動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)常用技術(shù)(存儲(chǔ)版)
【正文】 導(dǎo)致前功盡棄。 污染物的檢測 ：1）涂片染色鏡檢；2）接種培養(yǎng)：Trypticase大豆肉湯、BHI、Thioglycocollate肉湯和血瓊脂板適于廣泛的細(xì)菌檢測；Sabouraud肉湯、YM肉湯和營養(yǎng)肉湯適于檢測真菌。 共培養(yǎng)法：與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)。冷凍速率太快或太慢都會(huì)造成細(xì)胞的損傷，只有以最適的冷凍速率冷凍細(xì)胞，才能獲得最佳的冷凍保存效果。 對大多數(shù)有核哺乳類動(dòng)物細(xì)胞來說，在不加冷凍保護(hù)劑的情況下，無最適冷凍速率可言，也不能獲得活的凍存物。從實(shí)際和效益的觀點(diǎn)出發(fā)，液氮溫度（﹣196℃）是目前最佳冷凍保存溫度。冷凍保護(hù)劑 冷凍保護(hù)劑是指可以保護(hù)細(xì)胞免受冷凍損傷的物質(zhì)，常被加到一定的溶液中進(jìn)行配制，作為冷凍保護(hù)液。要獲得好的凍存與復(fù)蘇效果，必須了解如下幾個(gè)問題：冷凍速率、復(fù)溫速率、冷凍保護(hù)劑，冷凍保存溫度。3）放射自顯影檢測：4）DNA分子雜交： 檢測完畢后，所有實(shí)驗(yàn)用具均應(yīng)經(jīng)過高壓消毒處理。3)光鏡觀察到菌絲和顆粒。另外也可能在生物進(jìn)化過程中DNA分子結(jié)構(gòu)發(fā)生重排，使DNA堿基排列序列改變，影響內(nèi)切酶切點(diǎn),使內(nèi)切酶酶切片斷呈多態(tài)性。細(xì)胞克隆技術(shù) 培育細(xì)胞系可采用細(xì)胞克隆技術(shù)。 4）容積、深度、表面面積：~。4）螯合劑解離細(xì)胞法：分離效果差原代細(xì)胞培養(yǎng) 1）外植塊培養(yǎng)：外植塊在一定限度內(nèi)可保持其原有組織結(jié)構(gòu)，有利于其適應(yīng)體外培養(yǎng)環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法 、細(xì)胞的解離方法 解離組織：在無菌情況下采取動(dòng)物的組織或器官，放在含有抗生素的平衡鹽溶液(BSS)中，然后盡快在超凈臺或無菌室內(nèi)進(jìn)行解離處理?？筛鶕?jù)培養(yǎng)細(xì)胞的特殊要求進(jìn)行添加。 由于不同的研究目的，血清成分往往干擾研究實(shí)驗(yàn)，如進(jìn)行藥物和受體及營養(yǎng)等方面的研究時(shí)，需要使用無血清培養(yǎng)基。~%，且受細(xì)胞種類培養(yǎng)液成分、pH、溫度等影響。 ： 自發(fā)性轉(zhuǎn)化（Spontaneous Transformation）：其標(biāo)志是獲得永生性（Immortality）或惡性性（Malignancy）: 細(xì)胞獲持久性增殖能力，這樣的細(xì)胞群體稱無限細(xì)胞系(Infinite cell line)或連續(xù)細(xì)胞系(Continuous cell line)。不適應(yīng)（Deadaption） 細(xì)胞在體內(nèi)時(shí)所擁有的分化特性減弱或不顯。組織培養(yǎng)中熱門的研究領(lǐng)域 1)細(xì)胞內(nèi)部的活動(dòng)，如DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)合成、能量代謝；2)細(xì)胞內(nèi)部的流動(dòng)，如RNA從細(xì)胞核向細(xì)胞質(zhì)方向運(yùn)轉(zhuǎn)，激素受體復(fù)合物的易位等；3)生態(tài)學(xué)，如營養(yǎng)、感染、病毒或化學(xué)誘變、藥物作用；4)細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用，如胚胎誘導(dǎo)、細(xì)胞群體的動(dòng)力學(xué)等。許多細(xì)胞株、細(xì)胞系的培育成功，尤其是以人的腫瘤組織為材料建立的各種細(xì)胞系，如Hela細(xì)胞系（Gey，1952），可用來進(jìn)行一系列研究，更加促進(jìn)了組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展。 培養(yǎng)細(xì)胞的分化 細(xì)胞分化機(jī)制是極其復(fù)雜的，是在細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與體液和細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互作用下，眾多基因參與、經(jīng)過多階段和多環(huán)節(jié)
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