蛋白質(zhì)測定方法之雙縮脲法(biuret法)-文庫吧在線文庫
【正文】 這一測定的物質(zhì)主要有：硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等。此試劑可長期保存。注意樣品濃度不要超過10mg/ml。以后在生物化學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。進行測定時，加F olin—酚試劑時要特別小心，因為該試劑僅在酸性pH條件下穩(wěn)定，但上述還原反應(yīng)只在pH=10的情況下發(fā)生，故當Folin一酚試劑加到堿性的銅—蛋白質(zhì)溶液中時，必須立即混勻，以便在磷鉬酸—磷鎢酸試劑被破壞之前，還原反應(yīng)即能發(fā)生。冷卻后溶液呈黃色（如仍呈綠色，須再重復(fù)滴加液體溴的步驟）。這一步混合速度要快，否則會使顯色程度減弱。表中是每個試管要加入的量（毫升），并按由左至右，由上至下的順序，逐管加入。因而本測定法通常只適用于測定蛋白質(zhì)的相對濃度（相對于標準蛋白質(zhì)）。即在標準曲線測定的各試管后面，再增加3個試管。全部試管加完試劑甲后若已超過10分鐘，2分鐘后加第3支試管，余此類推。牛血清清蛋白溶于水若混濁， % NaCl溶液。（二）試劑與器材（1）試劑甲：（A）10克Na2CO3，（KNaC4H4O6?4H2O）。酚類、檸檬酸、硫酸銨、Tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深蘭色的原因是：?在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物。充分搖勻后，在室溫（20~25℃）下放置30分鐘，于540nm處進行比色測定。（二）試劑與器材：（1）標準蛋白質(zhì)溶液：用標準的結(jié)晶牛血清清蛋白（BSA）或標準酪蛋白，配制成10mg/ml
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