【正文】 2040％ 敏感 RNA pol Ⅲ 核質(zhì) tRNA， 5S rRNA，SnRNA 10％ 種特異性 某些常用的轉(zhuǎn)錄抑制劑 抑制劑 靶酶 抑制作用 利福霉素 細菌的全酶 與 β亞基結(jié)合，阻止起始 鏈霉溶菌素 細菌的核心酶 與 β亞基結(jié)合，阻止延長 放線菌素 D 真核 RNA聚合酶Ⅰ 與 DNA結(jié)合，并阻止延長 α鵝膏蕈堿 真核 RNA聚合酶Ⅱ 與 RNA聚合酶Ⅱ 結(jié)合 真核 RNA聚合酶的結(jié)構(gòu)特點： 1）大分子蛋白質(zhì)， 500KDa或更多； 2) 分子量 500KDa, 含兩個大亞基和 7~12 個小亞基。 upstream start point downstream － 10 ＋ 1 ＋ 10 典型原核生物啟動子的結(jié)構(gòu) 35 10 轉(zhuǎn)錄起點 TTGACA 1619bp TATAAT 59bp 原核生物啟動子的結(jié)構(gòu)特點 1） 轉(zhuǎn)錄起始點 ? 多數(shù)情況下（ 90%）為嘌呤， ? 常見序列為 CAT， A為起始點 原核生物啟動子的結(jié)構(gòu)特點 2） 10區(qū) 又稱為 Pribnow盒 ? 結(jié)構(gòu)特點 ： ? 保守序列： TATAAT（ T80A95T45A60A50T96） ? ，易于解鏈。 ? 原核生物亦有少數(shù)啟動子缺乏這兩個序列之一。 真核啟動子含有不同的組件 SV40 早期啟動子 胸苷激酶 組蛋白 H2B 140 120 100 80 60 40 20 +1 Oct CAAT GC TATA RNApolⅡ 的啟動子 RNApol I的啟動子 RNApol III的啟動子 2 真核生物的啟動子 － 170 － 160 － 150 － 140 － 130 － 120 － 110……….. － 60 － 50 － 40 － 30 － 20 － 10 ＋ 1 ＋ 10 ＋ 20 上游控制區(qū) 核心啟動子 RNA polⅠ 啟動子 ? 核心啟動子（ core promoter）或核心元件 ： 位于 45到 +20，負責(zé)轉(zhuǎn)錄的起始。 ? 弱終止子 /ρ依賴性終止子 －－需要一種蛋白質(zhì)因子 ρ的幫助才能終止。 ? RNApol Ⅲ 的終止信號： 有富含 G RNA pol Ⅱ 的轉(zhuǎn)錄起始 ? RNA聚合酶 Ⅱ 與 轉(zhuǎn)錄因子 TFⅡ X形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物，共同參與轉(zhuǎn)錄起始的過程。 2）真核生物 Euk. ? 多種輔助因子的共同作用來保證這一轉(zhuǎn)變。 （ 3） 5’ 3’方向。 b. ρ因子具有 ATPase活性和解旋酶活性 ，促進轉(zhuǎn)錄終止。 ? tRNA和 rRNA都不是最初的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 因為： (1) 5’端都是單磷酸，而原始的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 5’三磷酸； (2) 分子比初始轉(zhuǎn)錄物小； (3) tRNA含有特殊的堿基，這些堿基只有通過一些化學(xué)修飾才可以得到。 表 酶 基因 底物 功能 RNaseP rnpA tRNA 5′端 內(nèi)切 RnaseO rnpB RnaseBN ? tRNA 3′端 外切 RnaseD rnd tRNA 3′端 外切 RnaseT ? tRNA 3′CCA 外切 RnaseⅢ rnc rRNA和 mRNA 內(nèi)切 RnaseR ? rRNA和 mRNA 外切 RnaseE rne 5S rRNA 內(nèi)切 RnaseⅠ rna 大部分 RNA 內(nèi)切 RnaseⅡ rnb RNA 外切 多核苷酸磷酸化酶 pnp RNA 外切 RnaseH rnh RNADNA 內(nèi)切 有一個 tRNATyr1的轉(zhuǎn)錄單元的原始轉(zhuǎn)錄物的修飾過程 ① ② ③ ④ ⑤ ⑤ ⑤ ⑤ 原核生物轉(zhuǎn)錄后的加工 ? rRNA的加工 ? tRNA的加工 ? mRNA的加工 (1) 原核生物的 mRNA是多順反子 mRNA Promoter Gene 1 Gene 2 Gene 3 Terminator DNA Transcription mRNA 3′ 1 2 3 5′ Translation Proteins 1 2 3 多順反子 mRNA ： 原核生物的一個 mRNA分子帶有幾個結(jié)構(gòu)基因的遺傳信息，利用共同的啟動子及終止信號，組成操縱子的基因表達調(diào)控單元。 ? 真核 tRNA的加工 : ① 剪切、修剪和剪接 ； ② 甲基修飾； ③ 3’ OH連接 CCA結(jié)構(gòu)。 1 E ． c o l i 90 ’ /100 ’ 處r p l J ( L 1 0 ) rplJ ( L 1 0 ) rpoB ( β 亞基 ) r p o C ( β ’亞基 ) 轉(zhuǎn)錄 前體多順反子 mRNA R N a s e Ⅲ 加工 成熟的 m R N A P 早期轉(zhuǎn)錄基因 A 1 A 2 A 3 0 . 3 0 . 7 1 1 . 1 1 . 2 1 . 3 t R N a s e Ⅲ p p p P u C o H p p p P u 前導(dǎo)序列 0 . 3 0 . 7 1 1 . 1 / 1 . 2 1 . 3 m R N A 圖 1 3 T 7 噬菌體早期區(qū)轉(zhuǎn)錄單條前體 RNA ，經(jīng) R N a s e Ⅲ剪切成 5 條成熟的 m R N A 2 真核生物的轉(zhuǎn)錄后加工 rRNA轉(zhuǎn)錄后加工 ? 初始轉(zhuǎn)錄本為 45S前體， ? 18S， 28S 是一個轉(zhuǎn)錄單元， ? 5sRNA前體獨立于其他三種 rRNA的基因轉(zhuǎn)錄。 識別 tRNA的空間結(jié)構(gòu) ? 由蛋白質(zhì) (20KD)和 RNA ( 375bp 約 130KD)組成 ， ? 這兩個組分對 RNA酶 P的催化活性都是必須的 。 4 真核生物的轉(zhuǎn)錄和原核轉(zhuǎn)錄的不同點： (1) 原核只有一種 RNA聚合酶 ， 而真核細胞有三種聚合酶； (2) 啟動子的結(jié)構(gòu)特點不同 ， 真核有三種不同的啟動子和有關(guān)的元件； (3) 真核的轉(zhuǎn)錄有很多蛋白質(zhì)因子的介入 。 不依賴ρ終止子的終止 IR IR 莖部富含 GC 莖環(huán)結(jié)構(gòu) 1）新生 RNA鏈形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，與 RNApol作用； 2） RNApol暫停為終止提供機會 ， 68個連續(xù)的 U串為 RNApol與模板的解離提供信號； 3） RNADNA之間的 UA 結(jié)合力較弱，于是 RNADNA解離，三元復(fù)合體解體， RNApol解離，轉(zhuǎn)錄終止。 ★ 轉(zhuǎn)錄泡處形成很短 RNADNA雜交雙鏈。 哺乳動物 RNA Pol Ⅱ 上游轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的元件 元件 保守序列 結(jié)合 DNA的長度 轉(zhuǎn)錄因子 TATAbox TATAAAA ～ 10bp TBP CAAT box GGCCAATCT ～ 22bp CTF/NF1 GC box GGGCGG ～ 20bp SP1 Octamer ATTTGCAT ～ 20bp Oct1 Octamer ATTTGCAT 23bp Oct2 KB GGGACTTTCC ～ 10bp NFKB ATF GTGACGT ～ 20bp ATF 哺乳動物 RNA pol I 啟動子的轉(zhuǎn)錄因子 因子 結(jié)構(gòu) 功能特點 UBF1 單鏈多肽 結(jié)合核心啟動子和上游控制元件 的 沒有種的特異性 SL1 4個蛋白 與細菌 σ因子 相似 ， SL1保證 RNApol TBP 準確定位； 有種的特異性 RNA polⅠ 的轉(zhuǎn)錄起始 － 170 － 160 － 150 － 140 － 130 － 120 － 110……….. － 60 － 50 － 40 － 30 － 20 － 10 ＋ 1 ＋ 10 ＋ 20 上游控制區(qū) 核心啟動子 － 170 － 160 － 150 － 140 － 130 － 120 － 110……….. － 60 － 50 － 40 － 30 － 20 － 10 ＋ 1 ＋ 10 ＋ 20 上游控制區(qū) 核心啟動子 UBF1 UBF1結(jié)合于 G－ C 豐富區(qū) SL1 SL1與 UBF1協(xié)同結(jié)合 TBP