生物化學(xué)蛋白質(zhì)(2)(完整版)
【正文】 。 雞蛋煮熟后，本來流動(dòng)的蛋清、蛋黃都變成固體樣的東西了。如酒精的消毒作用。 二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì) 形成水化層 形成雙電層 為什么蛋白質(zhì)具有膠體性質(zhì) 三、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng) 1．鹽析和鹽溶法 2．有機(jī)溶劑沉淀法 3．重金屬鹽沉淀法 4．生物堿試劑以及某些酸類沉淀蛋白質(zhì) 5．加熱凝固 1．鹽析和鹽溶法 等電點(diǎn)時(shí)，無電荷間的相互作用，聚合沉淀；加入少量鹽離子后破壞了這種作用，使分子分散，溶于水中 1．鹽析和鹽溶法 鹽溶： 少量的中性鹽，會(huì)增加蛋白質(zhì)分子表面的電荷，增強(qiáng)蛋白質(zhì)分子與水分子的作用，從而使蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度增大。第五節(jié) 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) 一、蛋白質(zhì)的酸堿性質(zhì) 二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì) 三、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng) 四、蛋白質(zhì)的變性和復(fù)性 五、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng) 一、蛋白質(zhì)的酸堿性質(zhì) +OH－ +H+ +OH－ +H+ C O O H Pr H 3 N + C O O － Pr H 3 N + C O O － Pr H 2 N pH ＜ pI pH = pI pH ＞ pI 由于蛋白質(zhì)是由氨基酸組成，氨基酸所具有的兩性游離性質(zhì)，蛋白質(zhì)也同樣具有。 原理： 蛋白質(zhì)吸附某種鹽離子 → 雙電層 → 蛋白質(zhì)彼此排斥。 在低溫條件下，變性進(jìn)行較緩慢，可以用來制備蛋白質(zhì)。 四、蛋白質(zhì)的變性和復(fù)性 1．蛋白質(zhì)變性的概念 2．蛋白質(zhì)變性的誘因與結(jié)果 3．蛋白質(zhì)變性的機(jī)理 4．蛋白質(zhì)的復(fù)性 1．蛋白質(zhì)變性的概念 蛋白質(zhì)變性是指通過某些物理或化學(xué)因素的作用，使蛋白質(zhì)天然的 空間構(gòu)象破壞 ，從而引起蛋白質(zhì)若干理化和生物學(xué)性質(zhì)的改變。 ③一些理化性質(zhì)改變 。 應(yīng)用 :可以用此反應(yīng)來定性測(cè)定蛋白質(zhì)；也可在 540nm處比色，定量測(cè)定蛋白質(zhì)。 （ 1）紙層析 層析時(shí)，混合氨基酸在水和有機(jī)相之間不斷進(jìn)行分配，使它們分布在濾紙的不同位置，從而使物質(zhì)得到分離和提純。 分離原理是在一定離子強(qiáng)度和 pH等條件下，由于樣品中目標(biāo)純化分子和雜質(zhì)分子與吸附劑之間的吸附與解吸能力不同，達(dá)到分離純化目標(biāo)分子的目的。 HPLC適用于分析分離不易揮發(fā)的極性物質(zhì)。 常用下列幾種方法：等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法。 （ 1）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同的純化方法 離心分離是利用離心慣性力的作用分離非均相混合物的方法。 （ 2）利用溶解度差別的純化方法 ①溶液的 pH會(huì)影響蛋白質(zhì)的溶解度。 有機(jī)溶劑的加入能降低溶液的介電常數(shù)，使蛋白質(zhì)分子間的作用力增強(qiáng)，蛋白質(zhì)分子易于聚集沉淀。 ②離子交換層析 是用離子交換樹脂作支持劑的一種層析法 。 ?每克樣品中含氮的克數(shù) 100=100克樣品中蛋白質(zhì)的含量 （ 克 %） 。 蛋白質(zhì)測(cè)量范圍在25~250mg/ml， 因此是通用的方法之一 。 四、蛋白質(zhì)的純度分析 1．溶解度分析 2．電泳法 3．超離心沉降法 4．免疫學(xué)方法 5．分光光度法 6．化學(xué)分析法 1．溶解度分析 ?單一蛋白質(zhì)的溶解度曲線不因加入過量的試樣而改變 。 5．分光光度法 ?蛋白質(zhì)的最大吸收峰在 280mm， 核酸在260mm， 若兩者比值為 ， 表示為純蛋白質(zhì) （ OD280/ OD 260=） 。 6．化學(xué)分析法 ?應(yīng)用化學(xué)分析方法測(cè)定純化了的蛋白質(zhì)試樣中的某種成分的比值 ， 從而可以判斷蛋白質(zhì)的純度 。 ?不純蛋白質(zhì)的溶解度曲線常常呈現(xiàn)兩個(gè)或兩個(gè)以上的折點(diǎn) 。 5．考馬斯亮藍(lán) G250染色法 （ Bradford法） ?用考馬思亮蘭 G250染色蛋白質(zhì) ， 出現(xiàn)的顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度呈正比 。 3．雙縮脲法（ Biuret法） ?包含肽鍵基團(tuán)的化合物能與硫酸銅 氫氧化鈉溶液產(chǎn)生 雙縮脲顏色反應(yīng) ， 生成紫紅色或藍(lán)紫色的復(fù)合物 。 ②離子交換層析 R CH COOH NH3+ +M1A+ R CH COOH NH3M1 +A+ 氨基酸（在酸性溶液中） 陽(yáng)離子交換劑 氨基酸鹽 R CH COO－ NH2 +M2B － R CH COO M2
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