【正文】 菌用)，每瓶內(nèi)裝10粒玻璃珠；分裝試管，(不超過試管高度的1／5)。蓋上試管帽。稀釋完畢后，用原來的移液管從菌液濃度最小的107土壤稀釋液開始吸取1mL稀釋液，按無菌操作技術(shù)加到和應(yīng)編號的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)。振蕩后靜置5min，即成102土壤稀釋液。此法將蘸有混合菌懸液的接種環(huán)在平板表面多方向連續(xù)劃線，使混雜的微生物細(xì)胞在平板表面分散，經(jīng)培養(yǎng)得到分散成由單個微生物細(xì)胞繁殖而成的菌落，從而達(dá)到純化目的。劃線時平板面與接種環(huán)面成30～40176。劃線時每次將平板轉(zhuǎn)動60一70176。同樣依次在1區(qū)劃線。一般由三個稀釋度計算出的每克含菌樣品中的總活菌數(shù)和同一稀釋度出現(xiàn)的 總活菌數(shù)均應(yīng)很接近，不同稀釋度平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)應(yīng)呈規(guī)律性地減少。(斜面接種)在分離細(xì)菌、放線菌，酵母苗和霉菌的不同平板上選擇分離效果較好，認(rèn)為已經(jīng)純化的苗落各挑選一個用接種環(huán)接種斜面。通過本課程的學(xué)習(xí)，應(yīng)對微生物學(xué)有一個全面的了解，系統(tǒng)地掌握微生物學(xué)的基礎(chǔ)理論、基本知識和基本操作技能，掌握微生物學(xué)的基本研究方法和手段，為進(jìn)一步深入學(xué)習(xí)生物技術(shù)專業(yè)課打下良好的基礎(chǔ)。適用專業(yè)和學(xué)時數(shù)本大綱適用于生物技術(shù)和生物科學(xué)專業(yè)本科生。教學(xué)方法與媒體要求本課程的理論課要求采用計算機(jī)多媒體教學(xué)手段輔助教學(xué)。第三節(jié) 微生物在生物分類中的地位生物分類的發(fā)展，目前生物分類的進(jìn)展，微生物在生物分類中的地位。第一節(jié) 免疫學(xué)的概念細(xì)菌細(xì)胞的基本形態(tài)、細(xì)胞的大小和排列方式。教學(xué)重點：真菌的特殊形態(tài)、真菌的繁殖和孢子類型。基本概念：病毒、病毒粒子、溫和噬菌體、類病毒、朊病毒。亞病毒與人類的關(guān)系。第四節(jié) 培養(yǎng)基培養(yǎng)基的概念；培養(yǎng)基的配制過程；培養(yǎng)基的種類；配制培養(yǎng)基的原則。第七章 微生物的生長（5學(xué)時）基本內(nèi)容：微生物的生長及其測定、生長曲線、環(huán)境條件對微生物生長的影響?；靖拍睿夯蛲蛔?、轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)化、接合。第九章 微生物生態(tài)（5學(xué)時）基本內(nèi)容：微生物在自然界的分布、微生物之間的相互作用關(guān)系、微生物在自然界物質(zhì)循環(huán)中的作用。第十章 免疫血清學(xué)（6學(xué)時）基本內(nèi)容：傳染與傳染病、影響傳染的因素、非特異性免疫、特異性免疫。第三節(jié) 特異性免疫免疫器官、免疫細(xì)胞及其作用和。第三節(jié) 微生物與動物和植物的相互關(guān)系微生物與動物的互生、共生和寄生關(guān)系；微生物與植物的互生、共生和寄生關(guān)系。第四節(jié) 基因工程基因工程的基本操作、基因工程的應(yīng)用和發(fā)展前景。第三節(jié) 環(huán)境條件對微生物生長的影響溫度、氧氣、PH值、水份、滲透壓、輻射線和化學(xué)藥物對微生物生長的影響；高溫滅菌的原理及方法；消毒和滅菌的概念。第三節(jié) 微生物的特殊合成代謝生物固氮作用的機(jī)制；肽聚糖大分子的合成。第二節(jié) 微生物的營養(yǎng)類型微生物的四大營養(yǎng)類型——光能自養(yǎng)型微生物、光能異養(yǎng)型微生物、化能自養(yǎng)型微生物和化能異養(yǎng)型微生物的概念，各類型微生物的生理特點。第四節(jié) 愛滋病毒愛滋病毒的發(fā)現(xiàn)、愛滋病的發(fā)病特點，愛滋病毒對人類的危害。第四節(jié) 真菌的代表類群真菌各代表類群的形態(tài)結(jié)構(gòu)，繁殖特點，生活史和生活環(huán)境，常見真菌在實際中的應(yīng)用或?qū)θ祟愒斐傻奈：?。第三?真核微生物（5學(xué)時）基本內(nèi)容：真菌的形態(tài)、結(jié)構(gòu)，真菌無性繁殖和有性繁殖、真菌的代表類群、真菌對于人類的影響和重要性。教學(xué)重點：細(xì)菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，尤其是原核生物特有的結(jié)構(gòu)。第一節(jié) 微生物與微生物學(xué)微生物與微生物學(xué)的基本概念，微生物學(xué)的研究對象，微生物學(xué)的分科和基本任務(wù)。（二）參考書（1）沈萍著《普通微生物學(xué)》，高等教育出版社，2000。（3）掌握微生物的分離、培養(yǎng)技術(shù)。[思考題] ．為什么要將已融化的瓊脂培養(yǎng)基冷卻到45～50℃左右才能傾入到裝有菌液的培養(yǎng)皿內(nèi)? ?劃線時為何不能重疊? ? ，請說明原因。再用接種環(huán)挑取不同菌落制片，在顯微鏡下進(jìn)行個體形態(tài)觀察。故可根據(jù)平板上菌落的數(shù)目．推算出每克含菌樣品中所含的活菌總數(shù)。右手把接種環(huán)上多余苗體燒死，將燒紅的接種環(huán)在子板邊緣冷卻，再按以上方法以1區(qū)劃線的苗體為菌源，由1區(qū)向2區(qū)作第二次早行劃線。培養(yǎng)后在劃線甲板上觀察沿劃線處長出的菌落形態(tài)，涂片鏡檢為純種后再接種斜面。將菌種點種在平板邊緣一處，取出接種，燒去多余菌體。4)培養(yǎng) 接種后，將平板倒置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2～3 d觀察結(jié)果。3)培養(yǎng) 待平板完全冷凝后，將平扳倒置于3537℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24～48h觀察結(jié)果。待滅菌后，再洗刷或?qū)⒂眠^的移液管放在廢棄物筒中．用3%5%來蘇爾浸泡l h后再滅菌洗滌。左手持錐形瓶底，以右手掌及小指、無名指夾住錐形瓶上棉塞，在火焰旁拔出棉塞(棉塞夾在于上，不能亂放在桌上)，將lmL移液管的吸液端伸進(jìn)振蕩混勻的錐形瓶土壤懸液底部，用手指輕按橡皮頭，在錐形瓶內(nèi)反復(fù)吹吸二次(吹吸時注意第二次液面要高于第一次吹吸 的液面)，右手將棉塞插回錐形瓶上，左手放下錐形瓶，依前法在火焰旁拔除試管帽(或棉塞)，制成l03的土壤稀 釋液，將此移液管通過火焰再插入原來包裝移液管的下段紙?zhí)變?nèi)，以備再用。從面曲中分離酵母菌。而細(xì)菌生長適宜的酸堿度為pH7，所以分離酵母菌時只要選擇好適宜的培養(yǎng)基和pH，可降低細(xì)菌增殖率，霉菌生長慢，也不干擾酵母菌分離。[基本原理]土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發(fā)現(xiàn)有重要應(yīng)用潛力的微生物的主要菌源。糖發(fā)酵試驗甲基紅試驗接種后37℃分別培養(yǎng)24h、48h、48h，觀察實驗結(jié)果，將實驗結(jié)果填入表中。有些細(xì)菌能發(fā)酵葡萄糖，而不能分解乳糖；有些細(xì)菌能分解某種糖產(chǎn)生有機(jī)酸和氣體；有的細(xì)菌則只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣?！矊嶒炗懻摗惩寥乐械木鷶?shù)量在哪個數(shù)量級？你分離的微生物主要有哪些種類？為什么？105數(shù)量級，主要是細(xì)菌，也有酵母。〔材料與用品〕土樣10g，無菌平皿（20套）及無菌水，牛肉膏蛋白胨平板（2只）；取液器（）；無菌有帽試管，三角瓶，無菌涂棒，接種環(huán)，記號筆，酒精燈，火柴，試管架 〔方法步驟〕周圍環(huán)境中微生物的檢測平板分4個區(qū)做好標(biāo)記用未洗的手指及肥皂洗過的手指（1次、2次、3次，或其它）分別在四個區(qū)上涂抹倒置到37℃培養(yǎng)24小時觀察結(jié)果?！膊牧嫌镁摺称【平湍?；顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺；血球計數(shù)板；蓋玻片，載玻片，滴管，試管，無菌水，〔方法步驟〕(一)酵母細(xì)胞大小測定(1)目鏡測微尺的校正(2)細(xì)胞大小的測定(二)顯微計數(shù)法(1)鏡檢計數(shù)室(2)菌懸液制備及加樣(3)計數(shù)(4)清洗計數(shù)板〔結(jié)果分析〕結(jié)果記錄入表中。（如右圖）菌名：青霉（Penicillium）菌名：毛霉（Circinella）放大倍數(shù)：100179。什么是天然培養(yǎng)基？什么是半合成、合成培養(yǎng)基？實驗四 酵母菌霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察及酵母死活細(xì)胞的鑒別〔目的要求〕觀察并掌握酵母菌霉菌的菌落特征、個體形態(tài)、生長及繁殖方式。(四)棉塞的制作及試管、錐形瓶的包扎 分別制作試管及錐形瓶棉塞并塞好好以牛皮紙包裝頭部。了解半合成培養(yǎng)基的配制原理，學(xué)習(xí)掌握肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基的配制方法。5）染色反應(yīng)：紅色（陰性）染色反應(yīng)：紫色（陽性）菌名：枯草芽孢桿菌放大倍數(shù)：100179。5）特殊結(jié)構(gòu)：無 特殊結(jié)構(gòu)：無視野觀察下微生物的形態(tài)油鏡使用時為什么必須干燥裝片？防止水油分層，光受到折射而影響油鏡性能的發(fā)揮〔實驗討論〕首次實驗中有幾個要點：一是按無菌操作取用菌；二是涂片技術(shù)的掌握；三是油鏡使用技術(shù)。，可以通過真運動能定向地由一處快速運動來區(qū)別于顆粒的布朗運動。再往下游的有機(jī)物減少，復(fù)氧速率大于耗氧速率，氧垂1曲線上升。91)基因工程：基因工程是指在基因水平上的遺傳工程，又叫基因剪接或核酸體外重組。86)基因重組：兩個不同形狀個體細(xì)胞的DNA融合，使基因重新組合，從而發(fā)生遺傳變異，產(chǎn)生新品種，此過程稱為基因重組。79)遺傳有保守性，是微生物在它的系統(tǒng)發(fā)育過程中形成的系統(tǒng)。分非特異性偏害和特異性偏害。不同種間關(guān)系有6種，競爭關(guān)系，原始合作關(guān)系，共生關(guān)系，偏害關(guān)系，捕食關(guān)系，寄生關(guān)系。正常情況下，同化作用大于異化作用，微生物的細(xì)胞質(zhì)量不斷迅速增長，稱為生長。不消耗能量。54)培養(yǎng)基配制的原則：1不同微生物，不同培養(yǎng)基2各種營養(yǎng)物的濃度及配比3調(diào)PH值4考慮加生長因子5培養(yǎng)基物美價廉55)培養(yǎng)基的種類：按培養(yǎng)基組成物的性質(zhì)分類：合成培養(yǎng)基，天然培養(yǎng)基（天然有機(jī)物配制而成的培養(yǎng)基），復(fù)合培養(yǎng)基。41）酶的分類：化學(xué)組分；單成分酶（只含有蛋白質(zhì)）和全酶（蛋白質(zhì)及輔基或輔酶的熱穩(wěn)定的非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物或金屬離子，全酶要在酶蛋白和輔酶同時存在起作用）42）全酶的分類：1酶蛋白+非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物2酶蛋白+非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物+金屬離子3酶蛋白+金屬離子43）酶的分類：六類，氧化還原酶，轉(zhuǎn)移酶，水解酶類，裂解酶類，異構(gòu)酶類和合成（連接）酶類。35）酵母菌：酵母菌是單細(xì)胞真菌。第三章27）原生動物：原生動物是動物中最原始，最低等，結(jié)構(gòu)最簡單的單細(xì)胞動物。5，用番紅溶液復(fù)染1MIN，革蘭氏陽性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現(xiàn)紅色。4，細(xì)胞質(zhì)膜上含有酶，進(jìn)行物質(zhì)代謝和能量代謝5，細(xì)胞質(zhì)膜上有鞭毛基粒，鞭毛由此長出，為鞭毛提供附著點。14）細(xì)菌的結(jié)構(gòu)：細(xì)菌為單細(xì)胞結(jié)構(gòu)，所有的細(xì)菌均有如下結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁，細(xì)胞質(zhì)膜，細(xì)胞質(zhì)及其內(nèi)含物，擬核。10）噬菌體的溶原性：毒性噬菌體，侵入宿主細(xì)胞后，隨即引起宿主細(xì)胞裂解的噬菌體。第一章4）病毒：病毒是沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，專性寄生在活的敏感宿主體內(nèi)的超微小生物。測定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。圖15—5 帶側(cè)臂試管的三角燒瓶(三)器材1．菌種 大腸桿菌2．培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對數(shù)或生長速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱為該細(xì)菌的生長曲線。2．樣品測定將待測樣品用無菌生理鹽水適當(dāng)稀釋，搖均勻后，用560nm波長、lcm比色皿測定光密度。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過最大吸收波長以及穩(wěn)定性試驗來確定。在一定的范圍內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測出(圖154)。一般以三個連續(xù)稀釋度中的第二個稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。圖15—3平板菌落計數(shù)操作步驟4．倒平板．盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或濺到平皿蓋上。另取一支lml吸管插入10?1試管中來回吹吸菌懸液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。2．培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。二平板菌落計數(shù)法（一）目的要求學(xué)習(xí)習(xí)近平板菌落計數(shù)的基本原理和方法。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時，即作為兩個菌體計數(shù)。3．加樣品將清潔干燥的血細(xì)胞計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細(xì)滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動進(jìn)入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液。每一個大方格邊長為lmm，則每一個大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，(萬分之一毫升)。但此法的缺點是所測得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。本實驗主要介紹生產(chǎn)、科研工作中比較常用的顯微鏡直接計數(shù)法、平板菌落計數(shù)法和光電比濁計數(shù)法。第一篇：微生物學(xué)單元測試微生物學(xué)檢驗16~121~31章單元測試題一、填空（42分）1．2．螺旋體是一類細(xì)長、柔軟、彎曲呈螺旋狀、運動活潑的型微生物，常用的染色方法是?？傊?，測定微生物生長量的方法很多，各有優(yōu)缺點，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。顯微鏡直接計數(shù)法的優(yōu)點是直觀、快速、操作簡單。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(圖15—2)；另一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格，但無論是哪一種規(guī)格的計數(shù)板，每一個大方格中的小方格都是400個。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計數(shù)。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml12345第一室第二室2．思考題(1)根據(jù)你的體會，說明用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應(yīng)如何盡量減少誤差．力求準(zhǔn)確?(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請設(shè)計1～2種可行的檢測方法。（三）器材1．菌種 大腸桿菌菌懸液。OptionsEmail Replies將101試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。，這樣容易加大同一稀釋度幾個重復(fù)平板間的操作誤差。平板菌落計數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。二、基本原理當(dāng)光線通過微生物菌懸液時，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。因此，對于不同微生物的菌懸液進(jìn)行光電比濁計數(shù)應(yīng)采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。比色測定時，用無菌生理鹽水作空白對照，并將OD值填入下表管號12345678細(xì)胞數(shù)106/ml光密度（OD）每管菌懸液在測定OD值時均必須先搖勻后再倒入比色皿中測定(4)以光密度(OD)值為縱坐標(biāo)，以每毫升細(xì)胞數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延遲期，對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/。本操作步驟也可用簡便的方法代替：1．~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調(diào)零點，測定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。2）微生物的特點：1個體極小2分布廣種類繁多3繁殖快4易變異 3）原核微生物與真核微生物區(qū)別：真核微生物有發(fā)育完好的細(xì)胞核，原核微生物只有擬核。9）病毒的繁殖過程：1吸附2侵入3復(fù)制與聚集4宿主細(xì)胞裂解和成熟噬菌體粒子的釋放