【正文】 定24. 保健食品中總黃酮的測定25. 殼聚糖的游離氨基測定及脫乙酰度的計算26. 蚓激酶活性的測定27. 紅曲產(chǎn)品中桔青霉素的測定（四）保健食品分析方法的建立和析方法學(xué)驗證機誤差的綜合指標(biāo)。通常工作曲線的斜率（k）用于度量靈敏度。定量限（limitofquantitation,LOQ）1. 定量下限：u在限定誤差能滿足要求的前提下，用特定分析方法能準(zhǔn)確地定量測定待測物質(zhì)的最小濃度或量。檢測上限定量上限斜率K=靈敏度定量下限檢測限最佳測定范圍方法適用范圍選擇性和專屬性的測定方法組成的。超聲波清洗器。 進樣量：10～20181。精密加入稀乙醇50mL，稱重，超聲處理60分鐘，放冷至室溫，再稱重，加稀乙醇補足減失的重量。g）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程為：y=104，r=～，進樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證定量限測定結(jié)果進樣次數(shù)峰面積積分值平均值RSD%12455624412%224838324044424025524597標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證16小時內(nèi)穩(wěn)定性試驗結(jié)果6穩(wěn)定性取同一供試品溶液，按給定色譜條件測定16小時內(nèi)淫羊藿苷峰面積積分值，數(shù)據(jù)見表小時峰面積積分值平均值RSD%011954301181775%21171502411719506119025281164955101192283121181783141189009161178808標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證重復(fù)性試驗結(jié)果7精密度(批號:QLS050107)12份（低濃度3份，中間濃度6份，高濃度3份），按樣品溶液制備方法制備，依給定色譜條件測定含量試驗重復(fù)次數(shù)取樣量（g）含量（g/100g）平均值RSD%1%23456789101112標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證儀器精密度試驗結(jié)果同一供試品溶液，按給定色譜條件重復(fù)進樣6次，測定峰面積積分值進樣次數(shù)峰面積積分值平均RSD%123436922346074%2234524032348346423425145235077362345878標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證試驗3人采用3臺不同的設(shè)備對同一批（QLS050107批）樣品按樣品溶液制備方法制備，依給定色譜條件測定含量中間精密度試驗結(jié)果測定儀器測定結(jié)果（g/100g）平均RSD%1島津2010液相色譜儀%2AgiLent 1100液相色譜儀3島津2010/SPDM液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證8回收率分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液（精密稱取淫羊藿苷，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。按給定的色譜條件，分別精密吸取稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品溶液10μL，注入液相色譜儀，測得峰面積積分值。2. 市場概況：我國市場上有關(guān)大豆異黃酮類成分的中藥、天然藥物、植物提取物、保健食品（進口、國產(chǎn)）名目繁多，質(zhì)量參差不齊。3. 功能性低聚糖：包括水蘇糖、棉子糖、異麥芽酮糖、乳酮糖、低聚果糖、低聚木糖、低聚半乳糖、低聚乳果糖、低聚異麥芽糖、低聚異麥芽酮糖和低聚龍膽糖等。因此有目的增加腸道中有益菌的數(shù)量顯得十分必要。低聚糖的功能和保健作用1. 自然界含量少：u自然界中僅有少數(shù)幾種植物含有天然的功能性低聚糖,例如洋蔥、大蒜、天門冬、菊苣根等含有低聚果糖,大豆中含有大豆低聚糖。所以，大豆低聚糖類成分在近20年來逐漸引起國內(nèi)外廣泛的關(guān)注和研究，并迅速發(fā)展成為一種新型的保健食品。低聚果糖和大豆低聚糖的主要成分中文名稱英文名稱結(jié)構(gòu)特點蔗果三糖kestoseGF2蔗果四糖nystose,GF3蔗果五糖fructofranosylnystoseGF4蔗糖sucroseGF1棉籽糖kestoseGFGa1水蘇糖raffinoseGFGa2二、測定方法研究1. 目前低聚果糖和大豆低聚糖類成分常見的分析方法：u 紫外分光光度法u 高效液相色譜法2. 這些方法在準(zhǔn)確性、合理性、可操作性等方面均有欠缺，大多數(shù)方法只報道了測定其中1～2個成分的含量，不能較為全面地反應(yīng)產(chǎn)品的真實質(zhì)量。mL以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，計算其回歸方程，見表1。u但RID對溫度、壓力、流量等物理性變化較敏感，另外，使用RID時不宜梯度洗脫。要開發(fā)一個新的檢測方法，主要的工作在樣品。min1既可使低聚糖成分與其他可溶性糖進行有效分離,又可使保留時間縮短,一般一個樣品可在20min內(nèi)完成。方法，按樣品處理方法平行提取并同法測定6種成分的含量。（市售大豆低聚糖類保健食品，多為粘稠液體），用流動相溶液定容，充分搖勻，作為供試品溶液。min1；流動相由流動相水乙腈（30：70）等度進行洗脫，視差折光檢測器內(nèi)部溫度設(shè)為35℃；理論塔板數(shù)按蔗糖計算不低于2000。產(chǎn)品中低聚果糖總含量是指蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖和蔗果六糖占干物質(zhì)的百分含量，其中，蔗果六糖含量不得超過FOS總含量的5％，超過部分不計。2. 大豆低聚糖的生理作用主要是促進雙歧桿菌的增殖，從而起到調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的作用。而低聚糖能活化雙岐桿菌,使其合成營養(yǎng)素的能力增強。有研究表明:每天攝入10克低聚糖,連續(xù)服用10～15天,腸道內(nèi)的雙岐桿菌活菌數(shù)可增加40倍。4. 進一步驗證工作（耐用性考察，如儀器、色譜柱類型、流動相比例、柱溫、PH等）優(yōu)勢1. 簡便、快速、高效2. 經(jīng)濟實用3. 改善目前部分對照品嚴(yán)重缺乏的局面4. 新的質(zhì)量控制和評價思路尤其適合于天然藥物和保健食品等多功效成分的復(fù)雜體系擴展應(yīng)用——膽酸類成分測定（HPLCELSD）1 236 74 58 Minutes牛黃熊去氧膽酸 牛黃膽酸鈉 牛黃鵝去氧膽酸熊去氧膽酸 豬去氧膽酸 膽酸鵝去氧膽酸 去氧膽酸mV擴展應(yīng)用——低聚糖類成分測定（HPLCRID）1234 56 分鐘蔗糖（Sucrose）蔗果三糖（kestose）棉籽糖（Raffinose）蔗果四糖（Nystose）蔗果五糖（Fructofranosylnystose）水蘇糖（Stachyose）MV擴展應(yīng)用——PUFAs（ω3）類成分測定（HPLCELSD）123 分鐘二十碳五烯酸(EPA) 二十二碳六烯酸(DHA)二十二碳五烯酸(DPA)mV擴展應(yīng)用——馬兜鈴酸類成分測定（HPLCDADMS）T o ta l 4 : D io d e A r r a y100112 6 .2 3225 3 .3 65565 7 .5 02549 .6 5 e 53 2 .0 3444 7 .5 8%333 3 .1 62 .1 13T im e0 .0 0 5 .0 0 1 0 .0 0 1 5 .0 0 2 0 .0 0 2 5 .0 0 3 0 .0 0 3 5 .0 0 4 0 .0 0 4 5 .0 0 5 0 .0 0 5 5 .0 0 6 0 .0 0馬兜鈴酸C 7羥基馬兜鈴酸A 馬兜鈴酸D馬兜鈴酸B 馬兜鈴酸A 去硝基馬兜鈴酸A實例3RPHPLCRID法同時測定保健食品中6種常見低聚糖的含量提綱一．低聚糖的概況二．測定方法研究三．總結(jié)與討論一、低聚糖概況1. 低聚糖(Oligosaccharide)或稱寡糖，是由2～10個單糖通過糖苷鍵連接形成直鏈或支鏈的低度聚合糖，分功能性低聚糖和普通低聚糖兩大類。測定法精密吸取供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積積分值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算供試品溶液中淫羊藿苷的含量。，1mL，2mL，分別置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件測定，進樣量10μL，連續(xù)進樣5次，結(jié)果見下表。按給定的色譜條件，分別精密吸取稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品溶液10μL，注入液相色譜儀，測得峰面積積分值。：淫羊藿苷（批號：110737200414，中國藥品生物制品檢定所提供）。除非另有說明，在分析中僅使用重蒸水。g）作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 高效液相色譜流動相：乙腈水（26:74）。（乙醇546mL→1000mL），加入甲醇溶解并定容至25mL。在此范圍內(nèi)能準(zhǔn)確地定量測定待測物質(zhì)的濃度或量。檢測上限（maximumdetectability）指與標(biāo)準(zhǔn)曲線直線部分最高界點相應(yīng)的濃度值。5. 如果可能，用不同方法比較。常用標(biāo)準(zhǔn)差（S）或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示?；瘜W(xué)分析法u化學(xué)反應(yīng)的顏色、沉淀u重量分析216。 功效成分（或標(biāo)志性成分）需要限定范圍的，可按指標(biāo)值177。 與申報保健功能有關(guān)的功效成分216。食品國標(biāo)GB/T5009——2003216。保健食品功效成分檢測技術(shù)與