微生物實(shí)驗(yàn)論文-文庫吧在線文庫
【正文】 osedeposing microbes, Isolation and screening, PH experiment 前言在工業(yè)化水平日益提高、科學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展的今天，我們同時(shí)也面臨著世界人口激增、礦產(chǎn)資源枯竭等嚴(yán)峻的問題。據(jù)統(tǒng)計(jì)，地球上每年光合作用的產(chǎn)物中， 90%以上為木質(zhì)纖維素類物質(zhì)。因此，土壤取樣時(shí)，一般要鏟去表層土。 7H2O KCl 酵母膏 水 解酪素 將上述物質(zhì)溶解后 ,用蒸餾水定容到 1000ml 按上表比例配制 50ml 選擇培養(yǎng)基。 剛果紅染色法分離 所需儀器：無菌培養(yǎng)皿（ 12 個(gè)）、涂布器（ 3 個(gè)）、移液器、槍頭、溫箱等。 革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結(jié)晶紫進(jìn)行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇 (或丙酮 )脫色，最后用復(fù)染劑 (如番紅 )復(fù)染。所以脫色時(shí)間，脫色方法也應(yīng)嚴(yán)格控制。 3. 生理生化鑒別反應(yīng) 淀粉水解實(shí)驗(yàn) 方法 （ 1） 培養(yǎng)基成分：蛋白胨 1g , NaCl ，牛肉膏 ，可溶性淀粉 ，瓊脂~，蒸餾水 100mL，高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi) 121℃滅菌 20min. （ 2） 滅菌后 ,將試劑瓶取出 ,冷卻至 50℃左右，無菌操作制成平板。 注意：甲基紅試劑不能加的太多，否則會(huì)有假陽性出現(xiàn)。其中 pH9和 pH10時(shí)，其酶已經(jīng)基本失活。但是染料濃度的高低、每個(gè)培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的多少常常會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基本身的背景值大小有所差異，因此限制了觀察的效果。另外，我們分離到的四種菌都是三種是細(xì)菌、一種是真菌。 不同 PH值對分離菌株酶活力也有影響，本試驗(yàn)分離得到的菌種在 PH=6 左右的偏酸性條件下酶活力較高， PH 大于 6 后隨著 PH值的升高，纖維素酶活力降低。將它們再次接種到纖維素剛果紅培養(yǎng)基上進(jìn)行復(fù)篩培養(yǎng)。放入 高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi) 112℃滅菌 30min。觀察菌苔周圍有無出現(xiàn)無色透明圈以及透明圈的大小。 表 1 革蘭氏染 色結(jié)果 （ “ +”表示陽性，“ — ”表示陰性 ） 陰性 /陽性 白色菌 （菌 1） — 粉色菌 （菌 2） + 水解圈菌（菌 3） — 黃色菌 （菌 4） + 圖 1 黃色菌 （菌 4） 圖 2 白色菌 （菌 1） 圖 3 粉色菌 （菌 2） 圖 4 水解圈菌（菌 3） 2. 菌種保存 斜面（ CMC 培養(yǎng)基： NaCl ， MgSO4另外，陽性菌菌體等電點(diǎn)較陰性菌為低，在相同 PH 條件下進(jìn)行染色，陽性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。 （ 4） 劃線分離 將步驟 (1)中的鑒別培養(yǎng)基加熱熔化后倒入 4 個(gè)無菌平皿中，凝固后，用接種環(huán)挑取 (3)中 4 種菌落在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線。 需要先經(jīng)高壓蒸氣滅菌的儀器：試管（每只內(nèi)裝 9ml 蒸餾 水）、槍頭（黃色、藍(lán)色）。 富集培養(yǎng) 在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基之前，先通過選擇培養(yǎng)增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品 中分離到所需要的微生物。微生物分解纖維素主要是因?yàn)樗鼈兡軌蚍纸饫w維素酶。實(shí)驗(yàn)后期分別通過甲基紅試驗(yàn)、淀粉水解實(shí)驗(yàn)、 pH 梯度試驗(yàn)等生理生化反應(yīng)，檢測所得纖維素分解菌在分解過程中是否產(chǎn)酸、能否水解淀粉，以及不同 pH 值下分解纖維素的能力，為日后進(jìn)一步的研究打下基礎(chǔ)。因此，開發(fā)高效轉(zhuǎn)化木
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