【正文】 菌用)，每瓶內(nèi)裝10粒玻璃珠；分裝試管，(不超過試管高度的1／5)。蓋上試管帽。稀釋完畢后，用原來的移液管從菌液濃度最小的107土壤稀釋液開始吸取1mL稀釋液，按無菌操作技術(shù)加到和應編號的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)。振蕩后靜置5min，即成102土壤稀釋液。此法將蘸有混合菌懸液的接種環(huán)在平板表面多方向連續(xù)劃線，使混雜的微生物細胞在平板表面分散，經(jīng)培養(yǎng)得到分散成由單個微生物細胞繁殖而成的菌落，從而達到純化目的。劃線時平板面與接種環(huán)面成30～40176。劃線時每次將平板轉(zhuǎn)動60一70176。同樣依次在1區(qū)劃線。一般由三個稀釋度計算出的每克含菌樣品中的總活菌數(shù)和同一稀釋度出現(xiàn)的 總活菌數(shù)均應很接近，不同稀釋度平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)應呈規(guī)律性地減少。(斜面接種)在分離細菌、放線菌，酵母苗和霉菌的不同平板上選擇分離效果較好，認為已經(jīng)純化的苗落各挑選一個用接種環(huán)接種斜面。通過本課程的學習，應對微生物學有一個全面的了解，系統(tǒng)地掌握微生物學的基礎理論、基本知識和基本操作技能，掌握微生物學的基本研究方法和手段，為進一步深入學習生物技術(shù)專業(yè)課打下良好的基礎。適用專業(yè)和學時數(shù)本大綱適用于生物技術(shù)和生物科學專業(yè)本科生。教學方法與媒體要求本課程的理論課要求采用計算機多媒體教學手段輔助教學。第三節(jié) 微生物在生物分類中的地位生物分類的發(fā)展，目前生物分類的進展，微生物在生物分類中的地位。第一節(jié) 免疫學的概念細菌細胞的基本形態(tài)、細胞的大小和排列方式。教學重點：真菌的特殊形態(tài)、真菌的繁殖和孢子類型?；靖拍睿翰《尽⒉《玖Ｗ?、溫和噬菌體、類病毒、朊病毒。亞病毒與人類的關(guān)系。第四節(jié) 培養(yǎng)基培養(yǎng)基的概念；培養(yǎng)基的配制過程；培養(yǎng)基的種類；配制培養(yǎng)基的原則。第七章 微生物的生長（5學時）基本內(nèi)容：微生物的生長及其測定、生長曲線、環(huán)境條件對微生物生長的影響?；靖拍睿夯蛲蛔?、轉(zhuǎn)導、轉(zhuǎn)化、接合。第九章 微生物生態(tài)（5學時）基本內(nèi)容：微生物在自然界的分布、微生物之間的相互作用關(guān)系、微生物在自然界物質(zhì)循環(huán)中的作用。第十章 免疫血清學（6學時）基本內(nèi)容：傳染與傳染病、影響傳染的因素、非特異性免疫、特異性免疫。第三節(jié) 特異性免疫免疫器官、免疫細胞及其作用和。第三節(jié) 微生物與動物和植物的相互關(guān)系微生物與動物的互生、共生和寄生關(guān)系；微生物與植物的互生、共生和寄生關(guān)系。第四節(jié) 基因工程基因工程的基本操作、基因工程的應用和發(fā)展前景。第三節(jié) 環(huán)境條件對微生物生長的影響溫度、氧氣、PH值、水份、滲透壓、輻射線和化學藥物對微生物生長的影響；高溫滅菌的原理及方法；消毒和滅菌的概念。第三節(jié) 微生物的特殊合成代謝生物固氮作用的機制；肽聚糖大分子的合成。第二節(jié) 微生物的營養(yǎng)類型微生物的四大營養(yǎng)類型——光能自養(yǎng)型微生物、光能異養(yǎng)型微生物、化能自養(yǎng)型微生物和化能異養(yǎng)型微生物的概念，各類型微生物的生理特點。第四節(jié) 愛滋病毒愛滋病毒的發(fā)現(xiàn)、愛滋病的發(fā)病特點，愛滋病毒對人類的危害。第四節(jié) 真菌的代表類群真菌各代表類群的形態(tài)結(jié)構(gòu)，繁殖特點，生活史和生活環(huán)境，常見真菌在實際中的應用或?qū)θ祟愒斐傻奈：?。第三?真核微生物（5學時）基本內(nèi)容：真菌的形態(tài)、結(jié)構(gòu)，真菌無性繁殖和有性繁殖、真菌的代表類群、真菌對于人類的影響和重要性。教學重點：細菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，尤其是原核生物特有的結(jié)構(gòu)。第一節(jié) 微生物與微生物學微生物與微生物學的基本概念，微生物學的研究對象，微生物學的分科和基本任務。（二）參考書（1）沈萍著《普通微生物學》，高等教育出版社，2000。（3）掌握微生物的分離、培養(yǎng)技術(shù)。[思考題] ．為什么要將已融化的瓊脂培養(yǎng)基冷卻到45～50℃左右才能傾入到裝有菌液的培養(yǎng)皿內(nèi)? ?劃線時為何不能重疊? ? ，請說明原因。再用接種環(huán)挑取不同菌落制片，在顯微鏡下進行個體形態(tài)觀察。故可根據(jù)平板上菌落的數(shù)目．推算出每克含菌樣品中所含的活菌總數(shù)。右手把接種環(huán)上多余苗體燒死，將燒紅的接種環(huán)在子板邊緣冷卻，再按以上方法以1區(qū)劃線的苗體為菌源，由1區(qū)向2區(qū)作第二次早行劃線。培養(yǎng)后在劃線甲板上觀察沿劃線處長出的菌落形態(tài)，涂片鏡檢為純種后再接種斜面。將菌種點種在平板邊緣一處，取出接種，燒去多余菌體。4)培養(yǎng) 接種后，將平板倒置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2～3 d觀察結(jié)果。3)培養(yǎng) 待平板完全冷凝后，將平扳倒置于3537℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24～48h觀察結(jié)果。待滅菌后，再洗刷或?qū)⒂眠^的移液管放在廢棄物筒中．用3%5%來蘇爾浸泡l h后再滅菌洗滌。左手持錐形瓶底，以右手掌及小指、無名指夾住錐形瓶上棉塞，在火焰旁拔出棉塞(棉塞夾在于上，不能亂放在桌上)，將lmL移液管的吸液端伸進振蕩混勻的錐形瓶土壤懸液底部，用手指輕按橡皮頭，在錐形瓶內(nèi)反復吹吸二次(吹吸時注意第二次液面要高于第一次吹吸 的液面)，右手將棉塞插回錐形瓶上，左手放下錐形瓶，依前法在火焰旁拔除試管帽(或棉塞)，制成l03的土壤稀 釋液，將此移液管通過火焰再插入原來包裝移液管的下段紙?zhí)變?nèi)，以備再用。從面曲中分離酵母菌。而細菌生長適宜的酸堿度為pH7，所以分離酵母菌時只要選擇好適宜的培養(yǎng)基和pH，可降低細菌增殖率，霉菌生長慢，也不干擾酵母菌分離。[基本原理]土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發(fā)現(xiàn)有重要應用潛力的微生物的主要菌源。糖發(fā)酵試驗甲基紅試驗接種后37℃分別培養(yǎng)24h、48h、48h，觀察實驗結(jié)果，將實驗結(jié)果填入表中。有些細菌能發(fā)酵葡萄糖，而不能分解乳糖；有些細菌能分解某種糖產(chǎn)生有機酸和氣體；有的細菌則只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣?！矊嶒炗懻摗惩寥乐械木鷶?shù)量在哪個數(shù)量級？你分離的微生物主要有哪些種類？為什么？105數(shù)量級，主要是細菌，也有酵母。〔材料與用品〕土樣10g，無菌平皿（20套）及無菌水，牛肉膏蛋白胨平板（2只）；取液器（）；無菌有帽試管，三角瓶，無菌涂棒，接種環(huán)，記號筆，酒精燈，火柴，試管架 〔方法步驟〕周圍環(huán)境中微生物的檢測平板分4個區(qū)做好標記用未洗的手指及肥皂洗過的手指（1次、2次、3次，或其它）分別在四個區(qū)上涂抹倒置到37℃培養(yǎng)24小時觀察結(jié)果?！膊牧嫌镁摺称【平湍?；顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺；血球計數(shù)板；蓋玻片，載玻片，滴管，試管，無菌水，〔方法步驟〕(一)酵母細胞大小測定(1)目鏡測微尺的校正(2)細胞大小的測定(二)顯微計數(shù)法(1)鏡檢計數(shù)室(2)菌懸液制備及加樣(3)計數(shù)(4)清洗計數(shù)板〔結(jié)果分析〕結(jié)果記錄入表中。（如右圖）菌名：青霉（Penicillium）菌名：毛霉（Circinella）放大倍數(shù)：100179。什么是天然培養(yǎng)基？什么是半合成、合成培養(yǎng)基？實驗四 酵母菌霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察及酵母死活細胞的鑒別〔目的要求〕觀察并掌握酵母菌霉菌的菌落特征、個體形態(tài)、生長及繁殖方式。(四)棉塞的制作及試管、錐形瓶的包扎 分別制作試管及錐形瓶棉塞并塞好好以牛皮紙包裝頭部。了解半合成培養(yǎng)基的配制原理，學習掌握肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基的配制方法。5）染色反應：紅色（陰性）染色反應：紫色（陽性）菌名：枯草芽孢桿菌放大倍數(shù)：100179。5）特殊結(jié)構(gòu)：無 特殊結(jié)構(gòu)：無視野觀察下微生物的形態(tài)油鏡使用時為什么必須干燥裝片？防止水油分層，光受到折射而影響油鏡性能的發(fā)揮〔實驗討論〕首次實驗中有幾個要點：一是按無菌操作取用菌；二是涂片技術(shù)的掌握；三是油鏡使用技術(shù)。，可以通過真運動能定向地由一處快速運動來區(qū)別于顆粒的布朗運動。再往下游的有機物減少，復氧速率大于耗氧速率，氧垂1曲線上升。91)基因工程：基因工程是指在基因水平上的遺傳工程，又叫基因剪接或核酸體外重組。86)基因重組：兩個不同形狀個體細胞的DNA融合，使基因重新組合，從而發(fā)生遺傳變異，產(chǎn)生新品種，此過程稱為基因重組。79)遺傳有保守性，是微生物在它的系統(tǒng)發(fā)育過程中形成的系統(tǒng)。分非特異性偏害和特異性偏害。不同種間關(guān)系有6種，競爭關(guān)系，原始合作關(guān)系，共生關(guān)系，偏害關(guān)系，捕食關(guān)系，寄生關(guān)系。正常情況下，同化作用大于異化作用，微生物的細胞質(zhì)量不斷迅速增長，稱為生長。不消耗能量。54)培養(yǎng)基配制的原則：1不同微生物，不同培養(yǎng)基2各種營養(yǎng)物的濃度及配比3調(diào)PH值4考慮加生長因子5培養(yǎng)基物美價廉55)培養(yǎng)基的種類：按培養(yǎng)基組成物的性質(zhì)分類：合成培養(yǎng)基，天然培養(yǎng)基（天然有機物配制而成的培養(yǎng)基），復合培養(yǎng)基。41）酶的分類：化學組分；單成分酶（只含有蛋白質(zhì)）和全酶（蛋白質(zhì)及輔基或輔酶的熱穩(wěn)定的非蛋白質(zhì)小分子有機物或金屬離子，全酶要在酶蛋白和輔酶同時存在起作用）42）全酶的分類：1酶蛋白+非蛋白質(zhì)小分子有機物2酶蛋白+非蛋白質(zhì)小分子有機物+金屬離子3酶蛋白+金屬離子43）酶的分類：六類，氧化還原酶，轉(zhuǎn)移酶，水解酶類，裂解酶類，異構(gòu)酶類和合成（連接）酶類。35）酵母菌：酵母菌是單細胞真菌。第三章27）原生動物：原生動物是動物中最原始，最低等，結(jié)構(gòu)最簡單的單細胞動物。5，用番紅溶液復染1MIN，革蘭氏陽性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現(xiàn)紅色。4，細胞質(zhì)膜上含有酶，進行物質(zhì)代謝和能量代謝5，細胞質(zhì)膜上有鞭毛基粒，鞭毛由此長出，為鞭毛提供附著點。14）細菌的結(jié)構(gòu)：細菌為單細胞結(jié)構(gòu)，所有的細菌均有如下結(jié)構(gòu)：細胞壁，細胞質(zhì)膜，細胞質(zhì)及其內(nèi)含物，擬核。10）噬菌體的溶原性：毒性噬菌體，侵入宿主細胞后，隨即引起宿主細胞裂解的噬菌體。第一章4）病毒：病毒是沒有細胞結(jié)構(gòu)，專性寄生在活的敏感宿主體內(nèi)的超微小生物。測定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。圖15—5 帶側(cè)臂試管的三角燒瓶(三)器材1．菌種 大腸桿菌2．培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。以培養(yǎng)時間為橫坐標，以細菌數(shù)目的對數(shù)或生長速率為縱坐標作圖所繪制的曲線稱為該細菌的生長曲線。2．樣品測定將待測樣品用無菌生理鹽水適當稀釋，搖均勻后，用560nm波長、lcm比色皿測定光密度。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過最大吸收波長以及穩(wěn)定性試驗來確定。在一定的范圍內(nèi)，微生物細胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測出(圖154)。一般以三個連續(xù)稀釋度中的第二個稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為好，否則要適當增加或減少稀釋度加以調(diào)整。圖15—3平板菌落計數(shù)操作步驟4．倒平板．盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或濺到平皿蓋上。另取一支lml吸管插入10?1試管中來回吹吸菌懸液三次，進一步將菌體分散、混勻。2．培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。二平板菌落計數(shù)法（一）目的要求學習習近平板菌落計數(shù)的基本原理和方法。如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，即作為兩個菌體計數(shù)。3．加樣品將清潔干燥的血細胞計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液。每一個大方格邊長為lmm，則每一個大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，(萬分之一毫升)。但此法的缺點是所測得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。本實驗主要介紹生產(chǎn)、科研工作中比較常用的顯微鏡直接計數(shù)法、平板菌落計數(shù)法和光電比濁計數(shù)法。第一篇：微生物學單元測試微生物學檢驗16~121~31章單元測試題一、填空（42分）1．2．螺旋體是一類細長、柔軟、彎曲呈螺旋狀、運動活潑的型微生物，常用的染色方法是。總之，測定微生物生長量的方法很多，各有優(yōu)缺點，工作中應根據(jù)具體情況要求加以選擇。顯微鏡直接計數(shù)法的優(yōu)點是直觀、快速、操作簡單。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(圖15—2)；另一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格，但無論是哪一種規(guī)格的計數(shù)板，每一個大方格中的小方格都是400個。若有污物，則需清洗，吹干后才能進行計數(shù)。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml12345第一室第二室2．思考題(1)根據(jù)你的體會，說明用血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應如何盡量減少誤差．力求準確?(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請設計1～2種可行的檢測方法。（三）器材1．菌種 大腸桿菌菌懸液。OptionsEmail Replies將101試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。，這樣容易加大同一稀釋度幾個重復平板間的操作誤差。平板菌落計數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。二、基本原理當光線通過微生物菌懸液時，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。因此，對于不同微生物的菌懸液進行光電比濁計數(shù)應采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標準曲線。比色測定時，用無菌生理鹽水作空白對照，并將OD值填入下表管號12345678細胞數(shù)106/ml光密度（OD）每管菌懸液在測定OD值時均必須先搖勻后再倒入比色皿中測定(4)以光密度(OD)值為縱坐標，以每毫升細胞數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線。將一定量的細菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細胞要經(jīng)歷延遲期，對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/。本操作步驟也可用簡便的方法代替：1．~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調(diào)零點，測定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。2）微生物的特點：1個體極小2分布廣種類繁多3繁殖快4易變異 3）原核微生物與真核微生物區(qū)別：真核微生物有發(fā)育完好的細胞核，原核微生物只有擬核。9）病毒的繁殖過程：1吸附2侵入3復制與聚集4宿主細胞裂解和成熟噬菌體粒子的釋放