【正文】 A．藕節(jié)狀假菌絲 B. 竹節(jié)狀假菌絲(三) 霉菌觀(guān)察1．霉菌的形態(tài)觀(guān)察 采用濕室培養(yǎng)法培養(yǎng)霉菌。 2. 水封片觀(guān)察 取一滴美藍(lán)染色液置于載玻片中央，將用搭片法培養(yǎng)棘孢小單孢菌培養(yǎng)皿中的蓋玻片取出，并將有菌面朝下，放在載玻片上，浸在染色液中，制成水封片，用高倍鏡觀(guān)察其分生孢子及基內(nèi)菌絲。霉菌菌絲較粗大，細(xì)胞易收縮變形，而且孢子很容易飛散，所以制標(biāo)本時(shí)常用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液。酵母菌是不運(yùn)動(dòng)的單細(xì)胞真核微生物，通常比常見(jiàn)細(xì)胞大幾倍甚至十幾倍。簡(jiǎn)稱(chēng)“氣絲”)2. 了解酵母菌形態(tài)結(jié)構(gòu)。 3．脫色時(shí)間十分重要，過(guò)長(zhǎng)，則脫色過(guò)度，會(huì)使陽(yáng)性菌被染成陰性菌；脫色不夠，則會(huì)使陰性菌被染成陽(yáng)性菌。 5. 鏡撿完畢后的工作 （1）移開(kāi)物鏡鏡頭。在玻片標(biāo)本的鏡檢部位（鏡頭的正下方）滴一滴香柏油。 2. 低倍鏡觀(guān)察染色裝片 首先上升鏡筒，將細(xì)菌染色裝片置于載物臺(tái)上，用標(biāo)本夾夾住，將觀(guān)察位置移至物鏡正下方， cm處，適當(dāng)縮小光圈，然后兩眼從目鏡觀(guān)察，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使物鏡逐漸上升（或使鏡臺(tái)下降）至發(fā)現(xiàn)物像時(shí)，改用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)到物像清楚為止。 （2）媒染 滴加盧戈氏碘液，1 min后水洗。3. 儀器及用具顯微鏡、擦鏡紙、接種環(huán)、載玻片、吸水紙、試管、小滴管、酒精燈。影響數(shù)值孔徑大小的因數(shù)，一是鏡口角，二是介質(zhì)的折射率。二、 實(shí)驗(yàn)原理（一） 油鏡的基本原理 普通光學(xué)顯微鏡包括低倍物鏡、高倍物鏡和油鏡3種物鏡。 2．制作細(xì)菌染色裝片。D值愈小表明分辨率愈高。革蘭氏陰性菌則不同，由于其細(xì)胞壁肽聚糖層較薄，類(lèi)脂含量高，所以當(dāng)脫色處理時(shí)，類(lèi)脂質(zhì)被乙醇（或丙酮）溶解，細(xì)胞壁透性增大，使結(jié)晶紫碘的復(fù)合物比較容易被洗脫出來(lái)，用復(fù)染劑復(fù)染后，細(xì)胞被染上復(fù)染劑的紅色。 （3）固定 將細(xì)菌涂片向上，通過(guò)火焰3次，以熱而不燙為宜，防止菌體燒焦、變形。坐正。將最適宜觀(guān)察部分移至視野中心，繪圖。 （4）再次觀(guān)察，提起鏡筒，換上另一塊細(xì)菌染色裝片，依次用低倍鏡、高倍鏡和油鏡觀(guān)察。 (三) 結(jié)果 革蘭氏陽(yáng)性菌染成藍(lán)紫色, 革蘭氏陰性菌染成淡紅色。 六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1. 分別繪出在高倍鏡和油鏡下觀(guān)察到的大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的形態(tài)，注明物鏡放大倍數(shù)和總放大率。 二、實(shí)驗(yàn)原理放線(xiàn)菌是一類(lèi)主要呈菌絲狀生長(zhǎng)和以孢子繁殖的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，常見(jiàn)放線(xiàn)菌大多能形成菌絲體。在油鏡下觀(guān)察，放線(xiàn)菌的孢子有球形、橢圓、桿狀或柱狀。霉菌可產(chǎn)生分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。 透明膠帶、剪刀、圓形濾紙片、細(xì)口滴管、鑷子。細(xì)胞無(wú)色，液泡呈紅色。鏡檢。 七、問(wèn)題和思考l．用插片法和搭片法如何制備放線(xiàn)菌標(biāo)本，其主要優(yōu)點(diǎn)是什么?可否用此法觀(guān)察其他微生物?為什么?2．酵母菌的假菌絲是怎樣形成的?與霉菌的真菌絲有何區(qū)別?3. 什么叫載玻片濕室培養(yǎng)? 它適用于觀(guān)察怎樣的微小物，有何優(yōu)點(diǎn)?附錄: (—) 插片法和搭片法培養(yǎng)放線(xiàn)菌1．插片法(圖23A) (1) 制平板、接種用冷卻至約50℃的高氏1號(hào)瓊脂培養(yǎng)基倒平板（每皿約20 mL）。 （2）取菌接種 用接種環(huán)挑取少量待觀(guān)察的霉菌孢子至濕室內(nèi)的載玻片上，每張載玻片可接同一菌種的孢子兩處。 圖24 根霉假根的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)三 培養(yǎng)基的配制、消毒和滅菌一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛢?nèi)容（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 明確配制培養(yǎng)基的原理，了解消毒和滅菌的原理。%的瓊脂配制為半固體培養(yǎng)基，加入12%的瓊脂配制為固體培養(yǎng)基。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時(shí)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固緩慢。四、操作步驟（一）玻璃器皿的洗滌和包裝1．玻璃器皿的洗滌玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。其配方如下: 牛肉膏3 g，蛋白胨l0 g， NaCl 5 g，瓊脂13 g, 水1000 mL。pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂之前。 （6）加棉塞 試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)制作的棉塞，棉塞制作方法則圖11。 （8）滅菌 ℃濕熱滅菌20 min。7H2O g，瓊脂13 g, 蒸餾水1000 mL，pH 。 （2）pH 調(diào)節(jié)、分裝、包扎、滅菌及無(wú)菌檢查同牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配制。2．鏈霉素的加入 鏈霉素受熱容易分解，所以臨用時(shí)，將培養(yǎng)基融化后待溫度降全45℃左右時(shí)才能加入。 （5）升壓 當(dāng)鍋內(nèi)空氣排凈時(shí)，即可關(guān)閉排氣閥，壓力開(kāi)始上升。 （3）恒溫 當(dāng)溫度升到所需溫度后， h。m等)， 181。m）和6號(hào)（孔徑小于2 181。微量溶液過(guò)濾時(shí)，可用圖22的針頭式過(guò)濾器。2. 記錄各種不同物品所用的滅菌方法及滅菌條件(溫度、壓力)。 二、實(shí)驗(yàn)原理 從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程成為微生物的分離與純化。 無(wú)菌培養(yǎng)皿、土壤樣品、天平、稱(chēng)量紙、藥勺、試管架、涂布器。霉菌：取10 mL，分別接入相應(yīng)的PDA培養(yǎng)基中（每100 mL加入滅菌的乳酸1 mL），涂布均勻。 (2) 接種的方法是，用接種針沾取少量待接菌種．然后從柱狀培養(yǎng)基的中心穿入其底部(但不要穿透)、然席沿原刺人路線(xiàn)抽出接種針．注意接種針不要移動(dòng)。 （二）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容糯米甜酒、葡萄酒的釀制。 2. 葡萄酒釀制（1）稱(chēng)取一定量葡萄，用水洗凈后，晾干（表皮不能有水珠）。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告記錄糯米甜酒或葡萄酒的發(fā)酵過(guò)程，評(píng)價(jià)所釀制酒的外觀(guān)、色、香、味和口感，闡述糯米酒或葡萄酒的發(fā)酵原理。（2）把晾干的葡萄倒入玻璃罐中，按照3：1的比例加入白砂糖（可鋪一層葡萄加一層白砂糖，或把葡萄捏碎后加入白砂糖拌勻）（3）蓋好玻璃罐，放置。 三、操作步驟1．甜酒制作（1）甜酒培養(yǎng)基稱(chēng)取一定量?jī)?yōu)質(zhì)糯米(糙糯米更好)，用水淘洗干凈后，加水量為米水比1：1，加熱煮熟成飯。 五、注意事項(xiàng) 1．一般土壤中，細(xì)菌最多，放線(xiàn)菌及霉菌次之．而酵母菌主要見(jiàn)于果園及菜園土壤中，故從土壤個(gè)分離細(xì)菌時(shí)，要取較高的稀釋度，否則菌落達(dá)成一片不能計(jì)數(shù)。 （二）平板劃線(xiàn)分離微生物 1．劃線(xiàn)分離 使用接種環(huán)，從待純化的菌落或待分離的斜面菌種中沾取少量菌樣．在相應(yīng)培養(yǎng)基平板中劃線(xiàn)分離，劃線(xiàn)的方法多樣，目的是獲得單個(gè)菌落，主要方法參見(jiàn)下圖。 2．無(wú)菌操作制備土壤稀釋液 （1） 制備土壤懸液：稱(chēng)土樣1 g，迅速倒入帶玻璃珠的無(wú)菌水瓶中(玻璃珠用量以充滿(mǎn)瓶底為最好)，振蕩510 min使土樣充分打散，即成為102的土壤懸液。本實(shí)驗(yàn)利用稀釋倒平板法從土壤中分離細(xì)菌、放線(xiàn)菌和霉菌。 3．比較各種滅菌方法的原理及適用范圍。2. 不同培養(yǎng)基各有配制特點(diǎn)，要注意具體操作。其優(yōu)點(diǎn)是吸附量少，但每次使用后要洗凈再用。其優(yōu)點(diǎn)是吸附性小，即溶液中的物質(zhì)損耗少，濾速快，每張濾膜只使用1次，不用清洗。 （5）取出滅菌物品 待電烘箱內(nèi)溫度降到70℃以下后，才能打開(kāi)箱門(mén)，取出滅菌物品。本實(shí)驗(yàn)用121℃，20min滅菌。g。去皮馬鈴薯200 g；葡萄糖20 g；瓊脂13 g；自來(lái)水1000 mL。再加入其他成分依次溶解。 （9）擺斜面 滅菌后，如制斜面，則