【正文】 油田本源微生物樣品DNA 進(jìn)行擴(kuò)增, 根據(jù)基因庫(kù)進(jìn)行克隆和DNA 序列分析, 將測(cè)序結(jié)果通過與基因庫(kù)進(jìn)行比對(duì), 結(jié)果表明七個(gè)泉油田樣品中有大量海桿菌屬和甲胞菌屬, 樣品中還發(fā)現(xiàn)存在產(chǎn)甲烷古菌及一些不可培養(yǎng)的其它古菌類群。 R : 52GGT TAC CTT GTT ACG ACT T23 。本文就二連盆地馬尼特坳陷哈日嘎構(gòu)造進(jìn)行的油氣微生物勘探情況和效果進(jìn)行簡(jiǎn)介。對(duì)于這種觀察結(jié)果的解釋一般是根據(jù)純種的SRB 所作的實(shí)驗(yàn)而得出的: SRB只能發(fā)生在低于80℃溫度和間接利用好氧微生物對(duì)烴類的代謝產(chǎn)物——有機(jī)酸的條件下[ 2 ]。該作用需要在120℃溫度下進(jìn)行, 反應(yīng)中間產(chǎn)物可能是來自含氧硫化物的元素硫。實(shí)驗(yàn)結(jié)果所顯示的混合菌屬的硫酸鹽還原菌能夠直接利用原油, 改變了人們對(duì)硫酸鹽還原菌只能消耗好氧微生物降解烴類的副產(chǎn)物——有機(jī)酸的傳統(tǒng)觀念, 對(duì)許多地質(zhì)現(xiàn)象有可能需要重新解釋。我國(guó)從20 世紀(jì)60 年代開始MEOR 技術(shù)研究,到90 年代已相繼在大慶、勝利、新疆、遼河、大港、吉林、華北等油田開展了現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn),取得了良好的增產(chǎn)效果[4 ] 。4 　結(jié)論(1) 微生物對(duì)原油中的長(zhǎng)鏈飽和烴類物質(zhì)有較好的降解作用,能使其分子鏈變短,并降低原油粘度。我國(guó)自60 年代開始研究微生物采油技術(shù)。，有利于增加產(chǎn)層壓力。微生物在油藏中生存或生長(zhǎng)取決于生態(tài)系統(tǒng)中物理特性化學(xué)特性。由于油田水中含有的氮、磷很低,油藏中的微生物數(shù)量一般較低。烴降解菌還可代謝產(chǎn)生表面活性劑、聚合物、有機(jī)酸、醇類和二氧化碳等有利于驅(qū)油的產(chǎn)物。從油田水中分離出的具有嗜鹽特性的厭氧微生物主要屬于鹽厭氧菌屬(Haloanaerobium) ,包括乙酰乙基擬鹽桿菌( H. acetoethlicum) , H. congolense 及油田水鹽厭氧菌( ) 。也可以利用C1 化合物,氨基酸和糖。最近的研究提供了熱的陸相和海相油藏中極端嗜熱發(fā)酵嗜熱古細(xì)菌的證據(jù)[10 ] 。因?yàn)槠溆泻π?SRB 是油田水中研究得最詳細(xì)的細(xì)菌群落。1. 3. 2 　嗜熱硫酸鹽還原菌對(duì)于在油田環(huán)境中存在的脫硫腸菌屬( Desulfotomaculum)菌種已有詳細(xì)報(bào)道[12 ] 。與脫硫腸菌相反,D. infernum 和T. norvegicus 是完全氧化菌。因此,可以推測(cè)它們的存在很可能由于海水進(jìn)入油藏或人類活動(dòng)帶來的污染。從墨西哥海灣高地的一個(gè)油井中分離出Methanosarcina siciliae HI350[18 ] 。據(jù)此可以推測(cè)乙酸鹽可以被互養(yǎng)共生菌間接降解而不是乙酸裂解產(chǎn)甲烷菌直接降解。由于地層缺乏微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),絕大多數(shù)處于休眠狀態(tài)。結(jié)果表明:地層水和原油中的原生微生物群落能夠被營(yíng)養(yǎng)物糖蜜激活,產(chǎn)生生物表面活性劑、酸、聚合物和氣體。長(zhǎng)江大學(xué)從2000年起與俄羅斯科學(xué)院微生物研究所合作,詳細(xì)研究了大港孔二北油田高溫稠油油藏的本源微生物驅(qū)油機(jī)理,并進(jìn)行了4年的先導(dǎo)性試驗(yàn),目前增產(chǎn)原油1 萬多噸[24 ] 。篩選出的菌注入地層后應(yīng)成為優(yōu)勢(shì)菌,而不能受到地層本源菌的抑制。近年來一些學(xué)者對(duì)油藏中微生物生態(tài)系統(tǒng)進(jìn)行了研究。采集地層水和巖心樣,然后分離其中的微生物。3. 2 　利用分子生物技術(shù)研究油藏中未培養(yǎng)微生物群落一直以來許多科學(xué)工作者都在從事微生物提高原油采收率的研究,但這些研究都是集中在特殊生理菌群如硫酸鹽還原菌、產(chǎn)甲烷菌等可培養(yǎng)微生物上,研究表明可培養(yǎng)微生物僅占自然界微生物的0. 1 %～15 %左右,石油儲(chǔ)層中也存在很多還沒有檢測(cè)到的微生物。摘要: 采用細(xì)菌通用引物和古細(xì)菌引物對(duì)青海油砂山油田178井本源微生物樣品DNA進(jìn)行擴(kuò)增, 構(gòu)建基因文庫(kù), 克隆和DNA序列分析。(2) 試劑和儀器酵母膏(Yeast Extract) 、蛋白胨( Typ tone) 、瓊脂糖2Agrose ) 、DNA 聚合酶和10 Buffer (博采公司) 、V2gene DNA 純化試劑盒、PEMG2T easy vector連接試劑盒( Promaga) 。將PCR產(chǎn)物濃縮后瓊脂糖凝膠( 1% ) 電泳割膠回收, 用V2gene DNA 凝膠回收試劑盒進(jìn)行純化。土壤中以輕烴氣體作為其唯一碳源和能源的專性微生物在油藏正上方的地表土壤中非常發(fā)育并形成微生物異常。土壤中以輕烴氣體作為其唯一碳源和能源的專性微生物在油藏正上方的地表土壤中非常發(fā)育并形成微生物異常。甲醛可以被同化產(chǎn)生生物質(zhì)或被氧化成CO2 并產(chǎn)生能量。1　試驗(yàn)方法1) 樣品采集　試驗(yàn)所用土樣取自松滋油田, 采樣按無菌操作要求進(jìn)行, 采樣深度分別為014m和115m。還發(fā)現(xiàn)有2個(gè)樣品的血清瓶壁上有黏液狀物質(zhì), 液面有紗衣狀白色薄膜, 底部土樣沉淀上方有白色衣帶狀薄層。有3種形態(tài)的菌落, 一種為白色圓形或點(diǎn)狀。盡管低的濕度使得土樣對(duì)甲烷的通透性較好, 甲烷能與更多的MOB相接觸, 但由于缺乏足夠的溶劑水來運(yùn)輸細(xì)胞生長(zhǎng)所需的無機(jī)鹽營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)由此而造成對(duì)甲烷的吸收效率相當(dāng)?shù)?。石油微生物資料(非石油學(xué)院)[ 摘要] 針對(duì)未經(jīng)預(yù)處理的鉆井廢水中的石油污染物, 通過馴化、紫外線誘變、再馴化的方法從油庫(kù)污染土壤中篩選出一株可高效降解鉆井廢水中石油烴的微生物誘變菌株YY 12, 經(jīng)鑒定為酵母菌屬的Candida Boidinii。因此, 經(jīng)濟(jì)方便、無需大型設(shè)備、處理效果明顯、無二次污染的微生物處理方法成為最適宜該類廢水的處理方法, 它也是目前研究的重點(diǎn)〔5, 6 〕。%的瓊脂。加快國(guó)內(nèi)微生物采油技術(shù)的發(fā)展，符合我國(guó)石油工業(yè)發(fā)展的需要，有利于實(shí)現(xiàn)“穩(wěn)定東部、發(fā)展西部”的戰(zhàn)略決策。結(jié)果顯示，%， 個(gè)百分點(diǎn)（%）。分子生物學(xué)工具、可視化技術(shù)及有關(guān)理論等推動(dòng)了微生物采油技術(shù)的機(jī)理研究、模型應(yīng)用及礦場(chǎng)試驗(yàn)，而遺傳工程的運(yùn)用，為微生物采油技術(shù)提供了菌株資源。聯(lián)系電話: (010) 69213368, E mail: yangpeng200488163. ＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄＄摘要:微生物采油經(jīng)過70 多年發(fā)展,已成為繼熱驅(qū)、化學(xué)驅(qū)、氣驅(qū)之后的第四種提高采收率的方法,其提高采收率方式有地面法和地下法兩種,特點(diǎn)是成本低、效果好、無污染。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,應(yīng)用微生物驅(qū)替滲透率低于18. 8 10 3μm2的巖心,提高的采收率低于4. 22%。1996年，勝利油田微生物采油研究中心與石油大學(xué)合作，進(jìn)行了微生物驅(qū)油微觀模擬實(shí)驗(yàn)，除觀察到微生物大量產(chǎn)氣外，還觀察到微生物作用后的殘余油乳化現(xiàn)象、潤(rùn)濕反轉(zhuǎn)和油膜在油氣界面的滑移等。本源微生物采油技術(shù)的室內(nèi)研究和礦場(chǎng)應(yīng)用，首屬俄羅斯。同時(shí)，隨著科技的發(fā)展，一些先進(jìn)的微生物學(xué)研究工具已經(jīng)進(jìn)入微生物采油技術(shù)的研究領(lǐng)域，如分子生物學(xué)、示蹤劑及可視化技術(shù)等已經(jīng)成為微生物采油機(jī)理研究的重要工具。YPD 培養(yǎng)基( 酵母培養(yǎng)基) : 蛋白胨10 g, g, 葡萄糖20 g, 蒸餾水1 L, pH 。而石油類污染物是鉆井廢水中的主要污染源之一。處于芽孢態(tài)菌體。 ②白色菌落, 培養(yǎng)基內(nèi)部呈圓點(diǎn)狀, 露于空氣中類似于霉菌, 有纖維狀菌絲體, 中間有隔膜微球菌, 二連球菌, 鏈球菌, 低倍鏡下呈短桿狀, 鏈桿狀。2) 液體10倍稀釋法分離培養(yǎng)物形態(tài)觀察　將經(jīng)過選擇性培養(yǎng)的土樣制備為懸液進(jìn)行液體10倍稀釋法分離培養(yǎng)時(shí), 生長(zhǎng)不是很明顯。4) MOR活性測(cè)定　稱取20g土樣加入到干熱滅菌處理的血清瓶中, 蓋上軟塞并向其中注入5ml甲烷, 蓋上外蓋于30℃恒溫培養(yǎng)。利用這一差別可以檢測(cè)土壤中輕烴的豐度。進(jìn)行選擇性培養(yǎng)可以將甲烷氧化菌(MOB) 從其他細(xì)菌中分離出來。采集014m和115m深度油田地表土壤樣品, 探討了不同的甲烷氧化菌分離方法。因此, 克隆菌株CY3 種名可以確定,而株菌CYCYCYGCYG2可確定屬名, 但克隆菌株CYGCYGCYG5可能為屬于數(shù)據(jù)庫(kù)中尚未收錄的新種。DNA提取物用標(biāo)準(zhǔn)的酚2氯仿方法進(jìn)行純化。1990年, Giovannoni等[ 1 ]首先用這一方法分析馬尾藻海上浮游微生物的多樣性, 因?yàn)檫@一方法不需要得到環(huán)境中微生物的純培養(yǎng), 突破了用傳統(tǒng)微生物分離純化的方法調(diào)查環(huán)境中微生物多樣性時(shí)很多微生物無法得到純培養(yǎng)的限制, 因此這一方法目前已經(jīng)被廣泛運(yùn)用于土壤、海洋、湖泊、腸道等多種生態(tài)系統(tǒng)中微生物多樣性的調(diào)查, 并且揭示前所未知的環(huán)境中微生物的多樣性。佘躍惠等[29 ,30 ] 通過PCR DGGE 分子技術(shù)對(duì)新疆克拉瑪依油田地層水樣品進(jìn)行分析,揭示了該油藏中的微生物群落結(jié)構(gòu)。Jean2thon C , et al . [28 ] 從法國(guó)東巴黎盆地油藏中分離到一株嗜熱、嚴(yán)格厭氧的微生物。通用文庫(kù)系列分析表明克隆的大部分與從相似環(huán)境中分離得到的已知真細(xì)菌和古細(xì)菌高度類似。微生物采油的現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)在國(guó)內(nèi)外油田已取得明顯效果。所選微生物必須適應(yīng)油藏地礦物巖性,油藏溫度,地層壓力,地層流體性質(zhì),包括原油性質(zhì)和地層水性質(zhì),如礦化度、pH值等。俄羅斯從20 世紀(jì)60 年代就開始從事微生物采油技術(shù)的研究,并且進(jìn)行了大量的現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn),尤其是近20 年發(fā)展起來的本源微生物驅(qū)油技術(shù),己在現(xiàn)場(chǎng)見到了非常好的效果。該公司于1993 年在俄克拉荷馬州North Burbank 油田進(jìn)行了礦場(chǎng)試驗(yàn),目的是通過激活本源微生物的生長(zhǎng)而封堵高滲透層。在油藏中除上述微生物外,還有鐵細(xì)菌、硫細(xì)菌、反消化細(xì)菌、產(chǎn)乙酸鹽菌等。在嗜溫和嗜熱油田水中,可以利用乙酸鹽富集培養(yǎng)產(chǎn)甲烷菌。一般認(rèn)為高溫高鹽環(huán)境使得微生物群落急劇減少。生長(zhǎng)溫度達(dá)82 ℃,形態(tài)為桿狀,利用H2 ,甲酸鹽,乳酸鹽和丙酸鹽作為硫酸鹽還原反應(yīng)的電子供體。從Western Siberia 油樣中分離到Desulfotomaculum nigrificans 的亞種( D. nigrificans subsp. salinus) [13 ] 。這三種菌是不完全氧化菌,使用氫氣、乳酸鹽和丙酮酸鹽作為底物。在油田污水回注系統(tǒng)和油層缺氧環(huán)境中廣泛存在。許多作者從油田中分離到棲熱袍菌屬(Thermotoga) 微生物[8 ,9 ] 。此外還在該油田分離到低嗜鹽弧菌( Dethiosulfovibrio pep2tidovorans) 。菌株桿狀、運(yùn)動(dòng),內(nèi)生芽孢,嚴(yán)格好氧,生長(zhǎng)溫度為40～70 ℃。由于油藏的環(huán)境極其多樣,這些微生物的種類也非常多樣,研究油藏中的微生物群落對(duì)于獲得微生物功能基因和開發(fā)新的生物制品有重要意義。油藏在開發(fā)之前為封閉系統(tǒng)，油藏為一高度還原環(huán)境，主要存在厭氧微生物；在開發(fā)之后的注水階段變?yōu)殚_放系統(tǒng),注入的水將溶解氧和生活在地表的微生物不斷地帶入地層。該文介紹了與微生物采油關(guān)系緊密的微生物群落的生理生化特征及其多樣性。因此K為了使我國(guó)微生物采油研究和應(yīng)用步入?yún)f(xié)調(diào)發(fā)展軌道，采油機(jī)理研究亟待加強(qiáng)。周玲革,向廷生,佘躍惠,青海油田微生物采油技術(shù)研究,生物技術(shù),2004,14(6):5859摘　要　本研究對(duì)遼河、江漢油水樣中分離的4 株微生物K在青海七個(gè)泉油田中19 井微生物增油的機(jī)理進(jìn)行了詳細(xì)的研究和分析L 結(jié)果發(fā)現(xiàn)4 種微生物能不同程度降解原油長(zhǎng)鏈烷烴和芳烴且混合菌較單一菌效果好K同時(shí)生成大量具有降粘能力的短鏈有機(jī)酸、醇和生物氣等物質(zhì)L 模擬試驗(yàn)表明K4 種微生物及混合菌種均能不同程度地提高原油采收率。另外還依據(jù)GB510 77 方法及文獻(xiàn)[5 ]中的方法對(duì)原油的凝點(diǎn)和蠟含量進(jìn)行了測(cè)量。向廷生, 萬家云, 蔡春芳,硫酸鹽還原菌對(duì)原油的降解作用和硫化氫的生成,天然氣地球科學(xué),2004,15(2):171173摘要:從青海油田地層水中分離培養(yǎng)出4株微生物菌種,對(duì)其進(jìn)行了耐溫性、耐鹽性等進(jìn)行了探討,分析了微生物處理前后原油組份及物性變化情況,并采用巖芯流動(dòng)試驗(yàn)探討了微生物的驅(qū)油效果。在中溫和極端嗜熱培養(yǎng)物中, 觀察到了硫酸鹽還原菌可利用原油作為自己唯一的底物。然而, 近年來的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn), SRB 能直接利用原油作為其唯一的碳源和能源[ 3 ]。在塔里木盆地一些油氣藏的地層水中檢測(cè)到的硫酸鹽還原菌的含量高達(dá)104個(gè)/ml. 支持了這些油氣藏中的H2S 為生物成因的觀點(diǎn)。根據(jù)微生物識(shí)別出的石油異常分布可劃分出3 個(gè)明顯的含油前景區(qū),試驗(yàn)區(qū)僅2 口探井,相對(duì)于現(xiàn)有的2 口井而言,微生物油氣勘探的符合率為100 % ,其效果是理想的。 基因文庫(kù)。研究這類微生物的多樣性、生態(tài)環(huán)境、基因構(gòu)成、代謝特性、地球化學(xué)過程與產(chǎn)物, 利用土壤中烴氧化菌異常預(yù)測(cè)下伏油氣藏, 通過人工激活本源微生物的地球化學(xué)活性實(shí)現(xiàn)井間驅(qū)替來提高石油采收率等與地質(zhì)環(huán)境下微生物地球化學(xué)作用緊密相關(guān)的生物技術(shù)稱之為地質(zhì)微生物技術(shù)(Geob io techno logy)。M PO G 和M EOR 技術(shù)的應(yīng)用實(shí)踐表明, 加強(qiáng)基礎(chǔ)理論研究, 培養(yǎng)和造就一批擁有微生物學(xué)、生物化學(xué)、地球化學(xué)、石油地質(zhì)學(xué)和石油工程學(xué)等多學(xué)科理論和技術(shù)的專門人才或者實(shí)現(xiàn)了這些相關(guān)學(xué)科人才的有效結(jié)合, 發(fā)展中國(guó)自己的成套地質(zhì)生物技術(shù), 必將對(duì)大幅度提高我國(guó)油氣勘探成功率和采收率產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。初步篩選出適合本源菌驅(qū)油條件的3 個(gè)區(qū)塊,優(yōu)選出具有一定試驗(yàn)規(guī)模、油層相對(duì)單一、儲(chǔ)層條件較好的孔二北斷塊為先導(dǎo)試驗(yàn)區(qū)。20 世紀(jì)50 年代,俄羅斯科學(xué)院微生物研究所以地質(zhì)微生物學(xué)為基礎(chǔ),利用長(zhǎng)期注水開發(fā)油田中帶入地層的細(xì)菌,率先開展本源微生物提高石油采收率的研究工作。通過本源菌作用原油前后的紅外光譜結(jié)果分析,原油中芳烴結(jié)構(gòu)變化明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)論：1) 實(shí)驗(yàn)所用的菌種的溫度范圍為40～ 60 ℃, 在70 ℃也能較好生長(zhǎng)。然而由于地層條件常常限制微生物的生存, 因此, 在進(jìn)入現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用之前, 必須充分研究油油的物理化學(xué)性質(zhì)對(duì)微生物的生存、繁殖和代謝活動(dòng)的影響。結(jié)果表明, 所優(yōu)選的4 種細(xì)菌在70 ℃都能較好生長(zhǎng)。 ②白色菌落, 培養(yǎng)基內(nèi)部呈圓點(diǎn)狀, 露于空氣中類似于霉菌, 有纖維狀菌絲體, 中間有隔膜微球菌, 二連球菌, 鏈球菌, 低倍鏡下呈短桿狀, 鏈桿狀。下面研究油田地表土壤甲烷氧化菌的分離鑒定及活性測(cè)定。已知微生物首先通過甲烷加氧酶活化甲烷, 在有氧條件下生成甲醇, 進(jìn)一步氧化可生成甲醛。在地層壓力的驅(qū)動(dòng)下, 油氣藏的輕烴氣體持續(xù)地向地表作垂直擴(kuò)散和運(yùn)移。向廷生,周俊初,袁志華, 利用地表甲烷氧