【正文】 ? Pol 1 RNApol Ⅲ 的轉(zhuǎn)錄起始 參與的轉(zhuǎn)錄因子： ? TFⅢ A、 TFⅢ B、 TFⅢ C 、 TFⅡ D、 PBP、OCT1等。 ? 第一節(jié) 轉(zhuǎn)錄酶 ? 第二節(jié) 啟動(dòng)子 ? 第三節(jié) 終止子 ? 第四節(jié) 轉(zhuǎn)錄的機(jī)制 ? 第五節(jié) 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的后加工 ? 第六節(jié) RNA的剪接 第四節(jié) 轉(zhuǎn)錄的機(jī)制 1 起始： pol與啟動(dòng)子識(shí)別結(jié)合后啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄； 2 延伸： ? 第一個(gè)堿基加上后延伸，聚合酶不斷前移。 ? 莖環(huán)的存在可使 RNA聚合酶暫停一下，若此時(shí) ρ因子追上來和其結(jié)合，那么轉(zhuǎn)錄即可終止，若無 ρ因子聚合酶還可越過終止進(jìn)行“通讀”。 ? 第一節(jié) 轉(zhuǎn)錄酶 ? 第二節(jié) 啟動(dòng)子 ? 第三節(jié) 終止子 ? 第四節(jié) 轉(zhuǎn)錄的機(jī)制 ? 第五節(jié) 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的后加工 ? 第六節(jié) RNA的剪接 第三節(jié) 終止子 ? 1 原核生物的終止子 ? 2 真核生物的終止子 1 原核生物的終止子 (terminator) ? 終止子： DNA轉(zhuǎn)錄的終止信號(hào)。 ? 遠(yuǎn)離部位序列 富有 AT， 能增進(jìn)轉(zhuǎn)錄起始的頻率。 ? σ亞基識(shí)別 35序列，為轉(zhuǎn)錄選擇模板鏈。 ? 第一節(jié) 轉(zhuǎn)錄酶 ? 第二節(jié) 啟動(dòng)子 ? 第三節(jié) 終止子 ? 第四節(jié) 轉(zhuǎn)錄的機(jī)制 ? 第五節(jié) 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的后加工 ? 第六節(jié) RNA的剪接 1 原核生物的啟動(dòng)子 2 真核生物的啟動(dòng)子 第二節(jié) 啟動(dòng)子 1 原核生物的啟動(dòng)子 啟動(dòng)子（ promoter） ： DNA分子與 RNA聚合酶特異結(jié)合的部位，也就是轉(zhuǎn)錄開始的部位。 σ亞基 /因子 ?σ因子在 RNA聚合酶識(shí)別啟動(dòng)子的過程中起關(guān)鍵作用， σ因子可重復(fù)使用。 1 原核生物的 RNA聚合酶 （ RNA polynerase） RNA pol與 DNA pol作用的相同點(diǎn) ： DNA模板， Mg2＋ ， 4種三磷酸核苷。 真核 mRNA的加工和成熟 ? 5’加帽 ? 3’加尾 ?特殊堿基的修飾 ?內(nèi)含子的切除 第五章 轉(zhuǎn)錄 ? 轉(zhuǎn)錄（ transcription）： 以 DNA為模板合成RNA的過程。 ? 不需要引物，合成是連續(xù)的。 ? 第一節(jié) 轉(zhuǎn)錄酶 ? 第二節(jié) 啟動(dòng)子 ? 第三節(jié) 終止子 ? 第四節(jié) 轉(zhuǎn)錄的機(jī)制 ? 第五節(jié) 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的后加工 ? 第六節(jié) RNA的剪接 第一節(jié) 轉(zhuǎn)錄酶 1 原核生物的 RNA聚合酶 2 真核生物的 RNA聚合酶 RNA合成的基本特征 ： ? 5’ →3 ’ 方向； ? 底物三磷酸核苷酸（ NTP） ? 不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄，以單鏈 DNA為模板。 ? α亞基： 由 rpoA編碼 ， 可能參與全酶的組裝及全酶識(shí)別啟動(dòng)子 ， 還參與 RNA聚合酶與一些調(diào)控因子間的作用 。 RNApolⅡ ： 3) 大亞基中有 羧端功能區(qū) (carboxy terminal domain CTD) CTD中含一保守氨基酸序列的多個(gè)重復(fù) Tyr－ Ser－ Pro－ Thr－ Ser－ Pro－ Ser C 端重復(fù)七肽 不同生物中重復(fù)數(shù)目不一樣（酶活性） CTD： ? 參與轉(zhuǎn)錄起始 ? 真核 RNA pol獨(dú)有 。 ? 功能： (1) RNA pol結(jié)合位點(diǎn) ； (2) 形成開放啟動(dòng)復(fù)合體； (3) 使 RNA pol定向轉(zhuǎn)錄。 RNA聚合酶往往不能單獨(dú)識(shí)別這種啟動(dòng)子，需要有輔助蛋白質(zhì)的幫助。 ? 上游控制元件（ upstream control element, UCE）： 180到 107，增加核心元件轉(zhuǎn)錄起始效率。 內(nèi)部終止子 /不依賴 ρ因子 /強(qiáng)終止子 (1) 一個(gè) 反向重復(fù)序列 ， 可形成莖環(huán)結(jié)構(gòu) ， 阻止RNA pol的前進(jìn)； (2) 莖區(qū)域 內(nèi)富含 GC， 使莖環(huán)不易解開； (3) 3’ 端上有 6個(gè) U， 和模板形成的連續(xù) UA配對(duì)較易打開 ， 便于 RNA釋放 。C的序列， 3’ 端有 4個(gè) U。 ? 參與的轉(zhuǎn)錄因子有： TFⅡ A、 TFⅡ B、TFⅡ D、 TFⅡ E、 TFⅡ F、 TFⅡ H、TFⅡ I、 TFⅡ J、 TFⅡ S等。 2 轉(zhuǎn)錄的延伸 原核生物： ★ 酶與產(chǎn)物 RNA不解離 ★ 第一個(gè)堿基加上后延伸，聚合酶不斷前移， ★ 底物 NTP不斷加到 RNA鏈的 3’ OH 端，RNA鏈不斷延伸 。 轉(zhuǎn)錄的機(jī)制 1 起始： 2 延伸： 3 終止 ： 3 轉(zhuǎn)錄終止 終止過程： 酶停止添加底物 →→釋放 RNA鏈 →→酶解離 ? 原核生物的轉(zhuǎn)錄終止機(jī)制 ? 抗終止作用 原核生物的轉(zhuǎn)錄終止機(jī)制 終止子 ? 強(qiáng)終止子 ，也稱為 內(nèi)部終止子 。 3） ρ因子對(duì)終止子的作用 a、 ρ因子與 RNA結(jié)合 b、 ρ因子沿 RNA從 5’→3’移動(dòng)（ ATP水解供能）， （終止子處的較長時(shí)間的暫停給 ρ因子追趕的機(jī)會(huì)） c、 ρ因子與 RNApol 相互作用而造成轉(zhuǎn)錄的終止。 原核生物轉(zhuǎn)錄后的加工 ? rRNA的加工 ? tRNA的加工 ? mRNA的加工 rRNA的加工 ? 的 rRNA有三種： 16S， 23S和 5S。 原核前體 mRNA的加工 Translation Transcription mRNA DNA Protein Promoter Gene 3′ 5′ (2) 單順反子 mRNA 真核生物的一個(gè)編碼基因轉(zhuǎn)錄生成一個(gè) mRNA。 ④ 剪接內(nèi)含子； 1 加野生型酵母 細(xì)胞提取物 凝膠電泳 前體 t RN A 內(nèi)含子 圖 1 3 酵母 t RN A 在體外的剪切 真核 mRNA的加工和成熟 ? 5’加帽 ? 3’加尾 ?特殊堿基的修飾 ?內(nèi)含子的切除 1） 5’端加帽 ? 帽子的三種類型 ： 帽子 0（ Cap0） m7GpppX（共有） m7G N7— 甲基鳥苷 帽子 1 （ Cap1） m7GpppXm 第一個(gè)核苷酸的 2’ O 位上產(chǎn)生甲基化 帽子 2（ Cap2） m7GpppXmYm 第二個(gè)核苷酸的 2’ O 位上產(chǎn)生甲基化 ? 5’端帽子結(jié)構(gòu)的功能： a. 翻譯起始 的必要結(jié)構(gòu)，為 IFⅢ （起始因子）和核糖體對(duì) mRNA的識(shí)別提供信號(hào)， b. 增加 mRNA的穩(wěn)定性 ，保護(hù) mRNA 免遭 5’外切核酸酶的攻擊。 ? 但在少數(shù)情況下多順反子 mRNA先被內(nèi)切酶切成較小的單位再作為翻譯的模板。 t R N AIl e t R N AA l a t R N AA s p t R N AT rp 1 6 S 2 3 S 5 S R N a s e I I I R N a s e I I I R N a s e I I I R N a s e I I I R N a s e R R N a s e R R N a s e R R N a s e R R N a s e R 圖 1 3 r R N A 的加工 原核生物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加工 ? rRNA的加工 ? tRNA的加工 ? mRNA的加工 tRNA的加工 tRNA 基因 （ 1） 轉(zhuǎn)錄單元大多是 多基因 同一個(gè) tRNA基因、不同 tRNA基因、與 rRNA基因 三磷酸 有兩個(gè)基因拷貝 間隔序列 （各長 350base） （ 2） 有兩種類型的前體 tRNA 基因： ? Ⅰ 型： 具 3’端 CCA序列，（ Prok. 的 tRNA多為 Ⅰ 型） 作 3’修復(fù)的信號(hào)和最后的界線； 酶的作用下切除 CCA下游一段序列 Ⅱ 型： 沒有 3’端 CCA序列，（少數(shù) Phage、 Euk.） 需要添加 CCA序列 . tRNA的加工 ? 1）剪切 ? 2）核苷修飾 ? 3） 3’末端加上 CCA ? 4) 5’末端單磷酸的產(chǎn)生 t R N AIl e t R N AA l a t R N AA s p t R N AT rp 1 6 S 2 3 S 5 S R N a s e I I I R N a s e I I I R N a s e I I I R N a s e I I I R N a s e R R N a s e R R N a s e R R N a s e R R N a s e R 圖 1 3 r R N A 的加工 RNA的甲基化核苷酸（堿基）修飾 m5C m6A HNH HNH O O HNH HN— CH3 H3C H H H H 常見 tRNA中的修飾核苷酸 Cmnm5U (5羧甲基氨甲基尿苷 ) mCm5U （ 5甲氧基羰甲基尿苷） Xm5s2U （ 5甲基 2硫代尿苷） K2C （ 2賴氨酸胞苷） Com5U （ 5(2)羥羧甲基尿苷） I （次黃嘌呤）