基因工程載體-噬菌體載體(存儲版)
【正文】 用于插入目的基因的單個酶切位點； 4. ?噬菌體的 cos位點 。這是一類用于克隆大片段 DNA的載體，它是由 λ 噬菌體的cos（ cohesive）末端及質(zhì)粒（ plasmid）重組而成的載體。 Digestion Ligation C) Packaging and infect Formation of a cosmid clone Ligation to cleaved cosmid vector molecules can produce vectortarget concatemers, resulting in a large exogenous DNA fragment flanked by cos sequences. 采用柯斯質(zhì)粒作載體的困難 ① 載體自身只相當(dāng)于可以插入片段的 1/10左右，因此往往會出現(xiàn)載體同載體自身連接，結(jié)果在一個重組分子內(nèi)可有幾個柯斯質(zhì)粒載體連在一起。因此，插入柯斯質(zhì)粒的外源 DNA可大于 40kb。 噬菌體 的功能，而表現(xiàn) 質(zhì)粒 的特性。 ② 特點 PCR產(chǎn)物往往在 3’端突出一個 A，所以能與這個載體直接連接。 MCS 噬菌體 ori 質(zhì)粒 ori Ampr lacZ’ lacI 約 3000bp（比 M13小） ② 克隆能力大 能插入 10kb的外源 DNA。許多 M13載體的多克隆位點與質(zhì)粒載體 pUC序列的多克隆位點是相同的，在克隆位點選擇上更為方便。所以 M13噬菌體并不存在包裝限制的問題。 3. 克隆的外源基因片段不宜大于 1000bp。 重組噬菌體 的分子量必須在 野生型噬 菌體 分子量大小的 75%至 105%之間。 （ 3）凱倫噬菌體載體 既有插入型；又有替換型 在基因工程實驗中的用途十分廣泛 承受外源 DNA的能力：幾個 kb到 23kb （左右臂連接） （三段自身連接） （插入片段） （三）體外包裝 λ 噬菌體 DNA體外重組后，一般必須經(jīng)過體外包裝，然后以噬菌體感染的方式將重組 DNA導(dǎo)入 。 λ 噬菌體感染細菌后的溶菌性生長和溶源性生長 溶菌性生長 （ lytic pathway） 噬菌體感染細菌后 ， 借助其 2個 COS位點互補成環(huán) ， 在宿主菌體內(nèi)連續(xù)復(fù)制 ， 合成大量基因產(chǎn)物 ， 進而裝配成噬菌體顆粒 ， 裂解宿主菌 ， 釋放出來的噬菌體又可感染其他細菌 。 溶源周期中，注入寄主細胞的噬菌體 DNA是整合到寄主細胞染色體上并可以隨著寄主細胞的分裂而進行復(fù)制。 噬菌體 溫和噬菌體，具有溶源生長周期和溶菌生長周期 烈性噬菌體 ,只具有溶菌生長周期 分為兩種： （ 1） 溶菌周期： 噬菌體的生活周期 烈性噬菌體（ virulent phage) （ 2） 溶原周期： 感染細菌后，將自己的 DNA整合到細菌的染色體 DNA中。 λ噬菌體的基因組結(jié)構(gòu) 5‘CGGGGCGGCGACCTCG3’ 3’GCCCCGCCGCTGGAGC5’ Cleavage Ligation (during packaging) (after infection) GGGCGGGCGACCTCG3’ 5’CG + GC5’ 3’GCCCCGCCGCTGGA The phage ? cos ends Circular form Linear form （二） λ噬菌體載體的主要類型 （ 1） 插入式載體 一種只具有一個可供外源 DNA插入的克隆位點的 派生載體。 由于 λ 噬菌體包裝時，當(dāng) DNA的長度短于野生型的 78%或超過 105%時，噬菌體的活性就急劇下降。 。 M13噬菌體的特點 ?感染 Ecoli后，在宿主細胞內(nèi)會形成雙鏈的復(fù)制型ＤＮＡ（ replication f
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