【正文】 ：Western免疫印跡是將蛋白質經電泳分離后從凝膠中轉移到固相支持物上，然后用特異性的抗體進行檢測。通過比較所有DNA片段的長度可以得知核苷酸的序列。SOS應答十分迅速，在DNA損傷發(fā)生后幾分鐘內就可出現。recA蛋白結合DNA具有正協同效應。答：Ecoli的rec基因編碼的幾種酶(recA、recB、reeC和recD)參與重組修復。答：人XPC蛋白負責發(fā)現DNA雙螺旋中的變形，其功能相當于E．coli中的UvrA；人XPB和XPD蛋白具有解旋酶活性，其功能相當于E．coli中的UvrB；核酸酶ERCClXPF切割損傷部位5’側，X．PG切割3’側，其功能相當于uvrC高等生物NER切割單鏈DNA片段程度為24—32個核苷酸。32. 以人為例，簡述堿基切除修復機制 答：在人細胞核中已經發(fā)現八種DNA糖苷酶，他們參與堿基切除修復，具有損傷特異性，通常嘧啶的氧化損傷由hNTHI、hNEILI或hNEIL2移除，而嘌呤的氧化損傷由hOGGI移除。(3)DNA鏈斷裂：這是電離輻射引起的嚴重損傷事件，斷裂數隨照射劑量而增加。答：DNA分子的自發(fā)性損傷包括兩大類：(1)DNA復制產生的誤差；(2)DNA的自發(fā)性化學變化包括堿基的異構互變、堿基的脫氨基作用、脫嘌呤 與脫嘧啶、堿基修飾與鏈斷裂。即多數真核基因在沒有調控蛋白作用時是不轉錄的，需要表達時就要有激活的蛋白質來促進轉錄。(2)目前發(fā)現的轉錄因子有近百種，根據其作用方式的不同分為三類：① 通用轉錄因子：系多數細胞普遍存在的一類轉錄因子，如TATA box結合因子TFⅡD、CX：box結合因子SPl等；②組織特異性轉錄因子：在很大程度上，基因表達的組織特異性取決組織特異性轉錄因子的存在；③誘導性反式作用因子：這些反式作用因子的活性能被特異的誘導因子所誘導，這種活性的誘導可以是新蛋白的合成。當第一個AUG密碼子距5’端帽子結構的距離在12個核苷酸以內時，有一半以上的核糖體40S亞基會滑過第—個AUG。但在有些mRNA中，在起始密碼子AUG的上游(5’端)非編碼區(qū)有一個或數個AUG，稱為539。20. 簡述真核生物在翻譯水平上的調控。為了適應環(huán)境的變化，生物體需要不斷的調節(jié)和控制各種基因的表達。(1)順式作用元件(cis—acting element)指某些能影響基因表達但不編碼新的蛋白質和RNA的DNA序列，按照功能分為啟動子、增強子、負調控元件(沉默子等)。16. 簡述反式作用因子的基本結構特點。13. 簡述真核基因表達的特點 答：(1)細胞的全能性：所謂全能性是指同一種生物的所有細胞都含有相同的基因組DNA。 答：(1)6因子含有識別啟動區(qū)的結構域調控RNA聚合酶與．DNA結合，確保RNA聚合酶與特異啟動區(qū)而不是其他位點的穩(wěn)定結合(2)6因子使得RNA聚合酶選擇一套特定啟動區(qū)起始轉錄。順式作用元件主要包括啟動子、增強子、負調控元件等。1. 什么是轉座? 轉座因子在一個DNA分子內部或者兩個DNA之間不同位置間的移動。8. 簡述原核基因表達的特點。一旦一種6因子被另一種代替，即引起原來一套基因轉錄的關閉和新的一套基因轉錄的開屆。(2)基因表達的時間性和空間性：高等生物的各種不同細胞具有相同的基因組，但在個體發(fā)育的不同階段，基因表達的種類和數量是不同的，在不同組 織和器官中，基因表達的種類和數量不同。答：一個完整的反式作用因子通常含有三個主要功能結構域，分別為DNA識別結合域、轉錄活化域和結合其他蛋白質的調節(jié)結構域。(2)反式作用因子(trans—acting factor)指能直接或間接地識別或結合在各順式作用元件812bp核心序列上，參與調控靶基因轉錄效率的一組蛋白質，也稱序列特異性DNA結合蛋白(sequence specific DNA binding protein，SDBP)，這是一類細胞核內蛋白質因子。(2)基因表達的調控是一個十分復雜的過程。答：(1)翻譯起始的調控：①翻譯起始因子的功能調控：eIF2是蛋白質合成過程中重要的起始因子。AUG。當5’端非編碼區(qū)的長度在17—80核苷酸之間時，體外翻譯效率與其長度成正比。22. 簡述真核和原核基因表達調控共同的要素。換言之：真核基因表達以正性調控為主導。28. 簡述物理因素引起的DNA損傷。射線的直接和間接作用都可能使脫氧核糖破壞或磷酸二酯鍵斷開而致DSIA鏈斷裂。特異識別的異常堿基包括：胞嘧啶脫氨基產生的尿嘧啶、氧化的鳥嘌呤、脫氨基的腺嘌呤、開環(huán)堿基以及碳原子之間雙鍵變成單鍵的堿基等。這一片段被釋放后，產生的缺口由DNA聚合酶和連接酶填補。recB、recC、recD酶復合物兼有解旋酶和核酸酶活性，它利用ATP水解提供能量沿著DNA移動。E．coli的RuvA蛋白識別Holliday結構連接處，而RuvB蛋白具有解旋酶和ATPase活性，能驅動分支移動。轉錄阻遏蛋白Lex．A抑制若干編碼參與SOS應答蛋白質的基因表達，具有潛在的蛋白水解酶活性，E coli的DNA損傷產生的單鏈DNA誘導recA蛋白水平提高近50倍，而recA．蛋白能激活LexA自我蛋白酶解，導致至少15個參與SOS應答的損傷修復蛋白基因解除阻遏狀態(tài)而表達。40. 何謂PCR?試述PCR技術的基本原理和影響茵素。它Southern的不同在于探針的性質不同，在Western免疫印跡中使用的探針是抗體(蛋白質)。答：Southern印跡雜交是1975年Southern建立起來的一種雜交方法，屬固相一液相雜交。(4)探針不同：Southern印跡雜交、Northern印跡雜交的探針是單鏈的DNA或RNA，而Western免疫印跡用的探針是特異性抗體蛋白質，而非核酸。答：利用Klenow片段(DNA聚合酶I大片段)延伸與單鏈環(huán)狀DNA模板相配對的寡核苷酸引物，這個寡核苷酸引物除了有一處與模板的堿基錯配外，其余部分均與模板互補，由寡核苷酸的錯配處誘發(fā)突變，并在體外新合成一個雜合雙鏈DNA，用T4 DNA連接酶將新合成的雜合雙鏈DNA連接成雙鏈閉環(huán)DNA分子，將體外合成的雜合閉環(huán)雙鏈DNA轉化到E．coli細胞，由于環(huán)狀DNA復制的特點，就會同時產生野生型與誘變型兩種DNA分子，最后通過篩選，將誘變型DNA分子篩選出來。制備載體時，用堿性磷酸酶處理后，可防止載體自身環(huán)化，提高重組效率。4)移碼突變 是指DNA序列中發(fā)生單堿基，多個堿基或DNA片段的缺失或插入，導致突變點后三聯密碼閱讀框改變。67. 簡述基因診斷在傳染病檢測中的應用。71. 簡述eX vivo和in vivo兩種基因治療途徑。激活RISC需要一個ATP依賴的將小分子RNA解雙鏈的過程。答：(1)基因置換。(3)基因干預。73. 治療基因的受控表達策略有哪些?答：治療基因的受控表達