【正文】 光滑的載玻片與墨汁接觸，涂成均勻的薄層，自然干燥。四、實驗報告(一)繪圖1枯草芽孢桿菌的芽孢形態(tài)，芽孢的著生位置。找出3類菌絲及其分生孢子，注意放線菌的基內(nèi)曲絲、氣生菌絲的粗細和色澤差異。觀察棘孢小單孢菌時注意把視野調(diào)暗，其基內(nèi)菌絲纖細發(fā)亮，其單個分生孢子發(fā)暗，直接生長在基內(nèi)菌絲長出的小梗上。2 半固體PDA培養(yǎng)基、乳酸苯酚固定液、棉藍染色液、20％甘油。4加蓋玻片 在培養(yǎng)基未徹底凝固前，用無菌鑷子將皿內(nèi)蓋玻片蓋在瓊脂塊薄層上，用鑷子輕壓。2 粘片觀察 取一滴棉藍染色液置于載玻片中央，取一段透明膠帶，打開霉菌平板培養(yǎng)物取菌體，粘面朝下，放在染液上。實驗七 酵母形態(tài)觀察和大小測定一、實驗?zāi)康?了解自然存在的酵母菌及其形態(tài)結(jié)構(gòu)。5 目鏡測微尺、鏡臺測微尺。(2)移接產(chǎn)孢培養(yǎng)基：將活化的釀灑酵母移接至醋酸鈉培養(yǎng)基上，置30℃恒溫培養(yǎng)14天。目鏡測微尺每格實際代表的長度隨使用接目鏡和接物鏡的放大倍數(shù)而改變，因此在使用前必須用鏡臺測微尺進行標定。并詳細記錄于表中，最后，求出平均值，才能代表該菌的大小。5學(xué)習(xí)使用杜氏小管進行糖發(fā)酵試驗，并比較3種菌的糖發(fā)酵試驗結(jié)果。3觀察記錄：取出以上試管，振蕩2min。(四) 糖發(fā)酵試驗原理：可根據(jù)細菌分解利用糖能力的差異表現(xiàn)出是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作為鑒定菌種的依據(jù)。2 ，在吲哚試驗中加入乙醚，它們各有什么作用？五、問題與思考1以上生理生化反應(yīng)能用于鑒別細菌，其原理是什么?2細菌生理生化反應(yīng)試驗中，為什么要設(shè)空白對照?3現(xiàn)分離到一株腸道細菌，試結(jié)合本實驗學(xué)到的知識設(shè)計一個實驗方案進行鑒別。實驗九 培養(yǎng)基的配制一、實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)和掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟2學(xué)會實驗室滅菌鍋的使用方法二、實驗材料1牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉紅、鏈霉素、1mol/LNaOH、1mol/LHCl、KNONaCl、K2HPO4牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶解后倒入大燒杯；也可放在稱量紙上稱量，隨后放人熱水中，牛肉膏便與稱量紙分離，立即取出紙片。4過濾：液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾，固體培養(yǎng)基可用4層紗布趁熱過濾，以利結(jié)果的觀察。要使棉塞總長約3／5塞人試管口或瓶口內(nèi)，以防棉塞脫落。9擺斜面：滅菌后，如制斜面，則需趁熱將試管口端擱在一根長木條上，并調(diào)整斜度，使斜度的長度不超過試管總長度的1/2。對微量成分FeSO41稱量和溶解：先計算后稱量，按用量稱取各成分，并將其溶解在少于所需要的水中。六、演示1培養(yǎng)基的分裝方法。二、實驗材料1金黃色葡萄球菌和普通變形菌斜面菌種。3混菌法測定菌落數(shù)的方法(1)細菌：取10106兩管稀釋液各400ul，分別接入相應(yīng)標號的平皿中，每個稀釋度接兩個平皿。(二)平板劃線分離微生物1倒平板：按無菌操作要求，在火焰旁操作，取融化并冷卻至不燙手的固體培養(yǎng)基(約50℃)，倒入無菌培養(yǎng)皿中，倒量以鋪滿皿底為限，平放桌上待其充分凝固，備用。(2)接種的方法是，用接種針沾取少量待接菌種．然后從柱狀培養(yǎng)基的中心穿入其底部(但不要穿透)、然后沿原刺入路線抽出接種針，注意接種針不要移動。2在土壤稀釋分離操作中，每稀釋10倍，最好更換一次移液管，使計數(shù)準確。3 帶塞或塑料帽玻璃管(直徑1820mm，長180200mm)，100mL和250mL血漿瓶，20m1和50mL針筒，250mL三角瓶，試管，厭氧罐，厭氧袋(不透氣的無毒復(fù)合適明薄膜塑料袋，14cmx32cm)，培養(yǎng)皿，真空泵，帶活塞干燥器，氮氣鋼瓶。使血漿瓶口朝下傾斜，利用瓶內(nèi)壓力將培養(yǎng)液緩慢灌入針筒內(nèi)，然后取下針筒，用經(jīng)滅菌的帶孔橡皮塞迅速把針筒頭部塞住。2選用干燥器、針筒、厭氧罐或厭氧袋時，應(yīng)事先仔細檢查其密封性能，以防漏氣。微生物按其對環(huán)境條件的需求可以分為好氧、厭氧微生物、嗜酸堿／中性微生物和中溫／耐高溫／耐低溫微生物等多種類型。儀器設(shè)備：721分光光度計、可控溫搖床。(4) 取出觀察各菌的生長情況，并測OD600的值，確定每種微生物生長的最佳生長溫度。滅菌后測pH。第二篇 應(yīng) 用 性 實 驗實驗一、乳酸發(fā)酵與乳酸菌飲料一、實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)乳酸發(fā)酵和制作乳酸菌飲料的方法．2從新鮮酸乳中進行乳酸菌的分離純化3乳酸發(fā)酵及檢測。(二)乳酸發(fā)酵及檢測1發(fā)酵：在無菌操作下將分離的1株乳酸菌接種于裝有300mL乳酸菌培養(yǎng)液的500mL三角瓶中，4042℃靜止培養(yǎng)。然后轉(zhuǎn)入45℃的低溫下冷藏24h以上。六、注意事項1采用BCG牛乳培養(yǎng)基瓊脂平板篩選乳酸菌時，注意挑取典型持征的黃色菌落，結(jié)合鏡檢觀察，有利高效分離篩選乳酸菌。二、實驗材料1 枯草芽孢桿菌。以細塑膠管連接恒流泵和菌體海藻酸鈉懸液，在恒流泵的輸送下，然后轉(zhuǎn)入4℃冰箱過夜。α淀粉酶活性測定程序如下：（1）吸取1mL標準糊精液，轉(zhuǎn)入裝有3mL標準碘液的試管中，以此作為比色的標準管(或者吸取2mL轉(zhuǎn)入比色用白瓷板的空穴內(nèi)，作為比色標準)。五、問題和思考1制備固定化細胞的操作中，重點應(yīng)掌握哪幾個技術(shù)環(huán)節(jié)?此法最適用于那類酶的生產(chǎn)，2結(jié)合本實驗學(xué)到的知識，試繪出利用固定化細胞連續(xù)生產(chǎn)胞外酶的流程圖，并標明各部位。3三角瓶(250mL、500mL)、試管、培養(yǎng)皿(9cm)、恒溫搖床、恒溫培養(yǎng)箱、紫外照射箱、磁力攪拌器、脫脂棉、無菌漏斗、玻璃珠、移液管、涂布器、酒精燈。逐一操作，將培養(yǎng)皿平放在離紫外燈30cm(垂直距離)處的磁力攪拌器上，照射1min后打開培養(yǎng)皿蓋，開始照射，與照射處理開始的同時打開磁力攪拌器進行攪拌，即時計算時間。4蛋白酶的測定方法(1)取樣：培養(yǎng)后隨機稱取以上搖瓶培養(yǎng)物1g，加蒸餾水100mL或200mL)，40℃水浴，浸酶1h，取上清浸液測定酶活性。2為什么在誘變時要把菌懸液打散和培養(yǎng)一段時間?六、注意事項1紫外線照射時注意保護眼睛和皮膚。5谷氨酸的檢測：此項檢測也是醬油優(yōu)良菌株的重要指標之一。(三)優(yōu)良菌株的篩選1初篩：首先觀察在菌落周圍出現(xiàn)的透明圈大小，并測量其菌落直徑與透明圈直徑之比，選擇其比值大且菌落直徑也大的菌落4050個，作為復(fù)篩菌株。(二)誘變處理可用物理方法或化學(xué)方法，所用誘變劑種類及劑量的選擇可視具體情況決定，有時還可采用復(fù)合處理，可獲得更好的結(jié)果。3測定α淀粉酶活性的可溶性淀粉和標準糊精液，要低溫保存，注意防腐，其標準管應(yīng)做到當天使用當天配制，并注意防腐和冰箱低溫保存。（3）計算淀粉酶活力酶活力/=(60/t2020%n)247。在玻璃管流化床反應(yīng)器內(nèi)裝入70g固定化細胞膠珠。按10％的接種量接種于裝有無菌發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中。經(jīng)品嘗和檢驗的酸乳應(yīng)在4℃條件下冷藏，可保持67d。2已發(fā)酵的乳酸菌飲料凝乳情況觀察。2將純種嗜熱乳酸鏈球菌、保加利亞乳酸桿菌及兩種菌的等量混合菌液作為發(fā)酵劑，均以2％5％的接種量分別接人以上培養(yǎng)基質(zhì)中即為飲料發(fā)酵液，亦可以市售鮮酸乳為發(fā)酵劑。2 BCG牛乳培養(yǎng)基、乳酸菌培養(yǎng)基、脫脂乳試管、脫脂乳粉或全脂乳粉、鮮牛奶、蔗糖、碳酸鈣。（4）取出觀察各菌的生長情況，并測OD600，確定每種微生物的最高耐鹽能力。（4）取出觀察各菌的生長情況，并測OD600，確定每種微生物的最佳生長pH。（4）從不同裝液量的搖瓶中取樣，用721分光光度計測定其OD600的值，根據(jù)其濁度的大小可以判斷微生物的生長情況，從而確定大腸桿菌在好氧培養(yǎng)時對氧氣的需要量。但對厭氧微生物來講，由于氧的存在會使其體內(nèi)產(chǎn)生具有破壞作用的自由基，氧氣對這些微生物是一種有毒物質(zhì)。5產(chǎn)氣莢膜梭菌為條件致病菌，防止進入口中和沾上傷口。2試比較以上厭氧培養(yǎng)方法的優(yōu)缺點，并分析其成功的關(guān)鍵。(二)針筒厭氧培養(yǎng)法此法適于活化厭氧菌和小體積的擴大培養(yǎng)。3掌握厭氧法培養(yǎng)丙酮丁醇梭菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌。3比較兩種細雨穿刺按種的結(jié)果，并進行分析。注意劃線要輕，不可把培養(yǎng)基劃破。(3)霉菌：取10103兩管稀釋液各400ul，分別接入相應(yīng)標號的平皿中，每個稀釋險接兩個平皿。三、實驗方法(一)土壤稀釋分離1取土壤：取表層以下510ml處的土樣．放入滅菌的袋中備用，或放在4℃冰箱中暫存。實驗十 土壤的稀釋、分離、純化及無菌操作技術(shù)一、實驗?zāi)康暮蛢?nèi)容1學(xué)習(xí)從上壤中分離微生物的方法，學(xué)習(xí)無菌操作技術(shù)。3鏈霉素的加入：鏈霉素受熱容易分解，所以臨用時，將培養(yǎng)基融化后待溫度降至45℃左右時才能加入。2 PH調(diào)節(jié)、分裝、包扎、滅菌及無菌檢查同牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配制。其配方如下：可溶性淀粉20g，KNO31g、NaCl 、MgSO4若培養(yǎng)基分裝于試管中，則應(yīng)先把試管扎成捆后，再于棉塞外包一層牛皮紙。分裝入三角瓶內(nèi)以不超過其容積一半為宜。3調(diào)PH：檢測培養(yǎng)基的PH，若pH偏酸，可滴加1滴1mol/LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙檢測，直至達到所需pH范圍。2試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH試紙、棉花、牛皮紙、記號筆、線繩、紗布。2甲基紅試驗中，不要過多滴加甲基紅指示別，以免出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。將裝有培養(yǎng)液的杜氏小管倒置放入試管中，置37℃恒溫箱中分別培養(yǎng)24h、48h和72h觀察結(jié)果。2接種培養(yǎng)：以無菌操作分別接種少量菌苔到以上相應(yīng)試管中，第5管作空白對照不接種，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)2448h。4超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、試管、移液管、杜氏小套管。實驗八 細菌的生理生化反應(yīng)一、實驗?zāi)康?了解細菌鑒定中常用的主要生理生化反應(yīng)實驗法及其原理。先用低倍鏡觀察，調(diào)焦距，待看清鏡臺測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)功目鏡，使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的刻度相平行，并使兩尺左邊的一條線重合，向右尋找另外一條兩尺相重合的直線。(4)計算子囊形成的百分率：計數(shù)時隨機取3個視野，分別計數(shù)產(chǎn)子囊孢子的子囊數(shù)和不產(chǎn)孢子的細胞，然后按下列公式計算：5 酵母菌假菌絲的觀察 取一無菌載玻片浸于溶化的PDA培養(yǎng)基中，取出放在濕室培養(yǎng)的支架上，待培養(yǎng)基凝固后，進行酵母菌劃線接種，然后將無菌蓋玻片蓋在接菌線上，培養(yǎng)23天后，取出載玻片，擦去載玻片周圍的培養(yǎng)基，在顯微鏡下直接觀察。細胞無色，液泡呈紅色。二、實驗材料1 釀酒酵母、熱帶假絲酵母斜面菌種。4制成永久裝片 把觀察到霉菌形態(tài)較清晰，完整的片子，制成標本作較長期保存。(二)黑根霉假根的培養(yǎng)將融化的PDA培養(yǎng)基，冷卻至50℃倒入無菌平皿，其量約為半皿高度的1/冷凝后，用接種環(huán)沾取根霉孢子，在平板表面劃線接種。2取菌接種：用接種環(huán)挑取少量待觀察的霉菌孢子至濕室內(nèi)的載玻片上，每張載玻片可接同一菌種的孢子兩處。五、問題和思考l 在高倍鏡或油鏡下如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲?2用插片法和搭片法如何制備放線菌標本，其主要優(yōu)點是什么?實驗六 霉菌的形態(tài)觀察一、實驗?zāi)康? 掌握微生物載玻片濕室培養(yǎng)方法。制片時，于載玻片上放一小滴蒸餾水，將含菌玻璃紙片小心剪下一小塊，移至載玻片上