核酸與核苷類(lèi)藥物概述及合成工藝-文庫(kù)吧在線(xiàn)文庫(kù)
【正文】 白色或類(lèi)自色結(jié)晶性粉末 ， 無(wú)臭 ， 易溶于水 ， 略溶于甲醇 、 乙醇中 ， 乙醚中極微溶 。 因此這個(gè)藥物對(duì)于抑制病毒具有較高選擇性 。 早在 1960年就在實(shí)驗(yàn)室合成了阿糖腺苷 ， 1969年美國(guó)用Streptomyces antibioticus NRRL3238菌株 ， 1972年日本用Strepto－ myces hebacecus 4334菌株 發(fā)酵法分別制備了阿糖腺苷 。 ? 發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷 （ 1）肌苷生產(chǎn)工藝 （ 2）發(fā)酵工藝條件： ? 碳源為葡萄糖 ? 保證充足的氮源 ? 磷酸鹽的影響 ? Mg+、 Ca+有促進(jìn)作用 ? 生長(zhǎng)因子腺嘌呤或酵母粉要亞適量 ? 最適發(fā)酵溫度為 3034℃ ， — ? 需大風(fēng)量 ,高溶氧和低 CO2 發(fā)酵法生產(chǎn)肌酐的工藝流程 ? 發(fā)酵法生產(chǎn)鳥(niǎo)苷和黃苷 鳥(niǎo)苷產(chǎn)生菌的特征： （ 1）嘌呤核苷酸分解酶活力強(qiáng)； （ 2） SAMP合成酶， GMP還原酶缺失； （ 3）解除 AMP、 GMP對(duì) PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶，肌苷酸脫氫酶和 GMP合成酶的反饋抑制； ? 發(fā)酵法生產(chǎn)腺苷 以肌苷生產(chǎn)菌（枯草桿菌）為誘變基礎(chǔ)菌株。 XMP轉(zhuǎn)化為 GMP菌株的條件 : (1)GMP不被分解 (2)GMP合成酶活力要強(qiáng)化 (抗生素激動(dòng)劑 ) (3)增加細(xì)胞通透性 ? 半合成法制備核苷酸 由于 發(fā)酵法生產(chǎn)核苷 的產(chǎn)率很高， 核苷懸浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷卻條件下加入氯化氧磷，進(jìn)行磷酸化，從核苷生成 5′ 核苷酸收率可達(dá) 90%。 （ 1） 菌體自溶法生產(chǎn)核苷酸工藝流程： ? 堿水解法生產(chǎn) 2＇ ， 3＇ 混合核苷酸 RNA結(jié)構(gòu)中的磷酸二酯鍵對(duì)于堿性條件不穩(wěn)定 ， 很容易生成 2′ ， 3 ＇ 環(huán)狀磷酸酯 ， 此環(huán)狀磷酸酯對(duì)堿更不穩(wěn)定 ，很易加水分解生成 2＇ ， 3＇ 混合核苷酸 。 如要制成固體狀 DNA， 在熱變性 DNA溶液中逐漸加入等體積 95％ 乙醇 ， 離心可獲得纖維狀DNA， 沉淀用乙醇 、 丙酮洗滌 ， 減壓低溫干燥得 DNA粗品 ， 產(chǎn)品含熱變性 DNA50％ ～ 60％ 。 要避免 分子降解 ， 可采用 苯酚法 制備 RNA。 培養(yǎng)酵母菌體收率高 ， 易于提取RNA。 ? 正式用于臨床的抗病毒核苷類(lèi)藥物有三氮唑核苷、疊氮胸苷、阿糖腺苷等。 二、核酸與核苷的一般理化性質(zhì) 核糖 （ 核糖 脫氧核糖 ） 核苷 嘌呤 （ 腺嘌呤 、 鳥(niǎo)嘌呤 ） 堿基 核酸 核苷酸 嘧啶 （ 胞 、 尿 、 胸腺嘧啶 ） （ DNA、 RNA） 磷酸 ? DNA和 RNA是存在于細(xì)胞中的正常成分 。 很顯然在許多酵母中 ， 早期細(xì)胞中的 RNA含量高 ， 其確切數(shù)值取決于 碳 、 氮比例 和培養(yǎng)基組成等 。 用苯酚處理生物材料 ， 使蛋白質(zhì)變性 ， 然后離心 ， 上層水溶液內(nèi)含有 全部RNA， 可用 乙醇沉淀 出來(lái) 。 工業(yè)用 DNA的提取 [提取 ] [熱變性 ] [沉淀 ]乙醇 魚(yú)精 提取液 纖維狀 DNA 水、 100℃ 冷卻、離心 70%80% （無(wú)生物活性） 15min 干燥 粗品 DNA（熱變性后無(wú)活性） ? 具有生物活性 DNA的制備 動(dòng)物內(nèi)臟 （ 肝 、 脾 、 胸腺 ） 加 4倍重量生理鹽水 經(jīng) 組織搗碎機(jī) 搗碎 1分鐘 ， 勻漿于 2500r／ pm離心 30分鐘 ， 沉淀用同樣體積的生理鹽水洗滌 3次 ， 每次洗后離心 ， 將沉淀懸浮于 20倍重量的冷生理鹽水中 ， 再搗碎 3分鐘 ， 加入 2倍量 5％ 的 （ 用 45%乙醇作溶劑 ） 十二烷基磺酸鈉 ， 并攪拌 2～ 3小時(shí) ， 在 0℃ 2500r／pm離心 ， 在上層液中加入等體積的 冷 95％ 乙醇 ， 離心即可得到纖維狀 DNA， 再用冷乙醇和丙酮洗滌 ， 減壓低溫干燥得粗品 DNA。 取 RNA配成 3％ ～%的水溶液 ， 加氫氧化鈉達(dá) ／ L濃度 ， 升溫至 38℃ ，保溫 16～ 20小時(shí) ， 用 6mol／ L鹽酸中和至 ， 從 RNA水解成2′ ， 3＇ 核苷酸的降解率達(dá) 95％ 以上 ， 將 2′ ， 3＇ 混合核苷酸制成每片含 50～ 100mg的片劑 ， 經(jīng)臨床使用 ， 對(duì)非特異性血小板減少癥 、 對(duì)白血球減少癥 、 癌腫的化療和放療后的升白血球均有較好療效 。 例一：肌苷 2mmol／ L懸浮于 5ml磷酸三乙酯中 ， 溫度控制 0℃ ，添加氯化氧磷 6mmol／ L， 水 2mmol／ L， 反應(yīng) 2h， 5＇ IMP摩爾產(chǎn)率達(dá) 91％ 。 誘變結(jié)果： （ 1）腺嘌呤回復(fù)，腺嘌呤酶缺失
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1