植物組織培養(yǎng)(存儲(chǔ)版)
【正文】 A. 增加細(xì)胞分裂和同步化； B. 減少細(xì)胞內(nèi)自由水的含量； C. 增強(qiáng)細(xì)胞的抗寒性。 4．降溫冰凍方法 (1) 快速冰凍法：將材料從 0℃ ，或者其他預(yù)處理溫度 (如木本植物的冬芽在 3℃ 一 10℃ 預(yù)處理 20天 )直接投入液氮。在這種降溫速度下，可以使細(xì)胞內(nèi)的水分有充足的時(shí)間不斷流到細(xì)胞外結(jié)冰，從而使細(xì)胞內(nèi)的水分減少到最低限度，達(dá)到良好的脫水效應(yīng)，避免細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰。因?yàn)槌蜏乇鶅霾牧匣瘍鰰r(shí)，再次結(jié)冰的危險(xiǎn)溫度區(qū)域大約是 —50℃ 至 — 10℃ 。 2)后代的形態(tài)特征及生長(zhǎng)發(fā)育狀況。 (2)將盛有材料的試管 插入冰浴中 ， 待溫度平衡后， 加入0℃ 預(yù)冷的冰凍保護(hù)劑 (10％ DMSO + mo1／ L 山梨糖醇 )，使保護(hù)劑稍淹過保存材料。先置于黑暗條件下培養(yǎng) 15— 30天，然后轉(zhuǎn)移到光照下培養(yǎng)。 (4)將切取的 莖尖分生組織接種于固體 B5培養(yǎng)基上，內(nèi)含／ L BA及 5%DMSO，光照 16小時(shí)，溫度 20℃ ／ 15℃預(yù)培養(yǎng) 48小時(shí)。 3周后可分化成苗。 (4)直接浸入液氮保存。 , February 2, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 上午 4時(shí) 13分 19秒 上午 4時(shí) 13分 04:13: 沒有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 2023年 2月 2日星期四 4時(shí) 13分 19秒 04:13:192 February 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 2023年 2月 2日星期四 上午 4時(shí) 13分 19秒 04:13: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 2023年 2月 2日星期四 上午 4時(shí) 13分 19秒 04:13: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 2023年 2月 上午 4時(shí) 13分 :13February 2, 2023 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 該方法也適用于愈傷組織及懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。在含 0。 (11)吸去混合液，并用 B 5培養(yǎng)基洗滌 4次。 (3)萌發(fā) 生長(zhǎng) 4— 5天后，在無菌條件下切取莖尖的分生組織， ，第 1對(duì)葉原基。 (5)化凍后，用 含 3％蔗糖的液體培養(yǎng)基洗滌 3次， 為減輕和避免滲透沖擊的傷害，培養(yǎng)液應(yīng)逐步加入。保存后的材料表現(xiàn)出較高的存活率。存在停滯期。 因此要使植物種質(zhì)的超低溫保存獲得成功，不僅要求有一個(gè)合適的降溫冰凍程序，而且還要求采取合適的化凍方法，以避免在化凍過程中產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)的次生結(jié)冰，并應(yīng)防止在化凍吸水過程中水的滲透沖擊對(duì)細(xì)胞膜體系的破壞。 以每分鐘 0. 110℃ 的降溫速度 (一般 1— 2℃ ／分較好 )。 但作為冰凍保護(hù)劑的物質(zhì)應(yīng)該具備以下特性： （ 1）易溶于水； （ 2）在適當(dāng)濃度下對(duì)細(xì)胞無毒； （ 3） 化凍后容易從組織細(xì)胞中去除。 (9) 遺傳性狀的分析：如植株的形態(tài)特征、生長(zhǎng)發(fā)育狀況、染色體、同工酶及抗逆性等。 (2) 預(yù)處理。但是如果在溶液中加入冷凍保護(hù)劑，則可保護(hù)細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷。不論是微生物、動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞還是體外培養(yǎng)的器官都可以進(jìn)行凍存，并在適當(dāng)條件下復(fù)蘇。 1949年 Polge發(fā)現(xiàn)甘油具有保存特性，標(biāo)志著低溫生物學(xué)的形成； 1980年 開始進(jìn)行玻璃化保存，開展超低溫保存研究。其中種質(zhì)資源的離體自 20世紀(jì) 60年代逐漸得到廣泛應(yīng)用。 二、超低溫保存的作用及意義 在低于 700C的超低溫條件下，有機(jī)體細(xì)胞內(nèi)部的生化反應(yīng)極其緩慢，甚至終止。這種因細(xì)胞內(nèi)部結(jié)冰而導(dǎo)致的細(xì)胞損傷稱為細(xì)胞內(nèi) 冰晶損傷 。冷凍保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞的冷凍保護(hù)效果還與 冷凍速率、冷凍溫度和復(fù)溫速率 有關(guān)。
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