【正文】 ↓ 擴(kuò)繁 ↓ 原種培養(yǎng)基制備 →滅菌 →接種 →培養(yǎng) →原種 ↓ ↓▔▔▔▔▔▔▔▔ 栽培種培養(yǎng)基制備 →滅菌 →接種 →培養(yǎng) →栽培用種 二、常用設(shè)備儀器和藥品 （一）設(shè)備 食用菌菌種生產(chǎn)流程應(yīng)呈流水作業(yè)，菌種廠應(yīng)有配料室、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、貯藏室等。擴(kuò)大繁殖后，叫再生母種。 ? 培養(yǎng)設(shè)備 恒溫培養(yǎng)箱、恒溫培養(yǎng)室、恒溫振蕩培養(yǎng)箱等。 按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)，可將培養(yǎng)基分為： ? （ 1）液體培養(yǎng)基 ； ? （ 2）固體培養(yǎng)基 ； ? （ 3）半固體培養(yǎng)基 。此配方適用于木腐菌類的菌種分離與培養(yǎng)。此配方適用于培養(yǎng)靈芝，能供菌絲生長，延緩老化結(jié)皮。 ?第二步：測定、調(diào)整酸堿度。標(biāo)準(zhǔn)的棉塞應(yīng)是塞頭略大，不易變形，塞入試管口2～ 3厘米，占塞總長的 2/3， 1/3裸露在試管口外，比管口略大。 ? ③ 闊葉樹木屑 98％，麩皮 1％ , 尿素 ％ ,碳酸鈣 ％ ,磷酸二氫鉀 ％ , 硫酸鎂 ％ , 高錳酸鉀 ％ , 料水比1:。 ? （ 5）谷粒培養(yǎng)基 ? 以小麥、大麥、高粱、玉米、谷子等為主料制作的培養(yǎng)基統(tǒng)稱為谷粒培養(yǎng)基。裝袋一般用裝袋機(jī)。米糠和麩皮都要用新鮮的，變質(zhì)結(jié)塊的一律不能用。常用的滅菌方法有物理滅菌和化學(xué)滅菌法兩大類。另一方法是使烘箱升溫160℃ 以上時(shí)，可關(guān)閉烘箱的通風(fēng)孔，切斷電源，待烘箱內(nèi)溫度降至 50℃ 以下，就能達(dá)到殺菌目的。 ? 蒸鍋滅菌法： 食用菌生產(chǎn)中常用大鍋蒸料滅菌，一般采用 100仞大鍋，四周圍用磚水泥砌一圓或方形的鍋圍子，高 1～ ，在大鍋內(nèi)放一簾子，待鍋內(nèi)水沸騰后，在簾上見汽撒料，當(dāng)料全部撒完后，再蓋上蓋或用塑料蓋上并扎緊，蒸 2個(gè)小時(shí)就可以達(dá)到滅菌的目的。石炭酸能溶于水，有特殊氣味，濃石炭酸能使皮膚變白、手指麻痹，并可損壞皮膚與粘膜，因此，它對人畜有毒。具體做法是在坩堝（或培養(yǎng)皿）加入甲醛溶液，然后用酒精燈熏蒸或在甲醛內(nèi)加入高猛酸鉀（約 5克 /立方米），任其反應(yīng)揮發(fā)，關(guān)上門窗悶一夜，就能起到消毒滅菌作用。 ? 新潔爾滅 它是季胺類的表面活性劑。 ? 內(nèi)吸殺菌劑 如：苯來特、多菌靈、涕必靈、麥穗寧、甲基托布津等等。 ? （ 3）菌種管口、瓶口的部分必須用酒精燈火焰封閉。 ? 一、孢子分離法 孢子是食用菌的基本繁殖單位。根據(jù)分離材料的不同，大體可分為以下幾種： ? 傘菌類的組織分離 ? 從優(yōu)良品系中選取優(yōu)良的個(gè)體作種菇，以單菇、朵大、蓋厚、無病蟲危害的菌蕾作為分離材料。也可將耳片用 75％酒精浸泡 1分鐘，再用無菌水漂洗 3次，并用無菌紙吸干后，剪成7 4mm小塊，置于加 25％乳酸 3滴的 PDA培養(yǎng)基平板上，每皿 5塊，適溫培養(yǎng)。還有一些菌類，如銀耳菌絲，只有與香灰菌絲生長在一起才能產(chǎn)生子實(shí)體，如果要同時(shí)得到這兩種菌絲的混合種，也只能采用基內(nèi)菌絲分離法，歸納起來有以下兩種： 耳（菇）木分離法 ? 此法必須是在出耳（菇）季節(jié)進(jìn)行。 ? （ 3）、取菌絲束尖端部分，接種到加有細(xì)菌抑制劑的培養(yǎng)基中。原種、栽培種菌絲應(yīng)相連接成塊，而不松散。直觀法比較簡單，但鑒定人必須要有實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。生長速度中等，適溫下 12～ 14天可長滿試管斜面，略有爬壁現(xiàn)象，有的品種可以形成原基。 四、菌種老化、退化及產(chǎn)生原因 ? 老化 老化是由于菌齡太長或營養(yǎng)不足、環(huán)境不適、保存不善而引起菌絲生活力降低的生理現(xiàn)象。 ? 常用的保藏方法有以下幾種： ? 一、斜面低溫保藏法 ? 斜面低溫保藏，又叫定期移植保藏法。 ? 減少冰箱開啟次數(shù) 為保持冰箱的穩(wěn)定，不要隨意過多地打開冰箱，在條件允許下，設(shè)置一個(gè)永久的保藏冰箱，與經(jīng)常用菌種的冰箱分開使用。 ? 活化培養(yǎng) 剛從石蠟油菌種中移出的菌絲體常沾有少許礦油，生長較弱，因此，需要再移植一次，才能恢復(fù)生長。然后戴上防凍手套，將安瓿管壁擦干凈，立即放入真空干燥器內(nèi)抽真空。是目前保藏菌種的最好方法。 ? 木屑保藏法 采用木屑麩皮培養(yǎng)基，裝入試管長度 3/4后，擦洗干凈，管口塞好棉塞，捆扎后，在 時(shí)，取出接種后，在 25℃ 恒溫下培養(yǎng)。鹽酸用量以淹沒沙面為宜。 ? 第五、經(jīng)抽樣檢查，證明無雜菌生長，即可封口進(jìn)行保藏。 。 ? （ 1）、濾紙片準(zhǔn)備 將白色或黑色濾紙片剪成寬～ ，長 ～ 8厘米 ,整齊地平鋪在大培養(yǎng)皿底 (直徑 15厘米 ),蓋上皿蓋 ,并用牛皮紙包好 ,在 30分鐘，然后在烘箱中稍加烘干。 ? 第二、沙土比例為 2:1或 4:1，裝于小試管中，裝入量以～ 1厘米高為宜，洗凈試管，塞好棉塞，在 壓力下滅菌 30分鐘，需重復(fù)進(jìn)行 3次。使用時(shí)，從冰箱取出后在 25℃ 恒溫箱內(nèi)培養(yǎng) 18～ 24小時(shí)，在無菌條件下去掉試管上部的菌種，取下部較新鮮的菌絲體，接入斜面培養(yǎng)基即可。罐內(nèi)的氣相溫度為150℃ ，液體溫度為 196℃ 。 ? 真空熔封 將安瓿管安裝在抽氣管上抽氣熔封，真空度達(dá) ,邊抽氣邊用單火焰或雙火焰將安瓿管上端熔斷封口，熔封后，檢查安瓿管是否漏氣。 三、冷凍干燥貯藏法 ? 此法是采用真空、干燥和低溫 3種手段來保藏菌種，菌種保藏期可達(dá) 10～ 20年，仍不降低其原有性能，是目前應(yīng)用最廣泛、效果較好的孢子貯藏方法。 二、礦油保藏法 ? 礦油（主要是液體石蠟）保藏，又稱液體石蠟覆蓋保藏。用此法保藏菌種，因溫度不夠低，只有 4℃ 左右，微生物的代謝活動(dòng)并未停止，試管斜面還容易失水變干，保藏時(shí)間較短，一般每隔 3～ 4個(gè)月需移植一次，幾乎所有的食用菌（除草菇外）都可以使用這種方法保藏菌種。 ? 退化 是指菌絲活力和產(chǎn)量逐代降低的遺傳現(xiàn)象。 ? 黑木耳 ? （ 1）、母種 菌絲白色，短、密、整齊，平貼于斜面培養(yǎng)基上，不爬壁，生長速度較慢；有些品種可產(chǎn)生次生孢子，使培養(yǎng)基表面的菌絲體帶有粉末狀物；有些品種在斜面培養(yǎng)基上能形成小原基；菌絲長滿斜面后，若出現(xiàn)黃斑，培養(yǎng)基逐漸變成褐色、淺黑色，說明菌種已老化。 ? 培養(yǎng)觀察 對分離或引進(jìn)的菌種，通過培養(yǎng)菌絲，觀察其在偏干、偏濕及干濕適宜條件下的生長情況，以及耐高溫測試，以確定菌種生活力及適應(yīng)環(huán)境能力。 ? 壯：菌絲健壯，分枝濃密，生活力強(qiáng)。 ? （ 5）、菌絲的鑒定，在土中獲得的菌種，其可靠性較小，必須經(jīng)過出菇鑒定才能確定是否是該菌菌種。 土中菌絲分離法 ? 是利用菌類地下的菌絲體分離獲得菌種的方法。利用菌核