【正文】 谷氨酸測定：于以上培養(yǎng)基中加入7%鹽水（W/V），4045℃水浴，水解9d后過濾，以濾液檢測谷氨酸含量（測壓法）四、實驗報告1試列表說明高產(chǎn)蛋白酶菌株的篩選過程和結(jié)果。培養(yǎng)48h后即可見生長，若出現(xiàn)明顯的透明圈，即可按初篩方法檢測，獲得數(shù)株二次優(yōu)良菌株，進入搖瓶復(fù)篩階段。1紫外線處理：打開紫外燈(30w)預(yù)熱20min。二、實驗材料1米曲霉斜面菌種。四、實驗結(jié)果和報告1記錄所收集發(fā)酵液的α淀粉酶活性，并根據(jù)測定結(jié)果闡述固定化細胞的產(chǎn)酶特點。培養(yǎng)后的發(fā)酵液由反應(yīng)器頂部流出，收集發(fā)酵液，于4℃冰箱保存，用于測定α淀粉酶活性。將收集的菌糊用生理鹽水以10g／100mL制成菌懸液。2了解固定化活細胞發(fā)酵連續(xù)產(chǎn)酶的特性。4將發(fā)酵的酸乳品評結(jié)果記錄于表中。3把接種后的酸乳瓶置于4042℃恒溫箱中培養(yǎng)34h。三、 實驗方法和步驟(一)乳酸菌的分離純化1分離：取市售新鮮酸乳或泡制酸菜的酸液稀釋至105，取其中的10，分別接人BCG牛乳培養(yǎng)基瓊脂平板上，用無菌涂布器依次涂布；或者直接用接種環(huán)沾取原液平扳劃線分離，置40℃培養(yǎng)48h，如出現(xiàn)圓形稍扁平的黃色菌落及其周圍培養(yǎng)基變?yōu)辄S色者初步定為乳酸菌。六、問題與思考1記錄不同條件下大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、鹽桿菌的生長情況。并分裝試管。（2）將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、鹽桿菌按1%接種量接種液體試管培養(yǎng)基，每個菌種接種4管，分別標上20℃、28℃、37℃、45℃標記。三、實驗材料菌種：大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、鹽桿菌。2了解氧氣、溫度、pH、鹽等環(huán)境因素對微生物生長的影響。2試舉例說明研究厭氧菌的實際意義。隨后將血漿瓶從沸水浴中取出，再用氮氣鋼瓶中的高純氮氣(％)通過膠塞上的一枚針頭引入血漿瓶中，使血漿瓶內(nèi)充滿氮氣，瓶內(nèi)培養(yǎng)基在冷卻過程中保持無氧狀態(tài)。2 RCM培養(yǎng)基(即強化梭菌培養(yǎng)基)、TYA培養(yǎng)基、玉米醪培養(yǎng)基、中性紅培養(yǎng)基、明膠麥芽汁培養(yǎng)基。3試設(shè)計實驗，從水或者空氣中分離微生物，并進行計數(shù)。2穿刺接種(1)取兩支新鮮半固體牛肉膏蛋白胨柱狀培養(yǎng)基，做好標記(寫上菌名、接種日期、接種人等)。4培養(yǎng)：將接種好的細菌、放線菌、霉菌平板倒置，即皿蓋朝下放置，于2830℃中溫培養(yǎng)，細菌培養(yǎng)12d，放線菌培養(yǎng)57d，霉菌培養(yǎng)35d。(2)梯度稀釋：用移液器吸102的土壤懸液100ul，放入裝有900ul無菌水的EP管中，上下顛倒數(shù)次，即為103的稀釋液，如此重復(fù)，可依次制成103108的稀釋液。3用平板劃線法分離微生物。四、實驗結(jié)果和報告記錄本實驗配制培養(yǎng)第的名稱、數(shù)量，并圖解說明其配制過程，指明要點。其配方如下：、MgSO41 稱量和溶解：先計算后稱量，按用量先稱取可溶性淀粉，放入小燒杯中，并用少量冷水將其調(diào)成糊狀，再加至少于所需水量的沸水中，繼續(xù)加熱，邊加熱邊攪拌，至其完全溶解。8滅菌：℃濕熱滅菌20min。6加棉塞：試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)制作的棉塞。pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂前。其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g．NaCl5g，瓊脂1520g，水1000mL。4在糖發(fā)酵試驗的培養(yǎng)管中裝入倒置杜氏小管時，注意防止小管內(nèi)有殘留氣泡。培養(yǎng)液中的杜氏小管內(nèi)有氣泡為陽性反應(yīng)，表明該菌分解糖能產(chǎn)酸并產(chǎn)氣．記錄用“▲”表示；如杜氏小管內(nèi)沒有氣泡為陰性反應(yīng)，記錄用“▽”表示。否則為陰性反應(yīng)。2接種培養(yǎng)：以無菌操作分別接種少量菌苔至以上相應(yīng)試管中，空白對照不接菌。3比較4種菌的甲基紅反應(yīng)結(jié)果。4酵母菌大小的測定 將鏡臺測微尺取下，換上釀酒酵母菌玻片標本，先在低倍鏡下找到目的物，然后在高倍鏡下用目鏡測微尺測量菌體的大小。酵母菌假菌絲的觀察：取出長有假菌絲的載玻片，擦去載玻片周圍的培養(yǎng)基，放在再撥片載玻片上，在顯微鏡下直接觀察。4 酵母菌子囊孢子的觀察挑取產(chǎn)孢菌苔→涂片→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢→計數(shù)。3 %美藍染色液(%mol/L磷酸緩沖液配制)、碘液、%中性紅染色液、5％孔雀綠、%的沙黃液、95％乙醇。四、實驗結(jié)果和報告繪制并標注鏡幾種霉菌鏡檢形態(tài)圖五、問題和思考1 什么叫載玻片濕室培養(yǎng)，它適用于觀察怎樣的微生物，有何優(yōu)點?2 濕室培養(yǎng)時為何用20％甘油作保濕劑？3 本實驗中觀察假根的設(shè)計原理是什么？此設(shè)計還適合于培養(yǎng)哪類菌？六、注意事項載玻片濕室培養(yǎng)時，蓋玻片不能緊貼載玻片，要彼此有極小縫隙。(三)鏡檢觀察1 濕室培養(yǎng)霉菌鏡檢載玻片 從培養(yǎng)1620h開始，通過連續(xù)觀察，可了解孢子的萌發(fā)、曲絲體的生長分化和子實體的形成過程。3 加培養(yǎng)基 用無菌細口滴管吸取少量融化約60℃的培養(yǎng)基，滴加到載玻片的接種處。3 根霉假根的觀察。將制片于顯微鏡下觀察，先用低倍鏡觀察菌的立體生長狀況、再用高倍鏡仔細觀察。3蓋玻片、載玻片、鑷子、接種環(huán)、顯微鏡、涂布器、玻璃紙、打孔器。背景黑色，菌體較暗。(2)滴入12滴95％乙醇固定(不可加熱固定)。(2) 加5％孔雀綠水溶液23滴于小試管中，用接種環(huán)攪拌使染料與菌液充分混合。(2) 于載片上滴入35滴5％孔雀綠水溶液。2試描述你所觀察的細菌有無運動性，是如何運動的？六、思考題 1制片時為什么不能加熱固定？ 2沒有鞭毛的活細菌在光學(xué)顯微鏡下完全不動嗎？真實地記錄你觀察到的現(xiàn)象，并進行解釋。(4) 鏡檢：將光線適當(dāng)調(diào)暗，先用低倍鏡找到觀察部位，再用高倍鏡觀察。洗凈A液滴加B液后，將玻片在酒精燈上稍加熱，使其微冒蒸汽且不干，一般染3060秒鐘。五、實驗報告1 革蘭氏染色的基本原理和意義2 革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵六、思考題1根據(jù)實驗體會，你認為制備染色標本時，應(yīng)注意哪些事項？ 2制片為什么要完全干燥后才能用油鏡觀察？3做革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？其染色成敗的關(guān)鍵一步是什么？4當(dāng)你對一株未知菌進行革蘭氏染色時，怎樣能確證你的染色技術(shù)操作正確，結(jié)果可靠?實驗三 細菌的鞭毛染色及其運動觀察一、實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)并掌握細菌鞭毛染色的基本方法及觀察細菌鞭毛的著生情況。（6）干燥：空氣中自然干燥或在酒精燈高處微微加熱。B堿性染料：一般有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基紫等，細菌易被堿性染料染色。經(jīng)染色后的細菌細胞與背景形成鮮明對比。當(dāng)目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。（5）油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器，在標本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細調(diào)至看清物象為止。若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相近），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。（2）機械部分: 鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、載物臺轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細調(diào)節(jié)器等部件。它起著支持、調(diào)節(jié)、固定等作用。三、實驗材料 1顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、蓋玻片、接種環(huán)、酒精燈等。（6）繪出所觀察到的細菌形態(tài)圖像。4觀察時，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習(xí)慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時，右眼注視繪圖。2 革蘭氏染色的原理革蘭氏陽性菌的細胞壁主要有肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，在染色過程中，當(dāng)用95%乙醇處理時，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，細胞壁的通透性降低，使結(jié)晶紫碘復(fù)合物被保留在細胞壁內(nèi)而不易脫色，因此呈藍紫色。C中性（復(fù)合）染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于細胞核染色）。（7）鏡檢：在油鏡下觀察細菌形態(tài)。2用壓滴法觀察細菌的運動3用懸滴法觀察細菌的運動二、實驗原理鞭毛是細菌的運動“器官”，一般細菌的鞭毛都非常纖細，在普通光學(xué)顯微鏡的分辨力限度以外，故需要用特殊的鞭毛染色法，才能看到。然后用蒸餾水沖洗，自然干燥。要區(qū)分細菌鞭毛運動和布朗運動，后者只是在原處左右擺動，細菌細胞間有明顯位移者，才能判定為有運動性。3鞭毛染色的菌種為什么要先連續(xù)傳幾代，并且要采用幼齡菌種?4根據(jù)你的實驗體會，哪些因素影響鞭毛染色的效果?如何控制?5試設(shè)計—實驗，如何鑒別某種細菌是否能運功，是否有鞭毛，其鞭毛的著生位置。(3) 用試管夾夾住載玻片在火焰上用微火加熱，自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時，開始計算時間約45min。(3)將此試管浸于沸水浴(燒杯)中，加熱1520min。(3)加石炭酸復(fù)紅染液染色12min，水洗，自然干燥。在其周圍呈現(xiàn)一明亮的透明圈即莢膜。三、實驗方法和步驟(一) 觀察自然生長狀態(tài)的放線菌用鑷子小心取出用插片法培養(yǎng)的細黃鏈霉菌皿中的一張蓋玻片，將其背面附著的菌絲體擦干凈，然歷將長有菌的一面向上放在潔凈的載玻片上，用低倍鏡、高倍鏡觀察。注意區(qū)分黃鏈霉菌的基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和彎曲狀或螺旋狀的孢子絲。二、實驗材料1 產(chǎn)黃青霉、黑曲霉、黑根霉、總狀毛霉等斜面菌種。培養(yǎng)基應(yīng)滴得圓而薄，(滴加量一般以1/2小滴為宜)。將濕室內(nèi)的載玻片取出，直接置于低倍鏡和高倍鏡下觀察曲霉、青霉、毛霉、根霉等霉菌的形態(tài)，重點觀察菌絲是否分隔，曲霉和青霉的分生孢子形成特點，曲霉的足細胞，根霉和毛霉的孢子囊和泡囊孢子。結(jié)構(gòu)平行排列，易于觀察。4 顯微鏡、載玻片、擦鏡紙、孟玻片、接種環(huán)、v形玻璃棒、放置一個三角形玻璃棒支架的培養(yǎng)皿。(1)活化釀酒酵母：將釀酒酵母按種至新鮮的麥芽汁培養(yǎng)基上，置28培養(yǎng)23天，然后再移接23次。（二）酵母大小的測定l 測微尺的構(gòu)造：顯微鏡測微尺是由目鏡測微尺和鏡臺接物測微尺組成，目鏡測微尺是一塊圓形玻璃片，其中有精確的等分刻度，在5mm刻尺上分50份。先量出菌體的長和寬占目鏡測微尺的格數(shù)，再以目鏡測微尺每格的長度計算出菌體的長和寬。4比較4種菌的吲哚反應(yīng)結(jié)果。置37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2448h。陽性用“+”表示，陰性用“”表示。四、實驗結(jié)果和報告1細菌的生理生化反比試驗測定結(jié)果。滅菌時適當(dāng)延長煮沸時間可除去管內(nèi)氣泡。1稱藥品：按實際用量計算后，按配方稱取各種藥品放入大燒杯中。應(yīng)注意pH值不要調(diào)過頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。棉塞的形狀、大小和松緊度要合適，四周緊貼管壁，不留縫隙，才能起到防止雜菌侵入和有利通汽的作用。如因特殊情況不能及時滅菌，則應(yīng)放人冰箱內(nèi)暫存。再加入其他成分依次溶解。、蛋白胨5g，葡萄糖10g，瓊脂1520g，水1000ml，自然pH。五、問題和思考1配制培養(yǎng)基有哪幾個步驟?在操作過程中應(yīng)注意些什么問題?為什么?2培養(yǎng)基配制完成后，為什么必須立即滅菌?若不能及時滅菌應(yīng)如何處理？如何進行無菌檢查，3試設(shè)計實驗對飲料進行無菌檢查。4學(xué)習(xí)斜面接種及穿刺接種等無菌操作技術(shù)。注意：每一個稀釋度換用一支槍頭?？捎糜谟^察菌落，用于進一步純化分離或直接轉(zhuǎn)接斜面。分別接入金黃色葡萄球菌和普通變形菌。六、注意事項1一般土壤中，細菌最多，放線菌及霉菌次之，而酵母菌主要見于果園及菜園土壤中，故從土壤中分離細菌時，要取較高的稀釋度，否則菌落連成一片不能計數(shù)。CaCO