【正文】 力；增強(qiáng)酶穩(wěn)定性；降低或消除酶蛋白抗原性需要選擇適宜的水溶性大分子作為修飾劑，而且須經(jīng)過活化側(cè)鏈基團(tuán)修飾采用一定的方法（一般為化學(xué)法）使酶蛋白的側(cè)鏈基團(tuán)發(fā)生改變，從而改變酶分子的特性與功能可用于研究酶的結(jié)構(gòu)和功能；可提高酶活力，增強(qiáng)酶穩(wěn)定性和降低抗原性；可獲得自然界不存在的新酶種會(huì)引起酶蛋白空間構(gòu)象的改變肽鏈有限水解修飾利用酶分子主鏈的切斷和連接，使酶分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變，從而改變酶的特性與功能探測(cè)酶活性中心位置；使原來不具活力的酶原顯示活性；提高酶活力；某些藥用酶可消除抗原性會(huì)引起酶蛋白空間構(gòu)象的改變，需要專一性較高的修飾劑氨基酸置換修飾將肽鏈上的氨基酸換成另一個(gè)氨基酸，從而改變酶的特性和功能提高酶活力；增強(qiáng)酶穩(wěn)定性；使酶專一性發(fā)生改變難度大，成本高，專一性差，逐個(gè)對(duì)酶分子進(jìn)行修飾操作復(fù)雜，難以工業(yè)化生產(chǎn)酶分子物理修飾在不同物理?xiàng)l件下，不改變酶的組成單位及其基團(tuán)，共價(jià)鍵不發(fā)生改變，只有副鍵發(fā)生某些變化和重排，來觀察了解酶特性和功能的變化情況可以了解不同物理?xiàng)l件下由于酶分子空間構(gòu)象的改變而引起酶的特性和功能改變情況；提高酶的催化活性、增加酶穩(wěn)定性或使酶催化動(dòng)力學(xué)發(fā)生改變共價(jià)鍵不改變？舉一個(gè)例子說明酶蛋白的主鏈修飾(肽鏈有限水解修飾)？某些酶在細(xì)胞內(nèi)合成或初分泌時(shí)沒有活性，這些沒有活性的酶的前身稱為酶原,使酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚悦傅淖饔梅Q為酶原激活。酶的體外定向進(jìn)化，又稱實(shí)驗(yàn)分子進(jìn)化，屬于蛋白質(zhì)的非合理設(shè)計(jì)，它不需事先了解酶的空間結(jié)構(gòu)和催化機(jī)制，通過人為的創(chuàng)造特殊的條件，模擬自然進(jìn)化機(jī)制（隨機(jī)突變、重組和自然選擇），在體外改造酶基因，并定向選擇出所需性質(zhì)的突變酶。？什么是易錯(cuò)PCR？策略：易錯(cuò)PCR，DNA改組，外顯子改組，雜合酶，PCR體外隨機(jī)引發(fā)重組，交錯(cuò)延伸，隨機(jī)定向突變。 4在有機(jī)介質(zhì)中進(jìn)行的酶促反應(yīng)，可以省略產(chǎn)物的萃取分離過程，提高收率?？赡嬉种苿阂种苿┡c酶蛋白以非共價(jià)方式結(jié)合，引起酶活性暫時(shí)性喪失。（名詞解釋）特點(diǎn)：1非競(jìng)爭(zhēng)抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)不一定與底物分子結(jié)構(gòu)類似；2底物和抑制劑分別獨(dú)立的與酶的不同部位相結(jié)合；抑制劑是與酶的活性中心以外的必需基團(tuán)結(jié)合而起作用的；3抑制劑對(duì)酶和底物的結(jié)合無影響，故底物濃度的改變對(duì)抑制程度無影響；抑制作用只取決于酶濃度、抑制劑濃度和Ki的大??；4動(dòng)力學(xué)參數(shù)：Km值不變。2. 什么是抗體酶？有什么特點(diǎn)？抗體酶制備的方法及其原理？抗體酶：具有催化能力的免疫球蛋白稱為催化抗體，即抗體酶。（3）引入法：借助基因工程和蛋白質(zhì)工程將催化基因引入到特異抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)上，使其獲得催化功能。4. 什么是分子印跡酶？分子印跡酶：通過分子印跡技術(shù)產(chǎn)生的類似于酶的活性中心的空腔，對(duì)第五產(chǎn)生有效的結(jié)合作用，可以再結(jié)合部位的空腔內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生催化基團(tuán)，并與底物定向排列，這樣產(chǎn)生的為分子印跡酶。機(jī)理酶模型：通過對(duì)酶作用機(jī)制諸如識(shí)別、結(jié)合和過渡態(tài)穩(wěn)定化的認(rèn)識(shí)，來指導(dǎo)酶模型的設(shè)計(jì)和合成。原理：用酶作為抗原免疫動(dòng)物得到抗酶的抗體，再將此抗體免疫動(dòng)物進(jìn)行單克隆化，獲得單克隆的抗抗體。分類：（1）剪接型核酶：I型內(nèi)含子、II型內(nèi)含子（2）剪切型核酶：自體催化的有錘頭核酶、發(fā)夾核酶、丁型肝炎病毒核酶；異體催化的有RNaseP。非競(jìng)爭(zhēng)性抑制：酶可同時(shí)與底物及抑制劑結(jié)合，引起酶分子構(gòu)象變化，并導(dǎo)致酶活性下降。2. 什么是不可逆抑制劑？什么是可逆抑制劑？如何區(qū)分這兩種抑制類型？不可逆抑制劑:抑制劑與酶的必需基團(tuán)以共價(jià)形式結(jié)合，引起酶活性喪失。 2由于引起沒變形的許多因素都與水的存在有關(guān)，因此在有機(jī)介質(zhì)中酶的穩(wěn)定性得到顯著提高。5目的基因鑒定：利用篩選和選擇方法確定有益的特性克隆。Km的變化：大多數(shù)酶經(jīng)修飾后，Vm沒有明顯變化，但有些酶經(jīng)修飾后，Km值變大。（最后大題，要求寫兩種方案）第8章 酶的修飾與改造1. 酶分子修飾的概念及其意義？通過各種方法使酶分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變，從而改變酶的某些特性和功能的技術(shù)過程稱為酶分子修飾。（3）包埋法：將酶或含酶菌體包埋在各種多孔載體中，使酶固定化的方法稱為包埋法。優(yōu)點(diǎn)是條件溫和，操作簡(jiǎn)單，制備過程中，活力損失較少。（3） 產(chǎn)物的分離純化較困難：酶反應(yīng)后成為雜質(zhì)與產(chǎn)物混合在一起，無疑給產(chǎn)物的進(jìn)一步分離純化帶來一定的困難。層析聚焦：將酶等兩性物質(zhì)的等電點(diǎn)特性與離子交換層析的特性結(jié)合在一起，實(shí)現(xiàn)組分分離。（2）電場(chǎng)膜分離：電滲析、離子交換膜電滲析；陽膜截留陰離子，陰膜截留陽離子。4. 酶沉淀分離的方法有哪些？鹽析沉淀、等電點(diǎn)沉淀、有機(jī)溶劑沉淀的原理。2. 細(xì)胞破碎的方法及其原理。7. 分析提高微生物產(chǎn)酶量的方法有哪些？（1）針對(duì)性地打破生物細(xì)胞內(nèi)酶蛋白的合成機(jī)制，可從兩方面入手：條件控制：發(fā)酵條件優(yōu)化：控制溫度、PH，優(yōu)化培養(yǎng)基，根據(jù)需求供給無菌空氣，掌控發(fā)酵周期，確定放罐時(shí)間，避免自溶。酶的阻遏：某些代謝物可以阻止某些酶的合成，是通過阻止為該酶編碼的基因的表達(dá)而進(jìn)行的，這種現(xiàn)象叫做酶合成的阻遏?；瘜W(xué)合成：特點(diǎn)是原料單體純度要求高、只可合成已知化學(xué)結(jié)構(gòu)的酶。（3） 應(yīng)具有良好的傳質(zhì)和混合性能。流化床式反應(yīng)器：將底物溶液以足夠大的流速，從反應(yīng)器底部向上通過固定化酶柱床，使固定化酶顆粒始終處于流化狀態(tài)，使反應(yīng)液的混合程度介于全混型和平推流型之間。種類（按分子大小分類）：（1）無機(jī)離子：無機(jī)陽離子——金屬離子（如鈉離子、鉀離子、鎂離子等）；無機(jī)陰離子（如氯離子、溴離子等）；氫離子。Km越小，酶與底物親和力越大。在酶促反應(yīng)中，酶首先和底物結(jié)合成不穩(wěn)定的中間配合物（ES），然后再生成產(chǎn)物（P），并釋放出酶。關(guān)系：具有四級(jí)結(jié)構(gòu)的酶，其功能可分為兩類：與催化作用有關(guān),與代謝調(diào)節(jié)有關(guān),酶蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)是酶具有催化功能的決定性部分，而高級(jí)結(jié)構(gòu)為酶催化功能所必需部分6. 什么是同工酶，舉例說明？指能催化相同的化學(xué)反應(yīng)，但酶蛋白本身的分子結(jié)構(gòu)組成及理化性質(zhì)不同的一組酶。4. 什么是酶的活性中心？活性中心的構(gòu)成？活性中心：是指酶分子中直接與底物結(jié)合并完成酶催化反應(yīng)的結(jié)構(gòu)區(qū)域，該部位化學(xué)基團(tuán)集中，并構(gòu)成一定空間構(gòu)象。2. 解釋酶作用專一性機(jī)制的學(xué)說有哪些？其核心內(nèi)容？（填空）鎖鑰假說：整個(gè)酶分子的天然構(gòu)象是具有剛性結(jié)構(gòu)的，酶表面具有特定的形狀。輕工業(yè)：用酶進(jìn)行原料處理；用酶生產(chǎn)各種輕工、化工產(chǎn)品；用酶增強(qiáng)產(chǎn)品的使用效果。人們開始接受“酶是具有生物催化功能的蛋白質(zhì)”。酶工程：利用酶的催化作用，在一定的生物反應(yīng)器中，將相應(yīng)的原料轉(zhuǎn)化成所需產(chǎn)品的一門工程技術(shù)。1878年，Kuhne首次將酵母中進(jìn)行乙醇發(fā)酵的物質(zhì)稱為酶。3. 了解酶在醫(yī)藥、食品、輕工業(yè)方