高效液相色譜儀ppt課件-文庫吧在線文庫
【正文】 的特點： 流動相對樣品具有一定的溶解能力， 保證樣品組分不會沉淀在柱中 ( 或長時間保留在柱中 ) 。 ? 盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。 ? 加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。 ? 相鄰組分分離度的要求： 對于難分離的樣品，要求分離度 R≥ 樣品分析方法 ? 流動相的準備 過濾：用孔徑為 （ )濾膜過濾除去固體顆粒雜質(zhì)。 （ 2） 在 HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是 平頭注射器 。 一定確保所使用的流動相和乙腈 /水互溶。 （ 5） 避免泵啟動過速、升壓過快 4. 檢測器的保養(yǎng) （ 1） 紫外燈的保養(yǎng)：在分析前、色譜柱平衡得差不多時，再打開檢測器；在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測器。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜止過夜或更長時間。 （ 4） 進樣樣品要求無微粒和能阻死針頭及進樣閥的物質(zhì)，樣品溶液均要用 μm () 的濾膜過濾。 作為人工合成藥物的精制手段，用于除去少量雜質(zhì) (手性色譜柱以及配位色譜法 ) 從一些復(fù)雜的混合物中排除干擾物質(zhì)，并分析其中微量成分 中草藥有效成分的制備和分析 環(huán)境監(jiān)測和污染物的分析 食品中營養(yǎng)成分和物質(zhì)的分析 手性分離技術(shù)目前已成為高效液相色譜十分重要和熱門的應(yīng)用領(lǐng)域 例 1. 環(huán)境中有機氯農(nóng)藥殘留量分析 固定相：薄殼型硅膠 (37 ～ 50?m) 流動相：正己烷 流 速： mL/min 色譜柱： 50cm?(內(nèi)徑 ) 檢測器：差示折光檢測器 可對水果、蔬菜中 的農(nóng)藥殘留量進行分析。 為達到較好的分離效果，確定流動相配比。 5. 流動相過濾 流動相在混合前分別濾過，特別要注意分清 有機相 濾膜和水相 濾膜。如使用 UV 檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。 采用二元或多元組合溶劑作為流動相可以靈活調(diào)節(jié)流動相的極性或增加選擇性，以改進分離或調(diào)整出峰時間。 消除溶劑的干擾，不受溫度變化影響， 靈敏度比較低（尤其對有紫外吸收的組分） 流動相必須是揮發(fā)性的，不能含有緩沖鹽等。 c. 熒光檢測器 (FLD) 特點 : 選擇性檢測器， 靈敏度比紫外檢測器高 23個數(shù)量級， 可達到 1012g； 選擇性好，對流量和溫度敏感性低。 而且對流動相也有一定的限制， 即流動相的 截止波長 應(yīng)小于檢測波長。保護柱除了可以過濾顆粒物外，因為帶 1厘米長的填料，強保留物質(zhì)就先留在保護柱的柱芯填料里面，這樣可以避免色譜柱被強保留物質(zhì)污染。 C18柱（ C8柱）性能影響因素 物理性質(zhì) ?硅膠純度 ?色譜柱尺寸 ?顆粒形狀 ?粒徑 ?表面積 ?孔徑 ?鍵合類型 ?碳覆蓋率 ?封端 化學性質(zhì) 正相柱 ： 固定相通常為硅膠以及其他具有極性官能團，如胺基 (NH2)和 氰基 (CN)的鍵合相填料。 用定量環(huán)進樣精密度好，在使用外標法時，應(yīng)使用此種操作方式。當將扳手扳至“進樣 inject”位時，進樣閥的 流路發(fā)生了改變，流動相通過樣品管，將注入的樣品帶入色譜柱進行分析。 特點：高壓、高效、高速 分離對象 ：適用高沸點、熱不穩(wěn)定有機及生化試樣分離分析 （與 GC區(qū)分） 三、流程及主要部件 1. 流程 2. 主要部件 (1) 高壓輸液泵 單元泵 雙 元 泵 高壓泵作用 ：輸送流動相。其中又分單頭往復(fù)泵和雙頭往復(fù)泵。L等不同容積， 可以根據(jù)需要選配。 規(guī)格：常規(guī)分析柱 (常量柱 ) 內(nèi)徑 2～ 5mm(常用 ， )，柱長 10～ 30cm (15cm， 25cm居多） 制備柱 （ 、 30mm、 50mm） 半制備柱（ 〉 5mm， 、 、 10mm） C18柱（ C8柱） SiSiOOOSiOOOSiOOOSiOOOSiOOOSiOOOSiOOOSiOOOSiOOOSiOOOSiOOOSiCH2H3CCH3H
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