【正文】 施用高量（5%)生物炭對(duì)植物生長可能會(huì)有抑制作用[19]。中國在生物炭對(duì)土壤酶活性影響的研究還有很大的空白需要去填補(bǔ)。 研究的意義近幾年，生物炭作為新型環(huán)保類資源引起廣泛關(guān)注，在改良土壤、減排溫室氣體和修復(fù)受污染環(huán)境等方面都有著相當(dāng)大的應(yīng)用潛力。本文以水稻秸稈為原材料制成生物炭，探索不同量生物炭對(duì)施用有機(jī)肥的磚紅壤中重要土壤酶活性的影響，為生物炭在農(nóng)業(yè)發(fā)展及環(huán)境保護(hù)過程中的應(yīng)用提供理論依，為深入研究生物炭對(duì)土壤酶的影響提供參考。土壤預(yù)培養(yǎng)時(shí)間共計(jì)50天，在培養(yǎng)開始后的第10天、第20天、第35天、第50天分別測定實(shí)驗(yàn)土壤中重要酶活性的變化情況。通過向預(yù)培養(yǎng)的不同組土壤中注入等量的H2O2溶液，采用滴定法，計(jì)算培養(yǎng)液中剩余H2O2量，測定不同時(shí)刻土壤中過氧化氫酶活性的變化情況。通過向預(yù)培養(yǎng)的不同組土壤中注入等量的尿素溶液并都加入檸檬酸緩沖液和甲苯。通過銨氮生成法計(jì)算培養(yǎng)液中尿素含量，測定不同時(shí)刻土壤中脲酶活性的變化情況。通過向預(yù)培養(yǎng)的不同組土壤中注入等量的蔗糖溶液并都加入磷酸緩沖液和甲苯。通過3,5二硝基水楊酸比色法計(jì)算培養(yǎng)液中葡萄糖含量，測定不同時(shí)刻土壤中蔗糖酶活性的變化情況。23分組注入尿素溶液、檸檬酸緩沖液、甲苯培養(yǎng)50天，定時(shí)補(bǔ)水，在第350天測定酶活性變化分組注入蔗糖溶液、磷酸緩沖液、甲苯取液顯色數(shù)據(jù)測定及處理37℃恒溫中培養(yǎng)24h測定土壤蔗糖酶活性滴定分組注入H2O2測定過氧化氫酶活性測定土壤脲酶活性原料制備水稻秸稈烘干、粉碎、制炭、過篩磚紅壤風(fēng)干、過篩有機(jī)肥烘干、粉碎、過篩分組培養(yǎng)土壤中加入2%有機(jī)肥和5%生物炭土壤中加入2%有機(jī)肥和2%生物炭純土壤培養(yǎng)，不加有機(jī)肥，不加生物炭土壤中加入2%有機(jī)肥，不加生物炭土壤中加入2%%生物炭38℃恒溫下培養(yǎng)5h取液顯色數(shù)據(jù)測定及處理分析數(shù)據(jù)，篩選單位土壤最適生物炭施用量 技術(shù)路線2 實(shí)驗(yàn)部分 實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)主要研究添加不同量水稻秸稈生物炭對(duì)施用有機(jī)肥料的土壤中重要酶（蔗糖酶、過氧化氫酶、脲酶）活性的影響。有機(jī)肥？整個(gè)實(shí)驗(yàn)涉及到的土壤為磚紅壤，該種土壤質(zhì)地偏砂且粘重，粘粒含量高達(dá)60%以上，呈酸性至強(qiáng)酸性反應(yīng)，海南經(jīng)濟(jì)作物地區(qū)主要為磚紅壤地區(qū)，便于實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。把馬弗爐調(diào)整到500℃，將粉碎后的水稻秸稈粉碎干粉放入鐵盒中，放入馬沸爐中加熱分解。用粉碎機(jī)粉碎生物炭，生物炭粉碎干粉過60目篩，在塑封袋中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?土壤的處理方法將采集回來的土壤風(fēng)干，過2mm土壤篩，儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?shí)驗(yàn)共采集生物炭樣本1種，所以本實(shí)驗(yàn)共351=15個(gè)樣。 土壤預(yù)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)將所需土壤的含水量調(diào)整到約田間持水量的60%（一般加水量為土壤量的15%到20%之間，以不粘結(jié)但很濕潤為準(zhǔn)），將土壤容器用塑料薄膜封蓋以免水分過快損失，將塑料薄膜用針扎一些小孔，以保持氣體流通，保證土壤重要酶的活性。按照各要求處理，將一定量土壤、所需有機(jī)肥及生物炭混勻，做好補(bǔ)水（即補(bǔ)充所加入的干燥有機(jī)肥和生物炭所需的水量），放入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。雙氧水在常溫下易分解成H2O和O2，故該溶液需要現(xiàn)配現(xiàn)用。在培養(yǎng)開始后的第10天、第20天、第35天、第50天測定土壤過氧化氫酶活性。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，%過氧化氫。無生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機(jī)肥培養(yǎng)，不加生物炭。破碎大顆粒后，密封處理，室溫下振蕩培養(yǎng)。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，%過氧化氫。中生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機(jī)肥和2%的生物炭。破碎大顆粒后，密封處理，室溫下振蕩培養(yǎng)。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，%過氧化氫。對(duì)照組處理：取一個(gè)空白三角瓶，不加入土壤，%過氧化氫，作為對(duì)照。，做如下處理：培養(yǎng)結(jié)束后，立即向各三角瓶中注入5ml mol/L的硫酸終止反應(yīng)，過濾。過氧化氫酶活性采用單位時(shí)間（min或h）單位質(zhì)量土樣催化分解的H2O2的質(zhì)量（mg）衡量，單位為mg/(g 注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)需每隔1周采用重量法測定含水量并補(bǔ)充水分1次，使各處理的含水量保持一致。實(shí)驗(yàn)全過程要采用蒸餾水每次實(shí)驗(yàn)試劑為現(xiàn)配現(xiàn)用 生物炭對(duì)土壤脲酶活性影響測定 實(shí)驗(yàn)設(shè)置實(shí)驗(yàn)使用一種土壤（磚紅壤），設(shè)置三個(gè)實(shí)驗(yàn)組（低生物炭組：培養(yǎng)一定量的土壤，含有一定量的有機(jī)肥和少量的生物炭；中生物炭組：培養(yǎng)等量的土壤，含有等量的有機(jī)肥和中量（2%)的生物炭；高生物炭組：培養(yǎng)等量的土壤，含有等量的有機(jī)肥和高量（5%)的生物炭），一個(gè)純土壤組（添加等量土壤但不添加任何有機(jī)肥和生物炭），一個(gè)無生物炭組（添加等量土壤和有機(jī)肥但不添加任何生物炭），每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，共35n個(gè)樣。實(shí)驗(yàn)需要重復(fù)3次。每隔3天，補(bǔ)水一次。在培養(yǎng)開始后的第10天、第20天、第35天、第50天測定土壤脲酶活性。 處理設(shè)置及檢測在實(shí)驗(yàn)開始前，測定預(yù)培養(yǎng)土壤的過氧化氫酶活性，代表土壤酶活性的初始值。純土壤組處理：培養(yǎng)一定量的純土壤，不加任何有機(jī)肥和生物炭。向瓶中注入10ml10%尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液，混合均勻。無生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機(jī)肥培養(yǎng)，不加生物炭。向瓶中注入10ml10%尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液，混合均勻。低生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%%的生物炭。向瓶中注入10ml10%尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液，混合均勻。中生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機(jī)肥和2%的生物炭。向瓶中注入10ml10%尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液，混合均勻。高生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機(jī)肥和5%的生物炭。向瓶中注入10ml10%尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液，混合均勻。上述處理在38℃恒溫下培養(yǎng)5h后，做如下處理：培養(yǎng)結(jié)束后，向溶液中加入20ml 2mol/L KCl，振蕩10min，過濾。h） 注意事項(xiàng)用甲苯處理時(shí)要保證土樣都有被覆蓋，以免存活脲酶對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響。 生物炭對(duì)土壤蔗糖酶活性影響測定 實(shí)驗(yàn)設(shè)置實(shí)驗(yàn)使用一種土壤（磚紅壤），設(shè)置三個(gè)實(shí)驗(yàn)組（低生物炭組：培養(yǎng)一定量的土壤，含有一定量的有機(jī)肥和少量的生物炭；中生物炭組：培養(yǎng)等量的土壤，含有等量的有機(jī)肥和中量（2%)的生物炭；高生物炭組：培養(yǎng)等量的土壤，含有等量的有機(jī)肥和高量（5%)的生物炭），一個(gè)純土壤組（添加等量土壤但不添加任何有機(jī)肥和生物炭），一個(gè)無生物炭組（添加等量土壤和有機(jī)肥但不添加任何生物炭），每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，共35n？個(gè)樣。實(shí)驗(yàn)需要重復(fù)3次。每隔3天，補(bǔ)水一次。在培養(yǎng)開始后的第10天、第20天、第35天、第50天測定土壤蔗糖酶活性。取5ml1/15M磷酸氫二鈉溶液和95ml1/15M磷酸二氫鉀溶液均勻混合，即得100ml 。 處理設(shè)置及檢測在實(shí)驗(yàn)開始前，測定預(yù)培養(yǎng)土壤的過氧化氫酶活性，代表土壤酶活性的初始值。純土壤組處理：培養(yǎng)一定量的純土壤，不加任何有機(jī)肥和生物炭。將三角瓶密封，置于37℃恒溫中培養(yǎng)。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。低生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%%的生物炭。將三角瓶密封，置于37℃恒溫中培養(yǎng)。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。高生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機(jī)肥和5%的生物炭。將三角瓶密封，置于37℃恒溫中培養(yǎng)。用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液做標(biāo)準(zhǔn)曲線，取濾液加入顯色劑加熱，待其顯色后，用蒸餾水稀釋，并在分光光度計(jì)上于波長508nm處進(jìn)行比色。h)。幾乎在所有生物體內(nèi)都有過氧化氫酶，在某些細(xì)菌里，其數(shù)量約為細(xì)胞干重的1%。 試劑配制：。 操作步驟標(biāo)準(zhǔn)含量測定：取對(duì)照組濾液20ml。破碎大顆粒后，密封處理，室溫下振蕩培養(yǎng)。 溶液中尿素含量的測定方法實(shí)驗(yàn)用銨氮生成法測定溶液中尿素含量 適用范圍？ 實(shí)驗(yàn)原理脲酶是一種酰胺酶，能酶促有機(jī)質(zhì)分子中肽鍵的水解。脲酶是一種高度專性的酶，能酶促尿素的水解，生成二氧化碳和氨。 試劑配制苯酚鈉溶液：，；。該溶液需要現(xiàn)用現(xiàn)配。NH3N標(biāo)準(zhǔn)溶液：，溶解并定容為1L，該溶液所含NH3N 100mg/L。取濾液1ml置于50ml容量瓶中（標(biāo)準(zhǔn)曲線也是取1m