【正文】 培養(yǎng)。無生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機(jī)肥培養(yǎng)，不加生物炭。按照各要求處理，將一定量土壤、所需有機(jī)肥及生物炭混勻，做好補(bǔ)水（即補(bǔ)充所加入的干燥有機(jī)肥和生物炭所需的水量），放入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。用粉碎機(jī)粉碎生物炭，生物炭粉碎干粉過60目篩，在塑封袋中儲存?zhèn)溆谩Ｍㄟ^3,5二硝基水楊酸比色法計算培養(yǎng)液中葡萄糖含量，測定不同時刻土壤中蔗糖酶活性的變化情況。通過向預(yù)培養(yǎng)的不同組土壤中注入等量的H2O2溶液，采用滴定法，計算培養(yǎng)液中剩余H2O2量，測定不同時刻土壤中過氧化氫酶活性的變化情況。中國在生物炭對土壤酶活性影響的研究還有很大的空白需要去填補(bǔ)。大部分的國外研究成果顯示，在土壤中添加生物炭會增加土壤微生物量，土壤中的微生物群落組成結(jié)構(gòu)和土壤酶活性會有明顯的變化[15]。與此同時，土壤的性質(zhì)和組成成分也極大地影響著土壤中微生物和酶的活性。研究發(fā)現(xiàn)[9]，生物炭的添加增加了兩種農(nóng)田土壤（微酸性和堿性土壤）的微生物量碳含量。但由于受不同來源生物炭的性質(zhì)不同、同源生物炭施用量不同、不同類型土壤質(zhì)地不同、同種土壤施肥量不同等因素的影響，目前有關(guān)生物炭的施用對有機(jī)肥土壤中重要酶活性影響的研究結(jié)果并不是很明確，因此當(dāng)今國內(nèi)外學(xué)者對土壤中重要酶在有機(jī)肥土壤中施用生物炭后活性的情況仍存在爭議。另外，隨著生物炭施加量的增多，土壤重要酶活性的持續(xù)時間會有一定地延長，當(dāng)施加高量（5%)生物炭時，土壤酶活性在50d仍能保持峰值。因此，施加生物炭在改善土壤肥力、生態(tài)環(huán)境等方面有著積極的影響。本文在此基礎(chǔ)上，通過實驗不同量生物炭對施用有機(jī)肥的磚紅壤中重要酶活性的影響，研究探討施用有機(jī)肥后的磚紅壤最適生物炭施用量，選擇合適的生物炭，以期使施用有機(jī)肥土壤得到較好的改良效果，促進(jìn)植物生長。研究發(fā)現(xiàn)，竹炭的添加增加了土壤微生物量碳、氮、磷的含量[10]。土壤作為適合微生物生存的微環(huán)境，具有六大特點[13]：土壤中的微生物種類多樣，微生物量巨大；存在復(fù)雜的營養(yǎng)交互作用；活微生物在土壤中占據(jù)的空間較小，僅占土壤中生物有效空間的5%以下；土壤膠體能吸附重要的生物大分子如DNA、蛋白質(zhì)等；微生物在土壤固相中居于核心地位；并存著生物調(diào)節(jié)和非生物調(diào)節(jié)的生物化學(xué)反應(yīng)。同時，研究發(fā)現(xiàn)添加生物炭后，微酸性土壤和堿性土壤中的微生物量碳含量能夠得到提升[8]。 研究的目的與意義測定不同量生物炭對施用有機(jī)肥的磚紅壤中重要酶活性的變化情況，探索適量生物炭對磚紅壤中重要酶活性的積極影響。第二方面：測定在不同量生物炭下土壤脲酶活性的變化情況。整合三方面的實驗數(shù)據(jù)，通過Excel作圖，研究在不同量生物炭下施用有機(jī)肥土壤中重要酶的活性情況，探索生物炭對土壤和土壤酶產(chǎn)生積極影響的最適量。 有機(jī)肥的處理將有機(jī)肥料在6070℃條件下恒溫烘干，通過粉碎機(jī)粉碎，過60目篩，在塑封袋中儲存?zhèn)溆谩?溶液配制酶促反應(yīng)試劑的配制：準(zhǔn)確量取1ml的30%H2O2溶液，放入100ml的容量瓶中，稀釋至100ml，并定溶。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，%過氧化氫。高生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機(jī)肥和5%的生物炭。h)。按照各要求處理，將一定量土壤、所需有機(jī)肥及生物炭混勻，做好補(bǔ)水（即補(bǔ)充所加入的干燥有機(jī)肥和生物炭所需的水量），放入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。將三角瓶密封，置于38℃恒溫中培養(yǎng)。將三角瓶密封，置于38℃恒溫中培養(yǎng)。將三角瓶密封，置于38℃恒溫下培養(yǎng)。 土壤預(yù)培養(yǎng)實驗將所需土壤的含水量調(diào)整到約田間持水量的60%（一般加水量為土壤量的15%到20%之間，以不粘結(jié)但很濕潤為準(zhǔn)），將土壤容器用塑料薄膜封蓋以免水分過快損失，將塑料薄膜用針扎一些小孔，以保持氣體流通，保證土壤重要酶的活性。在培養(yǎng)開始后的第10天、第20天、第35天、第50天測定土壤過氧化氫酶活性。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。上述處理在37℃恒溫下培養(yǎng)24h后，做如下處理：培養(yǎng)結(jié)束后，取出并迅速過濾。：。土壤的脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機(jī)質(zhì)含量、全氮和速效氮含量呈正相關(guān)。 操作步驟標(biāo)準(zhǔn)曲線：取6支50ml容量瓶，分別加入NH3N標(biāo)準(zhǔn)溶液0、10ml，定容后，NH3N的含量分別為0、1120mg/L。 試劑配制3,5二硝基水楊酸溶液：，溶于20ml 2mol/L氫氧化鈉和50ml水中，用蒸餾水定溶至100ml。應(yīng)用Excel軟件以實驗中標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光度（y軸）對濃度（x軸）作圖，擬合其方程，得出吸光度B和濃度的關(guān)系，并計算各處理樣品的濃度[20]。 生物炭對土壤主要酶活性的整體影響由圖4可知，在施用有機(jī)肥的土壤中加入生物炭，土壤中重要酶的活性都有增加。但其促進(jìn)效果差別巨大，土壤重要酶活性增強(qiáng)幅度從5%到150%不等。(3)在土壤生境中， 過氧化氫酶能反應(yīng)出土壤腐殖化強(qiáng)度及有機(jī)質(zhì)積累程度，脲酶活性反應(yīng)出土壤氮素供應(yīng)強(qiáng)度， 蔗糖酶在糖類物質(zhì)的水解和土壤碳素循環(huán)的過程中起著積極的作用[18]。未來，將在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步開展對生物炭的研究。在此之前，有亞馬遜流域成功利用生物炭的顯現(xiàn)；在未來，隨著對生物炭的研究，其將會在一定的農(nóng)業(yè)范圍內(nèi)進(jìn)行開發(fā)使用。實驗證明生物炭能夠在不同程度上增加土壤重要酶活性，并延長土壤重要酶活性持續(xù)時間，在改善土壤的生境，增加土壤的肥力，促進(jìn)作物的生長方面有著積極影響。(g土壤中生物炭對不同酶影響情況差別很大，酶活性增強(qiáng)幅度從10%到200%，其中對脲酶活性影響最大，過氧化氫酶影響最小。從整體的數(shù)據(jù)來看：在施用有機(jī)肥的磚紅壤中加入生物炭后，過氧化氫酶活性程度和持續(xù)時間都有了一定的提高，而且隨著生物炭量的增多其效果越明顯，雖在其活性在第10d后仍開始下降，但不同于未加入生物炭的有機(jī)肥土壤，其活性在第35d又開始回升，到50d時其活性已接近之前的峰值。 操作步驟標(biāo)準(zhǔn)曲線做法：取0、定容到50ml，其濃度分別為含有葡萄糖0、10mg/L。顯色30min后，定容。通?？梢酝ㄟ^測定生成的氨的數(shù)目以表示土壤脲酶的活性。H2O2的提?。悍Q取5g土壤，置于150ml三角瓶中，%過氧化氫。蔗糖酶活性以單位時間（1h）、單位土壤（1g）生成的葡萄糖的質(zhì)量（mg）表示，即mg/(g中生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機(jī)肥和2%的生物炭。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。按照各要求處理，將一定量土壤、所需有機(jī)肥及生物炭混勻，做好補(bǔ)水（即補(bǔ)充所加入的干燥有機(jī)肥和生物炭所需的水量），放入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。用NH3N標(biāo)準(zhǔn)溶液做標(biāo)準(zhǔn)曲線，取濾液加入顯色劑待其顯色后，測定各處理NH3N生成量脲酶活性采用單位時間（h），單位質(zhì)量土壤（1g）所催化生成的NH3N的量（mg）表示，即mg/（g稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，均勻加入2ml甲苯，處理15min。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，均勻加入2ml甲苯，處理15min。 溶液配制10%尿素：準(zhǔn)確稱量10g尿素溶解并定容為100ml1mol/L氫氧化鈉：準(zhǔn)確稱取4g氫氧化鈉溶解并定容為100ml檸檬酸鈉緩沖液：；；將兩溶液混勻，用1mol/，定容為200ml。實驗不能及時測定的土壤樣品在4℃保存，可認(rèn)為土壤酶活性和微生物學(xué)性質(zhì)不會發(fā)生較大變化，但不宜長期儲存。破碎大顆粒后，密封處理，室溫下振蕩培養(yǎng)。低生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%%的生物炭。 處理設(shè)置及檢測在實驗開始前，測定預(yù)培養(yǎng)土壤的過氧化氫酶活性，代表土壤酶活性的初始值。 實驗方法 生物炭對土壤過氧化氫酶活性影響測定 實驗設(shè)置實驗使用一種土壤（磚紅壤），設(shè)置三個實驗組（低生物炭組：培養(yǎng)一定量的土壤，含有一定量的有機(jī)肥和少量的生物炭；中生物炭組：培養(yǎng)等量的土壤，含有等量的有機(jī)肥和中量（2%)的生物炭；高生物炭組：培養(yǎng)等量的土壤，含有等量的有機(jī)肥和高量（5%)的生物炭），一個純土壤組（添加等量土壤但不添加任何有機(jī)肥和生物炭），一個無生物炭組（添加等量土壤和有機(jī)肥但不添加任何生物炭），每組實驗重復(fù)3次，共35n個樣。因此，采集三亞常見的新鮮廢棄水稻秸稈，經(jīng)過進(jìn)一步的處理制作本實驗的生物炭并做好密封保存以備后續(xù)實驗進(jìn)行。在恒溫條件下培養(yǎng)5h。目前生物炭在環(huán)境、生態(tài)等領(lǐng)域作用機(jī)理的基礎(chǔ)研究方面鮮有報道，還缺少大規(guī)模試驗和統(tǒng)計數(shù)據(jù)的支持，在土壤