【正文】 一 次多項(xiàng)式 模型為直線，這是判斷某種方法是否為線性的最適方程。 上例 中，三 次 多項(xiàng)式回歸時(shí)，L=5， R=2， Rdf=4， df=5*24=6。 DLi應(yīng)與預(yù)先設(shè)定目標(biāo)的單位一致， 以便進(jìn)行比較。重復(fù)性最好用 L個(gè)樣本的所有重復(fù)測(cè)量結(jié)果的集合 方差 來評(píng)價(jià)，是一個(gè)不依賴于分析物濃度總的測(cè)量均值的變異。公式如下： R：為重復(fù)測(cè)定的次數(shù)（ j=1,2,3… R） L：樣本數(shù) ri：樣本 i處的平均值。 20 A 是 超過設(shè)定值 設(shè)計(jì)方法和確定誤差目標(biāo)（非線性和重復(fù)性） () 按照設(shè)計(jì)方法進(jìn)行檢測(cè) () 數(shù)據(jù)點(diǎn)在 XY軸上并目測(cè)結(jié)果 () 明顯呈非線性關(guān)系？ () 找到 問題并糾正 兩個(gè)或以上 是 否 離群值？（ ， ） 多少？(,) 作一、二和三 次 最小二乘法回歸 () 去掉離群值 一個(gè) 沒有 方法呈線性 B 停止 是否有明顯非線性系數(shù)？ () 重復(fù)性與設(shè)定目標(biāo)比較 () 否 設(shè)定值內(nèi) 有 21 縮小范圍？ () 不行 該 方法是非線性 可以 舍去非線性明顯處的低或高值點(diǎn)() B 停止 選擇 Sy,x最 小的最適 非線性模型 () 計(jì)算非線性和線性模型在每個(gè)濃度處的差值() 差值超過設(shè)定線性誤差 ？ () 檢查重復(fù)性() 否 超過設(shè)定目標(biāo) 找出問題并解決 該方法呈線性 停止 是 通過檢查該方法呈明顯非線性 符合要求 C A 22 6. 線性 范圍發(fā)布 圖表法 測(cè)量結(jié)果（ Y）和預(yù)期結(jié)果（ X）進(jìn)行圖解表示，然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 允許誤差與目標(biāo) 設(shè)定 實(shí)驗(yàn)室應(yīng) 該確定自己的所有分析物的分析誤差的目標(biāo)（參見當(dāng)前 NCCLS文件 EP21臨床實(shí)驗(yàn)方法的總誤差）。如果不精密度高于設(shè)定目標(biāo)，則停止實(shí)驗(yàn)直到找到原因并糾正。 對(duì)于（分析物）來說，用（測(cè)量方法），通過 核實(shí) 在（確定目標(biāo)或最大允許偏差范圍）內(nèi)，線性范圍為從（下限）到（上限）。 這些值應(yīng)用相當(dāng)于統(tǒng)計(jì)學(xué)中的正負(fù)兩個(gè)方面。 由于高值標(biāo)本差異較大， 五個(gè)標(biāo)本重復(fù)測(cè)定的差值用百分比來評(píng)價(jià)更好，上表中后兩列就是用百分比進(jìn)行計(jì)算重復(fù)測(cè)定差值，所有標(biāo)本的 SD為 %。 三次多項(xiàng)式 模型有相似的擬合度，但沒有顯著性的系數(shù)。同例 1一樣，實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備樣本和對(duì) 6個(gè)不同濃度水平的標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)測(cè)定。 回歸分析顯示 二次多項(xiàng)式 模型是顯著的，但 三次多項(xiàng)式 模型也具有顯著意義 （ t分別為 30 和 ），超過自由度（ DF） =8時(shí)的允許水平 。 圖 C C4顯示 1級(jí)和 3級(jí)模型及它們的差值，有 5個(gè)差值超過實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的 。 階別 系數(shù) 結(jié)果 系統(tǒng)誤差 t檢驗(yàn) 回歸標(biāo)準(zhǔn)誤 自由度 1st b0 31 1st b1 204 8 2nd b0 2nd b1 2nd b2 7 3rd b0 3rd b1 3rd b2 3rd b3 6 測(cè)量均值 預(yù)期值 1st 預(yù)期值 2nd 差值 % 差值 重新分析時(shí)， 二次多項(xiàng)式 模型的回歸系數(shù) b2有顯著意義（ t=， ， DF=7）， 三次多項(xiàng)式 模型的 b2和 b3無顯著意義。這是一個(gè)顯著的高級(jí)別的模型，線性和非線性的差值用來比較非線性誤差的大小。 實(shí)測(cè) 均 值 預(yù)期值 （ 1st） 預(yù)期值 （ 2nd） 差值 （ 2nd 1st） % 差值 注釋 ： 本例中， 三次多項(xiàng)式 回歸分析沒有顯著性的系數(shù)，而 二次多項(xiàng)式 模型有顯著性的系數(shù)， 二 28 次多項(xiàng)式 和 一次多項(xiàng)式 模型見圖 C1，非線性是很明顯的。 更特異的 隨機(jī)誤差的 評(píng)價(jià)方法參見 NCCLS的 EP5文件 —臨床化學(xué)方法精密度評(píng)價(jià)操作，或 EP15文件 —精密度和準(zhǔn)確度的 核實(shí) 。 按隨機(jī)檢測(cè)方式，在一個(gè)分析批內(nèi)完成 10次檢測(cè)，作好記錄并目測(cè)線性關(guān)系和重復(fù)相關(guān)性，檢查離群值并判斷檢測(cè)結(jié)果是否有用，然后計(jì)算重復(fù)性并與設(shè)定的目標(biāo)進(jìn)行比較。 然而，線性范圍可通過最高和最低呈線性的測(cè)量濃度確定，在下面的稀釋列表中，起始為達(dá)到或 剛 o超過上限范圍的高濃度標(biāo)本或低濃度標(biāo)本，并且其標(biāo)本量足夠多，以至能用于各點(diǎn)重復(fù)測(cè)定。 假設(shè) 本指南中用于線性范圍評(píng)價(jià)時(shí)所用的假設(shè)有： 1) 樣本濃度已知（濃度已知或相互關(guān)系已知），沒有誤差； 2) 線性范圍由測(cè)量的最低與最高濃度來確定； 3) 線性范圍由系統(tǒng)最終輸出結(jié)果（濃度或活性）來表達(dá)，而不是由儀器檢測(cè)信號(hào)（需由系統(tǒng)進(jìn)一步處理） 來表示 ； 4) 所用樣本沒有干擾（干擾可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無效）； 5) 在線性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)過程中， 檢測(cè)系統(tǒng)的操作遵守其 他 要求的操作聲明； 6) 檢測(cè)回歸系數(shù)的顯著性時(shí)，假設(shè)每個(gè)水平重復(fù)測(cè)量時(shí)結(jié)果正常分布，這種分布的偏差在不同濃度水平間是不變的。 當(dāng)測(cè)量樣本的濃度未知時(shí)，線性目標(biāo)應(yīng)用相對(duì)值表示。允許誤差也可以作在圖上，百分比差值要轉(zhuǎn)換為實(shí)際單位，舉例見附錄Ｃ。如果方法 性能 與以前評(píng)估重復(fù)性時(shí)一致，重復(fù)測(cè)量次數(shù)增多一倍（ 4次），這樣可以將均值的標(biāo)準(zhǔn)差降低約 40%。不精密度大小可用方差分析來計(jì)算，方差的平方根即為誤差大小。如果任一個(gè)點(diǎn) DLi超過設(shè)定目標(biāo)，則代表該點(diǎn)可能是非線性，此時(shí) 按以下 兩種方法進(jìn)行處理： （ 1）試圖找到非線性的原因（樣本準(zhǔn)備，干擾物質(zhì)，儀器定標(biāo)等）并解決。要注意這只是統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性，只是非線性被檢測(cè)，而不代表對(duì)病人的檢測(cè)結(jié)果有多大影響 ， 按 。計(jì)算每個(gè)非線性系數(shù)斜率的標(biāo)準(zhǔn)差 SEi（可由回歸程序算出），然后進(jìn)行 t檢驗(yàn)，判斷非線性系數(shù)是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即與 0之間有無差異。先要知道其濃度或各溶液之間的比例關(guān)系，不同濃度間可以是等間距或不等間距的（但要知道相互之間的關(guān)系）。深入的討論參見 ASTME 17894。 5) 當(dāng)某一個(gè)給定濃度的一個(gè)測(cè)量值（ yi）明顯偏離另一個(gè) Y值時(shí)，目視檢查就可以判斷它是一個(gè)離群值（參照 ）。將測(cè)量數(shù)據(jù)作為 Y值，計(jì)算濃度或相對(duì)濃度作為 X值進(jìn)行作圖。 重復(fù)測(cè)量的次數(shù)要足夠，以便 可靠 得出各管的濃度。 如果需用到其它濃度，要知道相互的間隔關(guān)系，且相互間隔適合在座標(biāo)圖表上表示。 每管的濃度由以下公式來計(jì)算，第 1管的濃度為 C1，體積為 V1，以此類推，第 5管的濃度和體積分別為 C5和 V5： 濃度 C=（ C1也可以先用高值和低值濃度配制成一個(gè)中間濃度管，然后用低值和中間濃度、高值和中間濃度分配其它管的濃度。如果用白蛋白或非人的一些成分，在實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)和結(jié)果中要注明） WBC 白細(xì)胞棕黃層 注意：當(dāng)使用蛋白質(zhì)或酶時(shí)，要確保其物理和 /或化學(xué)活性的一致性。這些稀釋液要用最小量，并可以查證其可用， 同時(shí) 要保證質(zhì)控物完全溶解。做為選擇，可以適當(dāng)?shù)靥幚聿∪藰?biāo)本以降低分析物濃度（如透析、熱處理、層析）。 用推薦的稀釋液稀釋病人樣本 用于稀釋病人高濃度樣本的液體對(duì)測(cè)量結(jié)果是有影響的，只有廠家推薦的或?qū)嶒?yàn)室已證實(shí)可用的稀釋液才能用于稀釋樣本。 4． 2 基質(zhì)效應(yīng) 用于驗(yàn)證線性范圍的標(biāo)本類型應(yīng)與臨床測(cè)試所用的標(biāo)本類型相類似，所有標(biāo)本應(yīng)不含廠家所標(biāo)定的干擾因素（如溶血、黃疸、脂血等）。 五個(gè)測(cè)量點(diǎn)是多元回歸方法評(píng)價(jià)線性范圍時(shí)的最低要求，更多的測(cè)量點(diǎn)能更精確的評(píng)價(jià)線性，得到的線性范圍更寬。儀器設(shè)備在實(shí)驗(yàn)室必須安裝和使用一段時(shí)間，實(shí)驗(yàn)室人員能理解和正確操作儀器。準(zhǔn)確度一般用測(cè)量偏倚（數(shù)字）來表示，準(zhǔn)確度與偏倚呈相反關(guān)系。 測(cè)量程序 （ Measurement procedure） ： 一系列操作規(guī)程，根據(jù)給定的方法，用于特定的檢測(cè)。如 y截距表示當(dāng) x為 0時(shí)的 y值大小。通常單次檢測(cè)的允許誤差的范圍用標(biāo)本測(cè)量靶值 177。 Kroll和 Emancipator提出一種基于直線回歸方程與多項(xiàng)式方程比較的方法，用殘差（即每一個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)到回歸直線的差值）來定義線性。 Global 檢驗(yàn) 僅僅表明統(tǒng)計(jì)學(xué)上的非線性存在，不能顯示非線性存在哪里，也不能顯示誤差的大小。 本指南主要是評(píng)價(jià)線性關(guān)系，盡可能不受精密度和準(zhǔn)確度的影響。 Measurement error/error of measurement(測(cè)量誤差 )代替 total error(總誤差 )，指測(cè)量值與真值的差值。協(xié)調(diào)一致是一個(gè)在認(rèn)知、理解、解釋差異各方面逐步達(dá)到全球一致的過程。它們都有兩種統(tǒng)計(jì)模型（線性與非線性），都是評(píng)價(jià)那種是最可能的模型。 本版本說明： 與以前版本相比 EP6A最大的改變是統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的改進(jìn)。 4 目 錄 摘要………………………………………………………………………………………………… i 委員會(huì)成員……………………………………………………………………………………… iii 前言……………………………………………………………………………………………… vii 1 范圍 2 介紹 2． 1 目的 2． 2 選擇方法 2． 3 定義 2． 4 實(shí)驗(yàn)方法的概述 3 時(shí)間要求 3． 1 儀器熟悉階段 3． 2 實(shí)驗(yàn)階段 4 實(shí)驗(yàn)條件的評(píng)價(jià) 4． 1 樣本要求 4． 2 基質(zhì)效應(yīng) 4． 3 可接受的基質(zhì)體系 4． 4 樣本中添加物的選擇 4． 5 分析順序 4． 6 分析范圍 4． 7 樣本準(zhǔn)備 和濃度計(jì)算 4． 8 數(shù)據(jù)收集 4． 9 臨床上幾個(gè)重要的濃度水平 5 線性范圍 驗(yàn)證 —數(shù)據(jù)評(píng)估 5． 1 初步的數(shù)據(jù)檢查 5． 2 離群值檢查 5． 3 線性范圍的確定 5． 4 考慮隨機(jī)誤差 6 線性 范圍 發(fā)布 6． 1 圖表方法 6． 2 發(fā)布 線性范圍 的確認(rèn) 5 6． 3 允許誤差與設(shè)定目標(biāo) 6． 4 其它誤差的影響 6． 5 假設(shè) 6． 6 發(fā)布線性聲明的指導(dǎo)方針 文 獻(xiàn) 附錄 A 樣本稀釋方法