生化3第三章核酸化學(xué)(完整版)
【正文】 單鏈環(huán)狀DNA（ scDNA） 單鏈線性DNA（ ssDNA） 第四節(jié) 核酸及核苷酸的性質(zhì) 一、溶解性 DNA在 。因此，通常將紫外吸收的增加量達(dá)最大量一半時(shí)的溫度稱熔解溫度，用Tm表示。 退火溫度＝ Tm－ 25℃ 復(fù)性影響因素 片段濃度 /片段大小 /片段復(fù)雜性（重復(fù)序列數(shù)目） / 純度 /溶液離子強(qiáng)度 第五節(jié) 核酸及其組分的分離純化與測(cè)定 一 .分離純化的一般原則 二 .DNA的分離純化 三 .RNA的分離純化 四 .核酸組分的分離純化 破細(xì)胞（ 1mol/LNACL） 離心去沉淀（含 RNAPr） 上清（含 DNAPr） SDS法 /酚法（去蛋白） 離心去沉淀（變性蛋白） 上清（含 DNA） 乙醇沉淀 離心收集沉淀（ DNA） 細(xì)胞（飽和酚處理） 離心去沉淀（含 DNAPr） 上清液調(diào)節(jié) PI（ RNA PI） 離心去上清 收集沉淀（總 RNA） 不同的 RNA分離時(shí)可用： DEAESephadex 超離心 Oligdt 親和層析 ： 四種核苷酸之間的分離采用離子交換法 陽離子交換劑洗脫次序： 理論次序 U G A C 實(shí)際次序 U G C A 陰 離子交換劑洗脫次序： 理論次序 C A G U 實(shí)際次序 C A U G : 堿基 ,核苷 ,核苷酸之間的分離采用 SephadexG10/G25 洗脫次序：核苷酸 核苷 堿基 核苷一磷酸 ,核苷二磷酸 ,核苷三磷酸的分離采用柱層析和 薄層層析法分離 . 柱層析洗脫次序 AMP ADP ATP 薄層層析遷移次序 AMP ADP ATP : 五 .核酸及其組分含量的 測(cè)定與純度測(cè)定 （一） .核酸含 量的測(cè)定方法 1ug/ml DNA A260 = 1A260 = 50 Ug/ml DNA 1ug/ml RNA A260 = 1A260 = 40 Ug/ml RNA (20250ug RNA,40400ug DNA) 苔黑酚法：苔黑酚 +核糖 +濃 HCl+FeCl3 綠色 A670680 二苯胺法：二苯胺 +脫氧核糖 +濃 H2SO4 藍(lán)色 A595620 (10100ug 核酸 ) EB( )染色 , 最小檢出量 1ng VitC H3PO4 +鉬酸銨 黃色磷鉬酸銨 磷鉬藍(lán) A650660 （二） . 核酸純度的 測(cè)定 測(cè)定 A260與 A280 A260 A280 = DNA: ≥ RNA: A260 A280 第六節(jié) 核酸研究的常用技術(shù) 一 .DNA的凝膠電泳 （一）瓊脂糖凝膠電泳 (分離 ,測(cè)量 ,回收 ,印跡 ) （二） PAGE電泳 1. PAGE濃度及選擇 2. PAGE電泳的分辨率 （三）影響凝膠電泳 Rf值的因素 二 .印跡技術(shù)與分子雜交 （一） .印跡技術(shù) 概念 :核酸的雜交中，經(jīng)過凝膠電泳分離的 DNA/RNA分子，雜交之前通過毛細(xì)管吸附作用 /電導(dǎo)作用將凝膠中 DNA/RNA分子原封不動(dòng)地轉(zhuǎn)移到濾膜上。 。
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