(yīng)模型進(jìn)行回歸分析， 評價 線性模型與非線性模型的差異，與實驗室設(shè) 定的目標(biāo)進(jìn)行比較。在 EP15文件中，是用一個濃度水平評價精密度，而在本指南中，用五個不同濃度水平標(biāo)本的 SD來評價。 有四個濃度水平的 一次多項式 和 二次多項式 擬合模型差值的百分比超 過實驗室設(shè)定的 5%目標(biāo)，因而該系統(tǒng)被認(rèn)為非線性的，要求重新分析。 標(biāo)本 測量值 1 測量值 2 均值 1 2 3 4 5 6 從表中可以看出，沒有明顯的離群值。標(biāo)準(zhǔn)差的大小也顯示 二次多項式 模型較 一次多項式 和 三次多項式 模型更適合該組數(shù)據(jù)。 說明： 本例中，去掉一個數(shù)據(jù)點重新進(jìn)行統(tǒng)計分析，雖然顯示的是一個非線性反應(yīng)曲線，但差值比實驗室規(guī)定值要小，因而通過縮小范圍后，認(rèn)為該方法是呈線性。 均值和回歸線分析見圖 C3。 圖 C1： IgM線性實驗 —15稀釋 度 圖 C2： IgM線性評價差值點圖 —15稀釋 29 例 2： Ca 假定實驗室設(shè)定 Ca的重復(fù)性和非線性誤差均為 ，它不是百分比形式，因為大多認(rèn)為 Ca的偏差不是成比例變化的，是一個恒量。從表中可知， 二次多項式 模型比 一次多 項式 線性要好，有統(tǒng)計意義的顯著性系數(shù)（ t=，超過查表的 ）。重復(fù)性差異檢測如下： 標(biāo)本號 均值 差值 Diff Diff 2/2 % Diff %Diff 2/2 1 .045 2 3 4 5 五個標(biāo)本的差值的平方和（ D2/2）為 ，平均值為 ，平方根為 ，也就是五個標(biāo)本的重復(fù)性（ SD表示）。 稀釋方案 S=5樣本 S=6樣本 S=7樣本 S=8樣本 1：低濃度樣本（ L） 1：低濃度樣本（ L） 1：低濃度樣本（ L） 1：低濃度樣本（ L） 2： + 2： + 2： + 2： + 3： + 3： + 3： + 3： + 4： + 4： + 4： + 4： + 5：高濃度樣本（ H） 5： + 5： + 5： + 6：高濃度樣本（ H） 6： + 6： + 7：高濃度樣本（ H） 7： + 8：高濃度樣本（ H） S=9樣本 S=10樣本 S=11樣本 1：低濃度樣本（ L） 1：低濃度樣本（ L） 1：低濃度樣本（ L） 2： + 2： + 2： + 3： + 3： + 3： + 4： + 4： + 4： + 5： + 5： + 5： + 6： + 6： + 6： + 7： + 7： + 7： + 8： + 8： + 8： + 9：高濃度樣本（ H） 9： + 9： + 10：高濃度樣本（ H） 10： + 11：高濃度樣本（ H） 25 附錄 B： t值表 下表為 t檢驗分布表，在不同自由度時雙側(cè)可信度為 、 。在括號內(nèi)填寫適當(dāng)?shù)脑~語或數(shù)值。第一步是分析數(shù)據(jù)和操作方法，試圖找到問題的原因，有時重復(fù)該實驗也是可取的，增加樣本數(shù)（特別是在曲線部分）或增加重復(fù)次數(shù)（特別是不精密度差時）。不論線性是如何確定的，都可以用本指南進(jìn)行 確認(rèn) 。 以下為線性評價方法的流程圖，每個任務(wù)單元的附加說明參見相關(guān)章節(jié)。 如果重復(fù)測量次數(shù)超過 2次，則隨機(jī)誤差要用方差分析來計算。 考慮 隨機(jī)誤差 線性評估還應(yīng)考慮隨機(jī)誤差（本指南中用重復(fù)性來評估）的影響，隨機(jī)誤差來源于隨機(jī)變異（分析系統(tǒng)的變異），可能會導(dǎo)致非線性的評估能力減低。 每一個濃度處的線性偏差（ DL）計算如下： 18 DLi=p(Xi)—（ b0+b1Xi） X的取值范圍從 X1到 Xs， p(Xi)為最適多項式回歸模型在 Xi處的值，因而 DLi為在每個不同濃度處 二次多項式 模型與 一次多項式 （線性）模型的差值，或 三次多項式 模型與 一次多項式 （線性）模型的差值，也即非線性模型與線性模型在每個濃度點的差值。 RRdf， L為準(zhǔn)備的不同濃度樣本數(shù)， R為重復(fù)檢測次數(shù)， Rdf為回歸分析時的自由度 ,指 Rdf回歸模型中系數(shù)的數(shù)量（包括 b0）。 然后做一 次、二次和三次 多項式回歸分析，可以借助多種商業(yè)統(tǒng)計軟件完成。 確定線性范圍 方法概述：多項式線性評價 多項式線性評價首先是假設(shè)數(shù)據(jù)點是非線性的，在隨機(jī)誤差很小的前提下，假設(shè)數(shù)據(jù)點完整地落在線性或曲線范圍內(nèi)。查找問題原因，必要時請求生產(chǎn)廠家協(xié)助。如果發(fā)現(xiàn)任何明顯的偏差，糾正錯誤后，整批數(shù)據(jù)必須被代替。 4． 9 臨床上幾個重要的濃度水平 評價