細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)入門(存儲版)
【正文】 Ⅰ 型膠原酶： ％ Ⅰ 型膠原酶溶液同胰蛋白 酶一樣配制和消毒滅菌。 微米 和 微米濾膜各一張，放置位置為 的位于 微米的濾膜上方，并且要特別注意濾膜光面朝上。 ：注意取出細(xì)胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細(xì)胞。 ，加入新 培養(yǎng)液：棄去上清液，加入 2ml 培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。 傳代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項： ：消化的時間受消化液的種類、配制時間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響，消化過程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化，一旦胞質(zhì)回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。 氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時核對管外的編號。 ，導(dǎo)致傳熱不佳，使融化時間延長。 ：將待測細(xì)胞懸液吹均勻，然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入，要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。 五 .初學(xué)者易犯的錯誤： 1. 計數(shù)前未將待測懸液吹打均勻。 。 ，及時添加。 20℃ 冰箱，約 3060min。如果細(xì)胞壓在格線上時，則只計上線，不計下線，只計右線，不計左線。 三 .細(xì)胞計數(shù)： ：取一套血球計數(shù)板，將特制的蓋玻片蓋在血球計數(shù)槽上。 七 .培養(yǎng)細(xì)胞 將復(fù)合細(xì)胞計數(shù)要求的細(xì) 胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi)，將培養(yǎng)瓶放入 37℃ 和 5％ CO2 的培養(yǎng)箱內(nèi) 24 小時（或者 2448 小時）后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時間由細(xì)胞情況而定。 、吸管、培養(yǎng)瓶等等。傳代細(xì)胞 2 小時后開始貼附在瓶壁上。 ：將細(xì)胞懸液吸入 10ml離心管中。 ，放入微波爐內(nèi)高火， 8 分鐘再次消毒。其次要注意即使是 ，明膠也難溶，因此要充分搖勻，過夜放置，然后無菌分裝入 50ml 小瓶中， 4℃ 保存。因為現(xiàn)在市售的多為肝素鈉，包裝為約為 克 /瓶，配制時，可將其溶于 100ml 三蒸水中，定容，過夜，然后過濾除菌，分裝小瓶，保存溫度為 ℃ 。 八 .谷氨酰胺： 合成培養(yǎng)基中都含有較大量的谷氨酰胺，其作用非常重要，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白質(zhì)，谷氨酰胺缺乏要導(dǎo)致細(xì)胞生長不良甚至死亡。 七 .HEPES 溶液： HEPES 的化學(xué)全稱位羥乙基呱嗪乙硫磺酸（ N’ ahydroxythylpiperazineN’ ethanesulfanic acid ）。最后定容至 1000ml，搖勻。然后分裝成小瓶于 20℃ 保存以備使用。不同的組織或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣。 ，不能留有氣泡，以防止泡酸不徹底。其法即用沾水筆或毛筆沾以密寫墨水，在包裝紙上作一記號，平時 __這種墨水不帶痕跡，一經(jīng)高溫，即出現(xiàn)字跡，從而可以判定它們是否消毒。然后再泡入鹽酸液 30 分鐘，再用自來水，蒸餾水，三蒸水洗凈，烘干。金屬器械洗消： 金屬器皿不能泡酸，洗消時可先用洗滌劑刷洗，后用自來水沖干凈，然后用 75％酒精擦拭，再用自來水，然后用蒸餾水沖洗，再烘干或空氣中晾干。 、清洗：用清潔液（重鉻酸鉀 120g：濃硫酸 200ml：蒸餾水 1000ml）浸泡 12 小時，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來水沖洗 15 次，最后蒸餾水沖洗 35 次和用雙蒸水過 3 次。 無菌操作的演示： 、 PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用 75％酒精擦拭瓶子的外表面 。細(xì)胞培養(yǎng)從頭學(xué) 從最基礎(chǔ)的地方教起，一步一步詳細(xì)介紹細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，非常好的開門教程 常用設(shè)備 準(zhǔn)備室的設(shè)備： 單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜（放置未消毒物品）、儲品規(guī)（放置消毒過的物品）、包裝臺。 、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋 75％酒精棉球擦凈雙手。 、烘干： 12 小時后立即用自來水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來水沖干凈后用烤箱烘干。（玻璃培養(yǎng)瓶消毒前可將膠帽輕輕蓋上） ：因為高壓消毒后器皿會被蒸氣打濕，所
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