x射線晶體衍射測定蛋白質三維結構(完整版)
【正文】 并經冷凍技術處理 ③重原子衍生物制備 ④衍射數(shù)據(jù)收集 ⑤衍生數(shù)據(jù)分析和改進 ⑥結構模型的獲?。òㄐ拚? （ 2）晶體生長過程及影響因素 ? 晶核（盡量少） ? 微晶（可用作晶種） ? 晶體在數(shù)小時至數(shù)月后出現(xiàn) ? 2個問題： ① 是鹽晶嗎？ ② 能給出有用的衍射嗎？（多晶 /雙晶） ? 影響因素 ? 物理因素 ： 溫度、壓力、震動、溶劑清潔度、試劑純度、重力、外加物理場等 ? 生物化學因素 ： pH、離子強度、沉淀劑 /添加劑的類型和濃度等 ? 其他 ： 溶液過飽和度、純度等 “經驗” “機器人” （ 2）晶體生長過程及影響因素 （ 3）結晶方法 ? 批量結晶法 batch crystallization ? 透射法 crystallization by dialysis ? 液相擴散法 liquid diffusion ? 氣相擴散法 vapor diffusion ? 氫氘交換質譜技術 Enhanced amidehydrogen/deuteriumexchange mass spectrometry, DXMS ? 生物玻璃 bioglass （ 4）晶體的初步鑒定 小分子晶體 蛋白質晶體 邊界 完整，漂亮 常不完整，易出現(xiàn)多晶 硬度 偏硬，易碎成 2瓣或幾瓣 偏軟，易碎成粉 脫水 不變化 因脫水而變壞 溶解性 慢 快 偏光性 強 相對弱 染色性 弱 強 漂浮性 下沉 漂浮 （ 5）衍射數(shù)據(jù)收集 ? 晶體的處理：低溫液氮氣冷流技術 ? 數(shù)據(jù)收集儀： 底片、面探測器 衍射分析儀器的發(fā)展 ? 射線種類：連續(xù)射線 特征射線 電子衍射 中子衍射 ? 探測技術：膠片 閃爍體計數(shù)器（點） （ IP） CCD探測器（面） 圖 222 石英的衍射儀計數(shù)器記錄圖（部分） *右上角為石英的德拜圖，衍射峰上方為（ hkl）值， β 代表 Kβ 衍射 底片（外森堡相機、徘循相機） ? 優(yōu)點： ? 多點同時收集 ? 容易保存 ? 價格便宜 ? 缺點 o 存在“化學霧”背景和 X射線散射背景 o 費時、費力 計數(shù)管（四圓衍射儀） ? 將 X射線光子強度轉換為電信號，信號放大后再轉換成數(shù)字存入計算機隨時調用 ? 逐點收集數(shù)據(jù) ? 優(yōu)缺點與底片相反 面探技術 SMART APEXCCD衍射儀 Smart CCD Overview SMART APEXCCD探測器 ? 金屬絲構
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